鸡新城疫活疫苗（Lasota株）生产种毒的保存期试验

对3批置-70℃超低温冰箱的鸡新城疫(Lasota株)生产种毒进行保存期试验，检测结果表明，种毒在-70℃保存5年，病毒含量、免疫原性、安全性均达到规程要求，分别用该3批种毒生产9批鸡新城疫抗原病毒含量检测均≥108.83EID50/0.1ml，高于国家标准(国标>107.0EID50/0.1ml)，因此鸡新城疫(Lasota株)生产种毒在-70℃存放保存期至少为5年。     

狂犬病病毒（Flury株）鸡胚低代毒（LEP）毒种的保存期试验研究及免疫原性测定

采用小鼠脑内接种法对保存不同年代的5批狂犬病病毒(Flury株)鸡胚低代毒(LEP)毒种进行病毒含量测定,并将每批毒种分别肌肉注射3月龄健康易感犬,21 d后采用小鼠脑内中和试验和荧光抑制试验分别测定犬血清抗体效价,评价毒种的免疫原性。结果显示,5批毒种每0.03 mL的病毒含量分别为104.67LD50、104.67LD50、103.5LD50、103.5LD50、104.17LD50;5批毒种免疫的10只犬血清抗体效价采用两种方法测定均达到1∶32以上,结果表明狂犬病病毒(Flury株)毒种在-70℃保存12年病毒含量仍符合标准规定,并保持有良好的免疫原性。     

鸡新城疫CS_2株与4株疫苗毒株有关性能的比较

对鸡新城疫病毒 (NDV)中等毒力毒株 CS2 株、ND 系、Rokin、Komerov和低毒力La Sota株病毒的脑内致病指数 (ICPI)、鸡胚的半数感染量 (EID50 )等指标进行了测定 ,结果是 ICPI分别为 1 .2 7～ 1 .52、1 .66～ 1 .70、1 .46、1 .43和 0 .2 9～ 0 .5;EID50 分别为 1 0 7.5、1 0 7.5、≥ 1 0 8.5、1 0 7.9和≥ 1 0 8.5/0 .1 ml。用 1 0倍剂量的 CS2 株病毒注射 1月龄和 1 .5月龄 SPF雏鸡 ,均安全无不良反应。测定 CS2 株病毒保存期 ,结果在 - 2 0℃保存 6年的鸡胚 2代 (E2 )、鸡胚 6代 (E6)、鸡胚 1 0代 (E10 )毒的 EID50 均≥ 1 0 7.5/0 .1 ml。ND CS2 株病毒的各项指标均在中等毒力范围内 ,对鸡胚的半数感染量仍保持原毒 ( 系 )的特性 ,ICPI比原毒有所下降。与 NDV Rokin、Komerov毒株相比 ,0 .1 ml鸡胚液中病毒含量较低 ,对鸡胚的毒力较强 ,ICPI没有明显差别     

鸽副黏病毒灭活疫苗候选株aYQ的生物学特性研究

评价鸽副黏病毒(PPMV)致弱毒株aYQ的生物学特性,为研制鸽副黏病毒灭活疫苗奠定基础。将PPMV aYQ株经SPF鸡胚连续传代,建立种子批。测定各代次毒种的血凝效价(HA)和鸡胚半数感染量(EID50),并进行纯净性检验;测定毒种鸡胚最小致死量的平均死亡时间(MDT)、1日龄鸡脑内接种致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI);测定毒种对鸡胚和鸽的毒力、遗传稳定性和抗原相关性。PPMV aYQ株经SPF鸡胚传代至F10,HA效价为1∶256～1∶512,病毒含量为10-8.5 EID50/0.1mL～10-8.9 EID50/0.1mL,毒种各代次均无细菌、霉菌、支原体以及外源病毒污染;PPMV aYQ株的ICPI和IVPI结果均为0,MDT测定结果大于120h;以103倍稀释的PPMV aYQ株病毒液接种10日龄SPF鸡胚96h无死亡,无眼观病变。以106EID50/羽的剂量人工感染鸽,未见异常症状;PPMV aYQ株各代次F基因均未发生基因突变,F蛋白裂解位点氨基酸序列均为-112GRQGRL 117-;交叉血凝抑制试验和交叉中和试验结果表明,PPMV aYQ株与NDV La Sota株间存在明显的抗原性差异。鸽副黏病毒弱毒株aYQ能够在SPF鸡胚上稳定传代,且生物学特性稳定,免疫原性良好,可以作为鸽源副黏病毒灭活疫苗的毒种。     

鸡新城疫耐热冻干保护剂活疫苗试验

用耐热冻干保护剂冻干的鸡新城疫（LaSota系）活疫苗，在37℃环境下放置14d，疫苗的病毒含量EID50由10^9.1下降为10^8.1，在4℃环境下放置1年半，疫苗的病毒含量基本不变。     

国家三类兽用新生物制品 鸡新城疫低毒力活疫苗（ZM10株）

我国普遍采取疫苗接种控制鸡新城疫．且取得了一定的效果，但仍有免疫失效而爆发鸡新城疫的报道.针对这个问题．世界各国均投入大量的精力开发最佳的疫苗和免疫程序．1955年国际兽疫局（OIE）推荐使用的鸡新城疫弱毒疫苗为缓发型（Lentogenic strain）HB1株（Hitchner,1948）．La Sota株（Bandette，1949）和F株（Aspfin，1952），各国（包括中国）应用最广泛的是HB1和La Sota株。然而在过去的40多年里．这些活苗配合灭活油乳剂苗单独或联合应用．     

鸡传染性支气管炎（嗜肾型）活疫苗（W93株）的研究

从国内发病鸡群中分离到鸡传染性支气管炎（嗜肾型）病毒（NIBV），并培育成弱毒W93株。自1994年，我们对该毒株进行了鉴定和活疫苗的研制，结果证明W93株具有特异性强，良好的安全性和免疫原性，病毒含量不低于10^8.0EID50/0.1ml.通过实验室试验和现场应用证明，具有较高的免疫保护率和安全性。     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒（IBV—D971株）致弱的研究

将IBV-D971株病毒在SPF鸡胚上连续传至120代,培育出了一株毒力明显减弱,并且具有良好免疫原性的腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒弱毒株(IBV-D971株).IBV-D971 F105代毒力明显下降,以109.25EID50接种1日龄SPF鸡5/5无不良反应.IBV-D971 F105代毒连续通过1日龄SPF鸡体5代,未见毒力返强.以103EID50免疫1日龄SPF鸡,攻毒后5/5保护,对照5/5发病.     

鹅源副粘病毒NA-1株与鸡新城疫病毒F48E9株的抗原变异关系分析

对鹅源副粘病毒NA-1株和鸡新城疫病毒F48E9株进行鸡胚半数感染量（EID50）与半数细胞感染量（TCID50）的测定,并采用交叉血凝抑制试验、鸡胚交叉中和试验、细胞交叉中和试验、交叉动物保护试验的比较,确定2种抗原的抗原比值和相似程度。结果表明：前3个交叉中和试验的R值分别为0.446、0.50、0.56,表明2毒株确实存在抗原差异;交叉动物保护试验说明,对制苗毒株的保护率高于非制苗毒株,提示仅采用新城疫疫苗很难有效预防鹅副粘病毒病,应倡导用现地分离的毒株制苗。     

鸡胚母源抗体对鸡新城疫病毒增殖影响的研究

试验用SPF鸡胚和普通鸡胚分别测定鸡新城疫LaSota两种不同毒株的EID50:LaSota株Ⅰ在SPF鸡胚的EID50为10-7.75,普通鸡胚的EID50为10-7.25;LaSota株Ⅱ在SPF鸡胚的EID50为10-4.75,普通鸡胚的EID50为10-4.25。两种不同LaSota毒株在SPF鸡胚中的毒力普遍比在普通鸡胚中的毒力强,说明鸡胚母源抗体能影响鸡新城疫病毒的增殖,进而指导疫苗的生产。试验用SPF鸡胚和普通鸡胚分别测定鸡新城疫LaSota两种不同毒株的EID50:LaSota株Ⅰ在SPF鸡胚的EID50为10-7.75,普通鸡胚的EID50为10-7.25;LaSota株Ⅱ在SPF鸡胚的EID50为10-4.75,普通鸡胚的EID50为10-4.25。两种不同LaSota毒株在SPF鸡胚中的毒力普遍比在普通鸡胚中的毒力强,说明鸡胚母源抗体能影响鸡新城疫病毒的增殖,进而指导疫苗的生产。     

鸭坦布苏病毒病活疫苗（FX2010-180P株）毒种保存期的研究

鸭坦布苏病毒病是新发的一种以蛋鸭产蛋下降为主要特征的传染病,目前仍没有疫苗可预防和控制该病。将鸭坦布苏病毒强毒（FX2010株）在鸡胚成纤维细胞（chicken embryo fi broblasts,CEFs）上连续传代培养180代,获得1株致弱毒株（FX2010-180P株）,利用该弱毒株研制了鸭坦布苏病毒病活疫苗。本研究为了测定鸭坦布苏病毒病活疫苗（FX2010-180P株）毒种的保存期,将-80℃条件下保存了16个月的原始种子批和基础种子批各取3支,进行纯净性检验、鉴别检验以及病毒滴度测定。结果表明,各批次毒种在保存16个月后,病毒纯净无污染,病毒滴度没有明显下降。把基础种子在CEFs上增殖后,低剂量接种鸭子,检验毒种的免疫原性。结果显示,用毒种增殖的病毒免疫原性良好,101.5和102.5 TCID50的剂量可以为接种鸭提供90%和100%的保护。     

鸽新城疫野毒株的分离及生物学特性研究

对分离的Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３３株鸽新城疫病毒进行了电镜检查、致病性指数测定、血凝试验（ＨＡ）,与鸡新城疫Ｌａｓｏｔａ毒株的交叉血凝抑制试验（ＨＩ）、致病性试验。测得鸡胚半数感染量（ＥＩＤ５０）分别为１０－８．４１,１０－７．５３,１０－７．８３;鸡胚最小致死量（ＬＤ）均为１０－４;鸡胚平均致死时间（ＭＤＴ）分别为８０ｈ,９０ｈ,９６ｈ;１日龄雏鸡脑内致病指数（ＩＣＰＩ）分别为１．６０,１．５０,１．５５;分离毒株与Ｌａｓｏｔａ毒株和其相应血清的交叉凝集抑制试验有明显差异。将分离毒株分别接种１月龄鸽各３只,４～１０ｄ全部出现典型神经症状,１５ｄ内死亡。结果表明所分离的３株病毒为鸽新城疫病毒,在抗原性上与鸡新城疫病毒存在一定差异,对鸡也有一定致病力。为制定防制措施,研制鸽新城疫疫苗,控制新城疫流行提供了科学依据。     

川西獐牙菜等植物种子活力的比较研究

将川西獐牙菜(Swertia mussotii Franch),椭圆叶花锚(Halenia elliptica Don),抱茎獐牙菜(Swertia frachetana H-Smith),湿生扁蕾Gentianopsis paludosa(mumro)Ma的种子贮存在(18℃±5℃)和(0～4℃)下18个月。用0.2%CaCl2和2%KNO-3-溶液浸泡24h,进行电导率,TTC还原量及发芽率测定,结果表明:①两种温度贮存的种子,除电导率差异极显著外(p0.01),其余各项指标均不显著(p0.05);②药剂处理除对湿生扁蕾外其它种子都有提高发芽率的作用,0.2%CaCl2-效果最好,发芽率平均提高20%;③同种温度下贮存的种子,药剂处理后TTC还原量、电导率差异不显著(p0.05)。     

测定鸡传染性法氏囊病活疫苗（B87株）参考品有效期的经典热加速稳定试验

采用热加速稳定性试验,以鸡胚半数致死量测定法对制备的参考疫苗进行病毒含量测定,预期其贮存有效期。根据Arrhenius方程,以不同温度下衰减速率常数K估算较低温度下K值,并计算参考疫苗在-30℃下贮存效力值下降一个滴度所需的时间约为2．4年。     

猪源副黏病毒HX01株分离鉴定、全基因测序与遗传变异分析

从陕西省户县某猪场患流感样症状病死仔猪肺脏分离得到1株副黏病毒,命名为猪源副黏病毒（PPMV）HX01株,对分离毒株鉴定后进行部分生物学特性研究和全基因测序分析。参考PPMV JL-1株基因组序列设计10对引物,对PPMV HX01株分段扩增并测序,将测序成功的各序列依次拼接得到全基因序列并进行序列比对。该病毒MDT为91.2h,ICPI和IVPI为0,EID50为10-10.25/mL,表明该毒株属于新城疫弱毒株。序列分析结果表明,PPMV HX01株（全基因序列GenBank登录号：JF795531）与NDV参考毒株全基因核苷酸同源性83.3%～99.8%,该病毒与基因Ⅱ型我国传统弱毒疫苗株La Sota全基因水平和各个基因编码开放阅读框的同源性均在99.5%以上,而与基因Ⅸ型国家标准强毒株F48E9和目前流行的基因Ⅶ型毒株亲缘关系较远。     

Persistence of exotic Newcastle disease virus (ENDV) in laboratory infected Musca domestica and Fannia canicularis

House flies (Musca domestica) and little house flies (Fannia canicularis) were examined for their ability to take up and harbor a velogenic strain of exotic Newcastle disease virus (ENDV) (family Paramyxoviridae, genus Avulavirus). Laboratory-reared flies were allowed to feed on evaporated milk containing ENDV at a virus concentration of 10(8.3) egg infectious dose (EID)50/0.1 ml or on poultry feces containing an ENDV titer of 10(5.8) EID50/0.1 g. Flies exposed to either infectious food source for 24 hr became transiently infected with virus. Virus persisted predominantly in the mid- and hindgut, with relatively little virus isolated from the remainder of the fly body. Virus persisted similarly in both fly species that were fed evaporated milk containing ENDV, with a maximum ENDV titer of 10(5.98) EID50/fly for the house fly and 10(4.78) EID50/fly for the little house fly at 1 day postexposure; titers decreased on subsequent days to 10(2.38) EID50/fly for house fly and > or = 1 EID50/fly for little house fly at 5 days postexposure. Both fly species acquired viral titers greater than the infective dose for a susceptible chicken (10(3.0) EID50-10(4.0) EID50). In addition, flies fed evaporated milk containing a high titer of ENDV maintained viral titers above the infective dose for up to 4 days postexposure to the infectious food source. Flies fed on infective feces retained a chicken infective dose for only one day. The decrease in viral titer over time was significantly explained by logistic regression for both fly species (P < 0.05). The slope of the regression line was not different for the two fly species (P < 0.05), indicating a similar rate of virus loss.     

Newcastle disease vaccination of broilers with high- and low-titered commercial vaccines

The virus titers of seven commercial B1 strain Newcastle disease vaccines were evaluated. A 2 log difference in virus content was found between the vaccine with the highest titer (10(8.8) EID 50/ml) and the one with the lowest titer (10(6.8) EID 50/ml). Broiler chickens were vaccinated with the high- and low-titered vaccines to compare hemagglutination-inhibition (HI) antibody and challenge responses. The effect of vaccination at different ages on the HI titers was also examined. There were no significant differences between vaccine groups in HI antibody response or resistance to challenge. However, the high-titered vaccine may provide a margin of safety with the currently used methods of mass vaccination.     

苜蓿籽蜂越冬虫态对温度的敏感性

本研究将当年收获的苜蓿（Medicago sativa）种子储存于4个温度条件下,采用定期剖种的方法,调查苜蓿籽蜂（Bruchophagus roddi）的越冬虫态及其存活情况。结果表明,苜蓿籽蜂主要以3龄幼虫在苜蓿种子内滞育越冬。10月从田间将苜蓿种子收回,储存温度在18.0 ℃、平均湿度为27.2%（10―12月）时,越冬幼虫于当年12月下旬开始化蛹;储存温度在9.9 ℃,平均湿度为40.1%（10月―次年2月）时,越冬幼虫于次年2月下旬开始化蛹。不同温度和不同时间梯度处理苜蓿种子结果表明,在50 ℃、-30 ℃条件下处理1 d,籽蜂幼虫的死亡率均达100%,苜蓿种子的发芽率分别为93.33%和88.33%。     

马流感病毒A/Equine/Huabei/01/07(H3N8)对灵缇犬的实验性感染

为了解灵缇犬对马流感病毒A/Equine/Huabei/01/2007(H3N8)的易感性,将马流感病毒培养液以1.0 mL(含105.7EID50)经静脉途径接种4条灵缇犬,另以2.0 mL(含2×105.7EID50)经滴鼻、点眼方式接种3条灵缇犬。采用临床症状和病理学观察、免疫酶组织化学染色技术、病毒分离、HI抗体检测和流感病毒受体类型检测技术,对病毒在灵缇犬体内的感染情况进行了系统研究。结果表明,感染的7条犬在整个试验观察期间体温等临床指标均无异常变化,未见明显的肉眼和组织学病变。感染后5 d,4条感染犬的气管、支气管和细支气管上皮细胞内流感病毒M蛋白均为阳性,1条犬的咽拭子病毒分离结果为阳性,1条犬的马流感病毒H3亚型HI抗体阳性。感染后14d,剩余3条感染犬中有2条犬马流感病毒H3亚型HI抗体呈阳性。试验证明,目前流行的A/Equine/Huabei/01/2007(H3N8)病毒可以感染灵缇犬,但不导致灵缇犬出现明显的临床症状。灵缇犬的喉头、气管上皮细胞具有与马流感病毒结合的SAα2,3 Gal受体。     

Susceptibility and protection of naive and vaccinated racing pigeons (Columbia livia) against exotic Newcastle disease virus from the California 2002-2003 outbreak

The susceptibility, immune response, and protection to challenge after vaccination in racing pigeons (Columbia livia) was assessed with the 2002-2003 exotic Newcastle disease (END) virus responsible for the most recent major outbreak in Southern California. Immunologically na?ve pigeons appeared resistant to disease, regardless of dose, after a natural route of exposure. Twenty percent morbidity was observed in each group of birds receiving between 10(2.1) and 10(8.1) 50% embryo infectious dose (EID50) per bird, with one bird succumbing to challenge in the 10(8.1) EID50/bird group at day 12 postinoculation. Although resistant to disease, birds in all groups continued to shed virus from either oral or cloacal route at the end of the 14-day sampling period, and seroconversion was only observed in birds receiving > or =10(6.1) EID50. Single or double vaccination of juvenile and adult birds with pigeon paramyxovirus virus type 1 (PPMV-1) vaccine followed by END challenge with 10(6.1) EID50/bird decreased the duration, incidence, and viral load. A positive correlation was observed between the presence of hemagglutination-inhibiting antibody titers at challenge and decreased viral shedding. Overt clinical signs of disease were not observed in any PPMV-1-vaccinated birds after challenge.