鸡促性腺激素释放激素对鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响

用不同剂量鸡促性腺激素释放激素（ｃＧｎＲＨ－Ｉ和ｃＧｎＲＨ－Ⅱ）单独或与鸡ＬＨ（ｃＬＨ）协同处理短期（３ｈ）培养的鸡卵泡颗粒细胞，以观察鸡ＧｎＲＨ对颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果表明：随着卵泡的成熟，孕酮分泌量逐渐增加，到Ｆ１卵泡时增加最明显；在本实验所用细胞孕酮分泌都有明显促进作用，ＧｎＲＨ－Ⅱ使Ｆ２至Ｆ４卵泡颗粒细胞孕酮分泌量有增加，而对Ｆ３卵泡颗粒细胞作用量明显，用鸡ＧｎＲＨ－Ⅱ的促进作用更明     

同源GnRH对鸡卵泡颗粒细胞增殖的影响

在建立鸡卵泡颗粒细胞无血清单层贴壁培养模型的基础上,用鸡促性腺激素释放激素(GnRH-Ⅱ)单独处理,或同时加入 GnRH 拮抗物(GA)或与羊 LH(oLH)协同处理,继续培养48 h 之后,用胰蛋白酶分别消化成单个细胞然后计数。获得结果是:GnRH-Ⅱ能刺激颗粒细胞增殖,同时加入 GA 能阻断 GnRH-Ⅱ的效果;单独加入 oLH 处理能刺激细胞增殖,在加入GnRH-Ⅱ,同时再加入 oLH 处理,其细胞增殖数明显低于单独用 oLH 处理的细胞增殖数目。     

鸡促性腺激素释放激素对鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响

用不同剂量鸡促性腺激素释放激素(cGnRH-Ⅰ和 cGnRH-Ⅱ)单独或与鸡 LH(cLH)协同处理短期(3h)培养的鸡卵泡颗粒细胞,以观察鸡 GnRH 对颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果表明:随着卵泡的成熟,孕酮分泌量逐渐增加,到 F_1卵泡时增加最明显;在本实验所用剂量范围内,鸡 GnRH 对颗粒细胞孕酮分泌有促进作用,其中 GnRH-Ⅰ对 F_1至 F_4卵泡颗粒细胞孕酮分泌都有明显促进作用,GnRH-Ⅱ使 F_2至 F_4卵泡颗粒细胞孕酮分泌量有增加,而对F_3卵泡颗粒细胞作用最明显,用鸡 GnRH 预处理30min 能加强鸡 LH 对鸡卵泡的颗粒细胞孕酮分泌的促进作用,其中 GnRH-Ⅱ的促进作用更明显。     

鸡促性腺激素释放激素对卵泡膜分泌雌二醇的影响

本实验选用性成熟的京白种蛋鸡,从同一产蛋顺序中取其发育不同阶段的各级卵泡(F_1～F_4),分离膜层,消化为单个的膜细胞,进行短期细胞培养,着重观察鸡促性腺激素释放激素(GnRH)对培养过程中膜细胞雌二醇分泌的影响.用放射免疫法测定细胞培养液中雌二醇的含量,得到以下结果:①未加外源激素处理的对照组细胞,随着卵泡从小到大的发育成熟过程,膜细胞雌二醇的分泌量逐渐降低;②适当剂量的鸡 GnRH-Ⅱ对各级卵泡膜细胞雌二醇的分泌均有促进作用,其中 F_4,F_3,F_2比 F_1更敏感;③加前体物(孕酮或雄烯二酮)之后,再加鸡 GnRH-Ⅱ比单加前体物或单加鸡 GnRH-Ⅱ,膜细胞雌二醇的分泌量增加更明显.实验结果提示,在体外细胞培养的条件下,GnRH-Ⅱ对膜细胞雌二醇的分泌不仅有促进作用,还可能促进雌二醇的合成。     

胰岛素样生长因子-I对鸡等级前卵泡发育的促进作用

 【目的】探讨胰岛素样生长因子-I（IGF-I）对产蛋鸡等级前卵泡发育的影响。【方法】用免疫组化和RT-PCR法检测IGF-I受体在鸡等级前卵泡中的表达,研究IGF-I对鸡早期卵泡发育的影响。【结果】IGF-I受体在等级前卵泡颗粒层和膜层均有表达,且随着卵泡的发育其表达水平逐渐增高,在小黄卵泡(SYF)阶段达到最大;同时,卵泡体外培养结果表明IGF-I（100 ng•mL-1）、FSH（10 n•mL-1）及IGF-I+FSH处理可显著增加SYF中膜层和颗粒层的厚度及细胞密度,且IGF受体在颗粒层和膜层中的表达水平也显著增加,其中以IGF-I+FSH联合处理组的效果最为显著。【结论】IGF-I能显著提高产蛋鸡SYF颗粒层和膜层的细胞数目以及厚度,同时增加IGF-I受体的表达,并可与FSH联合作用以提高IGF受体的表达,促进鸡卵泡细胞的增殖,进而调节鸡等级前卵泡的发育,此结果有助于揭示家禽卵泡发育的局域性内分泌调节作用。     

HOPX基因过表达对鸡前脂肪细胞增殖的影响

【目的】构建鸡HOPX基因（homeodomain only protein X）全长编码区（coding region sequence, CDS）的真核表达载体,转染鸡原代前脂肪细胞,探讨HOPX基因过表达对鸡原代前脂肪细胞增殖的影响。【方法】利用Primer Premier 5.0软件设计鸡HOPX基因CDS区上、下游引物,以AA肉鸡腹部脂肪组织的cDNA为模板,采用PCR扩增、克隆鸡HOPX基因全长CDS区,并将其亚克隆至真核表达载体（pCMV-HA vector）,获得HOPX基因的真核表达载体pCMV-HA-HOPX。采用双酶切鉴定、测序及Western blotting方法分析鉴定pCMV-HA-HOPX。采用胶原酶法分离培养12日龄AA商品肉仔鸡腹部脂肪组织原代前脂肪细胞,瞬时转染pCMV-HA-HOPX,转染6 h时后消化细胞,按照每孔50 000个细胞数接种12孔培养板,并在细胞贴壁0、24、48和72 h,分别采用显微镜观察和CCK-8细胞增殖检测试剂盒分析HOPX基因过表达对鸡原代前脂肪细胞增殖的影响;同时,利用TRIzol法提取组织和细胞总RNA,并反转录合成cDNA,采用Real-time RT-PCR方法分析细胞增殖标志基因Cyclin D1和PCNA的mRNA表达。【结果】测序结果显示,鸡HOPX基因的全长CDS区大小为222 bp,与NCBI发布的鸡HOPX基因mRNA序列（NM_204556）一致;利用HA标签抗体的Western blotting分析显示,真核表达载体pCMV-HA-HOPX能够表达出预期大小的蛋白分子（约9.5kD）,表明鸡HOPX基因的真核表达载体pCMV-HA-HOPX构建成功。显微镜观察发现,转染pCMV-HA-HOPX载体的细胞（HOPX过表达组）在细胞贴壁后培养24和48 h的细胞数量低于转染pCMV-HA vector空载体（空载体对照组）的细胞数量;CCK-8检测分析发现,转染pCMV-HA-HOPX载体细胞的吸光度值（OD值）在细胞贴壁后培养24、48和72 h都极显著低于空载体对照组（P＜0.01）。与细胞增殖检测结果相一致,细胞增殖标志基因表达检测分析发现,在细胞贴壁后培养24 h后,HOPX过表达组细胞Cyclin D1基因的mRNA表达量显著低于空载体对照组（P＜0.05）;在细胞贴壁后培养48 h时,HOPX过表达组的PCNA基因的mRNA表达量显著低于空载体对照组（P＜0.05）;在细胞贴壁后培养72 h时,HOPX过表达组的PCNA和Cyclin D1基因的表达量均极显著低于空载体对照组（P＜0.01）。【结论】HOPX基因过表达在体外抑制鸡原代前脂肪细胞的增殖。     

卵泡刺激素对原癌基因c-myc在鸡卵泡上表达的影响

[目的]本试验旨在研究c-myc基因在鸡卵泡上的表达及卵泡刺激素(FSH)对其的诱导作用，为明确c-myc在鸡卵泡发育过程中的相关机制提供理论基础。[方法]体外分离鸡小白卵泡(SWF)、大白卵泡(LWF)、小黄卵泡(SYF)、F4和F1卵泡颗粒层和膜层，检测c-myc mRNA和蛋白的表达；应用50 ng·mL^-1FSH处理小黄卵泡36 h,测量卵泡颗粒层的厚度和密度，检测颗粒层和膜层c-myc、标记基因和周期相关基因的表达；体外分离、培养小黄卵泡颗粒细胞，预培养16 h,用siRNA干扰c-myc 24 h后，加入50 ng·mL^-1 FSH处理24 h,检测c-myc mRNA的表达。[结果]c-myc mRNA在等级前卵泡的颗粒层和膜层的表达水平都显著高于排卵前卵泡，卵泡的颗粒层和膜层上都有c-Myc蛋白表达。与对照组相比，FSH处理后，小黄卵泡颗粒层厚度增加约25.5%(P<0.05),密度增加约27.8%(P<0.01)。在小黄卵泡颗粒层上，FSH降低了c-myc和类固醇激素合成急性调节蛋白(star)mRNA的表达水平...     

鸡卵泡颗粒细胞转染Bcl-2基因对IGF-1分泌的影响

选用正在产蛋的罗曼鸡,取体积排序第一（F1）和第四（F4）的卵泡,分离颗粒细胞层细胞。采用脂质体介导方法将来源于F1和F4卵泡的颗粒细胞用PBS（对照）、空载体或Bcl-2重组质粒处理,然后在不完全无血清培养基（不添加胰岛素）中培养48和96h,用流式细胞术检测Bcl-2蛋白表达,用放射免疫测定技术检测IGF-1的含量。结果发现,转染Bcl-2重组质粒组的Bcl-2蛋白表达量和IGF-1分泌量均多于其他各组。分析来源于不同卵泡期卵泡颗粒细胞的分泌功能,发现随时间的增加F1细胞IGF-1分泌量减少,而F4的IGF-1分泌量基本不变。结果表明,在鸡卵泡颗粒细胞中转染的Bcl-2基因具有表达功能,表达的蛋白具有调节鸡卵泡颗粒细胞分泌IGF-1的作用;鸡卵泡颗粒细胞IGF-1的分泌还受鸡卵泡的大小和颗粒细胞在体外培养时间的影响。     

SIRT1基因对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响

【目的】探讨沉默信息调节因子1(Silent information regulator1,SIRT1)对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。【方法】选取牛卵巢上直径2～6 mm的卵泡,用注射器抽取卵泡中的颗粒细胞,进行体外培养。根据牛SIRT1基因的核苷酸序列,构建了4条干扰载体（shRNA-SIRT1-1597、shRNA-SIRT1-1471、shRNA-SIRT1-1186、shRNA-SIRT1-1306）及1条阴性对照载体（shRNA-NC）,利用脂质体将质粒转入牛卵泡颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR法筛选出干扰效果最佳的干扰载体用于后续试验。以转染shRNA-SIRT1-1471的颗粒细胞为干扰组,转染shRNA-NC的颗粒细胞为阴性对照组,不做处理的颗粒细胞为空白对照组,采用CCK-8法检测转染后24,36,48和60 h各组颗粒细胞增殖情况,用流式细胞术检测转染后24,36和48 h各组颗粒细胞的细胞周期变化情况。【结果】转染后48 h shRNA-SIRT1-1471干扰的颗粒细胞SIRT1表达量显著低于其他处理组（Plt;0.05）,故选用shRNA-SIRT1-1471作为最佳干扰载体。转染后24,36,48和60 h,干扰组颗粒细胞增殖效果显著高于空白对照组和阴性对照组（Plt;0.05）;转染后24~48 h干扰组与空白对照组和阴性对照组相比G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著升高,从而使更多细胞进入M期进行正常的有丝分裂,促进细胞增殖。【结论】SIRT1能抑制牛卵泡颗粒细胞的增殖,并阻滞细胞周期的进程。     

SIRT1基因对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响

【目的】探讨沉默信息调节因子1(Silent information regulator1,SIRT1)对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。【方法】选取牛卵巢上直径2～6 mm的卵泡,用注射器抽取卵泡中的颗粒细胞,进行体外培养。根据牛SIRT1基因的核苷酸序列,构建了4条干扰载体（shRNA-SIRT1-1597、shRNA-SIRT1-1471、shRNA-SIRT1-1186、shRNA-SIRT1-1306）及1条阴性对照载体（shRNA-NC）,利用脂质体将质粒转入牛卵泡颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR法筛选出干扰效果最佳的干扰载体用于后续试验。以转染shRNA-SIRT1-1471的颗粒细胞为干扰组,转染shRNA-NC的颗粒细胞为阴性对照组,不做处理的颗粒细胞为空白对照组,采用CCK-8法检测转染后24,36,48和60 h各组颗粒细胞增殖情况,用流式细胞术检测转染后24,36和48 h各组颗粒细胞的细胞周期变化情况。【结果】转染后48 h shRNA-SIRT1-1471干扰的颗粒细胞SIRT1表达量显著低于其他处理组（Plt;0.05）,故选用shRNA-SIRT1-1471作为最佳干扰载体。转染后24,36,48和60 h,干扰组颗粒细胞增殖效果显著高于空白对照组和阴性对照组（Plt;0.05）;转染后24~48 h干扰组与空白对照组和阴性对照组相比G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著升高,从而使更多细胞进入M期进行正常的有丝分裂,促进细胞增殖。【结论】SIRT1能抑制牛卵泡颗粒细胞的增殖,并阻滞细胞周期的进程。     

鸡肉价格形成过程及利润分配情况调研报告

采取全程跟踪的方法从大兴到北京市区对鸡肉产品的生产、加工、流通、销售等各环节进行实地调查，重点了解各环节的购销价格、成本、收益及在鸡肉涨价过程中各环节的利润分配状况。调查表明．在整个产业链条中养殖户承担的成本最多，利润较低。而收购加工环节和零售环节的主体承担的成本较少，但所获利润较高。鸡肉价格上涨主要是成本推动尤其是农业外部成本的增加，且在涨价过程中农户的利润下降。     

劣质初生雏鸡的危害及优质初生雏鸡的选择

介绍了劣质初生雏鸡的危害情况,以及优质初生雏鸡的选择方法。     

养鸡棚室的设计

利用棚室养鸡对其环境条件要求基本和房舍相同，环境温度、通风换气、光照三大主要因素一定要达到标准，以满足鸡正常生长发育、生产、健康的需要。     

我国的乌骨鸡与中国泰和鸡及其药用价值

我国各地存在不少乌鸡种群,可能是不同地区饲养者长期对其进行有目地的选择的结果,加上地城的封闭作用,从而形成形态各异,又具有某些特征(如乌骨、乌皮、乌肉)的各种乌鸡。乌骨鸡是我国特有的药用珍禽,其中中国泰和鸡是突出的代表。乌骨鸡的皮肤和内脏中合有大量的黑色素,呈现出深墨色。乌骨鸡的黑色素表现为伴性遗传。泰和乌骨鸡作为药用在中国民间历史悠久。我国著名的中成药“乌鸡白凤九”的主要成份是乌骨鸡的肉、内脏和骨;是妇科常用良方,还能提高血小板数目和功能,对垂体、肾上腺皮质系统机能有一定的增强作用。动物实验证明乌骨鸡的营养成分能够延缓衰老过程。     

固始鸡与矮脚鸡/瑶鸡的杂交对后代鸡冠发育及性成熟的影响

分析比较了固始鸡(GG:G♂×G♀)及其杂交组合YG:Y♂×G♀、GA:G♂×A♀鸡冠的发育以及产蛋的情况。试验以同日龄、相同饲养条件下的固始鸡及其杂交组合为试验材料,记录鸡冠的发育以及鸡群初期产蛋情况,并在120日龄时称重后进行屠宰,取出卵巢/睾丸进行称重。综合冠高和冠厚,在整个发育过程中鸡冠的发育表现为YGGAGG;GA公鸡的睾丸发育较早,其次YG,而固始鸡大部分公鸡发育都较晚;大多数YG母鸡的卵巢发育较早,GA只有少数发育较早,固始鸡母鸡的发育最晚。另外,YG、GA和GG产第一枚蛋的时间分别为104、108、119日龄,宰前1周的产蛋率也表现为YGGAGG。研究结果表明杂交组合GA和YG的性成熟在一定程度上比固始鸡纯系GG早。     

草鸡J亚群禽白血病病毒的PCR检测

通过对GenBank发表的ALV的基因序列的分析,针对J型ALV保守区设计并合成1对特异性引物。通过对反应条件的优化,确定了检测ALV的PCR检测方法,对来源于江苏地区不同草鸡养殖基地的10份病料组织样本提取DNA进行PCR扩增。结果对疑似J亚群ALV病料和正常鸡肝脏组织的病原核酸检出率分别为90%和0,同时将扩增的目的基因进行克隆测序,并与GenBank中的参考毒株进行比较,结果表明目的基因片段序列长300 bp左右,与参考毒株核苷酸序列同源性为97%以上。试验表明,江苏地区草鸡群中确实存在J亚群鸡白血病病毒感染的情况。     

固始鸡与青胫黄麻羽鸡杂交利用研究

[目的]充分利用地方品种固始鸡种质资源,通过杂交配套提高其生产性能。[方法]以固始鸡G系母鸡为母本,以固始鸡G系、快大青胫黄麻羽S1系、广西瑶鸡Y系等公鸡为父本,分别进行杂交组合,杂交后代分别为GG、S1G和YG。通过对杂交后代生产性能、屠宰性能及肉质性状进行测定,评价固始鸡的杂交利用效果。[结果]以S1系为父本、以固始鸡为母本的杂交配套组合,可有效提高固始鸡的生产性能和出肉率,提高肌内脂肪含量,从而改善固始鸡的肉品质。[结论]研究结果可为固始鸡种质资源特性的研究及保护利用提供参考。     

寿光鸡和汶上芦花鸡肉用性能比较分析

随机选取相同环境下饲养的90日龄汶上芦花鸡和寿光鸡各30只,测定其肉用性能,并进行品种间的比较分析。结果表明:90日龄的活体重汶上芦花鸡为939.35 g,寿光鸡为1 504 g;寿光鸡在活重、半净膛重、全净膛重和翅比率性状上极显著高于芦花鸡(P0.01),而芦花鸡在屠体率和腿比率性状上极显著优于寿光鸡(P0.01),半净膛率显著优于寿光鸡(P0.05)。两个地方鸡种的胸肌pH值在宰后15 min至宰后24 h内均呈下降趋势,各时期pH值均符合正常肌肉要求范围。芦花鸡在腹脂重、腹脂率和肌内脂肪性状上高于寿光鸡,但只在腹脂率性状上存在极显著差异(P0.01)。     

不同品种鸡汤风味品质比较研究

分别以苏北土鸡、雪山鸡和817肉鸡为原料加工鸡汤,研究其感官品质、游离氨基酸和核苷酸的变化,试验结果表明:相同品种的鸡宰后分别成熟0.5 h与24 h的样品煲汤,在感官风味上没有明显差异,但不同种类鸡汤之间感官差异显著,其中苏北土鸡汤的整体滋味及香气较好,雪山鸡汤滋味略有不足但肉质更好,817肉鸡汤总体评价相对较差;在游离氨基酸含量方面,随着鸡肉宰后成熟时间的延长,所制成的汤中游离氨基酸含量有增加的趋势,且不同品种差异显著;在核苷酸含量方面,不同品种鸡汤中的核苷酸CMP、IMP和AMP差异较大,其含量按照由高到低的顺序依次是苏北土鸡汤、雪山鸡汤、817肉鸡汤。由此可知,苏北土鸡煲汤的整体风味最佳,雪山鸡次之,817肉鸡煲汤风味较差,不适合作煲汤类产品。     

鸡心包积液-肝炎综合征卵黄抗体对机体排毒的影响

为研究应用卵黄抗体防控鸡心包积液-肝炎综合征(HHS)的可行性及其对病毒分布和机体排毒的影响,采用卵黄抗体肌肉注射28日龄SPF鸡,同时设置对照组(生理盐水),2 d后用血清4型禽腺病毒分离株(HuBei 201801)进行人工感染,采用PCR方法检测病毒的分布及排毒情况;对临床发病肉杂鸡注射卵黄抗体,检验其保护效果。结果显示,人工感染SPF鸡14 d后,试验组存活率为93.33%,而对照组存活率为40.00%。试验组只有肝脏PCR检测呈阳性,其他器官均呈阴性;对照组肝脏PCR阳性率为100%,心脏、肾脏、脾脏等器官阳性率为60%。试验组未检出口腔排毒,泄殖腔排毒7dpi时阳性率为20.0%,其他时间未检出;对照组口腔排毒7dpi时阳性率为50.0%,其他时间未检出,在3、5、7dpi时均检出泄殖腔排毒,7dpi时排毒率达66.7%。临床发病肉杂鸡注射卵黄抗体24 h后死亡数明显减少,72 h后很少死亡。由此可见,卵黄抗体可以有效降低感染鸡的排毒率,阻止该病原的传播,为鸡群提供有效保护。应用卵黄抗体是防控鸡心包积液-肝炎综合征的一项有效措施。