三种中药复方抗小鼠感染H1N1和H3N2亚型猪流感病毒的效果研究

为了筛选抗H1N1和H3N2猪流感的中药复方,试验将小鼠随机分为正常对照组、模型对照组(病毒攻毒组)、利巴韦林组、麻杏石甘散组、复方一组、复方二组和复方三组,除正常对照组外,各组小鼠均滴鼻接种猪流感病毒造模后进行相应的治疗,正常对照组则用PBS处理,最后通过测量各组小鼠的体重、计算肺脏指数、观察肺脏组织和检测血液中抗氧化指标[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、丙二醛(MDA)]等,研究三个中药复方抗小鼠感染猪流感病毒的效果。结果表明:复方一组、复方二组和复方三组小鼠体重下降幅度小、恢复速度快。与模型对照组比,三个中药复方组能显著或极显著降低感染H1N1亚型猪流感病毒小鼠的肺脏指数(P0.05或P0.01);也能降低感染H3N2亚型猪流感病毒小鼠的肺脏指数,但只有复方三组小鼠的肺脏指数与模型对照组差异显著(P0.05)。模型对照组小鼠肺脏组织肺泡隔断裂、肺泡腔增大,麻杏石甘散组小鼠的肺脏组织出现大范围的出血症状,利巴韦林组小鼠肺脏组织无实质性病变,三个复方组小鼠肺脏组织无明显病变,肺泡间隔和肺泡壁厚度正常。与模型对照组比,三个复方组均能极显著提高血清SOD活性和GSH浓度(P0.01),降低MDA浓度。说明本试验所用的三个中药复方具有增强小鼠抗H1N1和H3N2亚型流感病毒感染的效果,且复方三的效果相对好些。     

猪源脑心肌炎病毒GXLC株对小鼠的致病性试验

为研究猪源脑心肌炎病毒(EMCV)GXLC株对小鼠的致病性,将其接种4周龄健康BALB/c小鼠,观察临床症状,检查病理变化,测定心重/体重比值,检测心脏、脑、脾脏组织及血清中病毒含量,检测心脏、脑、脾脏组织中细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达水平及血清中IL-1β、TNF-α蛋白含量。结果显示,感染小鼠出现明显的临床症状,感染后第4天开始死亡,第5~7天死亡达到高峰;心脏、脑出现典型的大体病理变化和组织病理学变化,心重/体重比值显著升高、组织病理学炎症分值显著增加;感染后第1天即可在心脏、脑、脾脏及血清中检测到大量病毒,直至第14天仍能检测到病毒;血清中IL-1β、TNF-α蛋白含量显著升高,心脏、脑、脾脏组织中IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达水平显著上调,而且细胞因子表达的高峰期与出现明显临床症状、严重病理损害及死亡高峰期密切相关。结果表明,猪源EMCV GXLC株对小鼠具有高度致病性,IL-1β、TNF-α、IL-6等促炎细胞因子在EMCV对小鼠的致病机制中发挥重要作用。     

抗菌肽NZ2114对多重耐药2型猪链球菌感染小鼠的治疗效果评价

为探究抗菌肽NZ2114对猪链球菌感染小鼠模型的体内治疗效果,本试验以NZ2114和2型猪链球菌CVCC 3928为研究对象,利用小鼠模型评价NZ2114治疗猪链球菌感染的效果。36只ICR雌鼠随机均分为6组：空白对照组（不感染,腹腔注射0.2 mL PBS）、阴性对照组（感染,腹腔注射0.2 mL PBS）、试验Ⅰ和Ⅱ组（感染,分别腹腔注射0.2 mL 2.5和5.0 mg/kg NZ2114）、阳性对照Ⅰ和Ⅱ组（感染,分别腹腔注射0.2 mL 7.5和15.0 mg/kg头孢曲松钠）。结果显示,空白对照组和5.0 mg/kg NZ2114试验组小鼠存活率均为100%,而15.0 mg/kg头孢曲松钠阳性对照组小鼠存活率仅为50%。治疗1 d后,5.0 mg/kg NZ2114试验组小鼠肺脏和肝脏荷菌量分别下降59.41%（P < 0.01）和69.19%（P < 0.01）;而15.0 mg/kg头孢曲松钠阳性对照组中小鼠肺脏和肝脏荷菌量分别下降43.94%（P < 0.01）和19.60%（P < 0.05）。与阴性对照组相比,2.5 mg/kg NZ2114治疗组中抑制炎性因子TNF-α和IL-1β的释放分别下降85.83%（P < 0.01）和56.20%（P < 0.05）,5.0 mg/kgNZ2114试验组分别降低84.02%（P < 0.01）和43.86%（P < 0.05）,而15.0 mg/kg头孢曲松钠阳性对照组TNF-α及IL-1β的下降率均不显著,分别为24.49%和8.82%。另外,5.0 mg/kg NZ2114试验组1 d后即可明显减轻小鼠肺组织间质弥漫性炎细胞浸润等炎症症状,抑制肝细胞产生肿胀及空泡性变化,促进脾小结恢复正常;治疗7 d后各器官组织临床症状评分基本恢复正常。上述结果表明,NZ2114能有效提高猪链球菌感染小鼠的存活率,显著降低病原菌在小鼠肺脏和肝脏的移位及血清中TNF-α和IL-1β的水平,并有效缓解肝脏、脾脏和肺脏的急性损伤,治疗效果优于头孢曲松钠,具有作为治疗临床猪链球菌病抗生素替代品的潜力。     

H1亚型流感病毒通用疫苗的构建及其对小鼠免疫保护效力研究

本研究旨在为研制一种安全、有效并具有广泛保护作用的流感病毒通用疫苗进行初步的探索。从Gen-Bank上获得所有H1亚型经典猪源流感病毒和甲型流感病毒的HA基因序列,通过系统进化分析获得其共有序列,并对共有序列进行密码子优化(Optimized consensus,opti-CS),同时将H1亚型的A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)和重组甲型流感病毒rPan09(H1N1,其HA和NA来自A/Swine/California/04/09,其余6个片段来自PR8的重组病毒)的HA基因分别进行密码子优化(opti-G11,opti-r09),并将这3种片段与真核表达载体pCAGGS连接获得重组质粒pCA-opti-CS、pCA-opti-G11和pCA-opti-r09。将重组质粒瞬时转染293T细胞,检测HA基因在哺乳动物细胞中的表达情况。免疫6～8周雌性BALB/c小鼠,免疫3次,每次间隔3周,同时设立空载体pCAGGS对照。三免2周后从每个质粒免疫组中选取一半小鼠每只以50μL 103.87 EID50的剂量接种A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)病毒,另一半小鼠每只以50μL 107.45 EID50的剂量接种rPan09病毒。采集血清,对HA抗体水平、HI滴度、细胞因子产生情况、肺组织病毒含量进行检测,并对肺组织病理学变化进行观察。结果显示:重组质粒中HA基因均能够在哺乳动物细胞中有效的表达。pCA-opti-CS免疫后能够诱导小鼠产生较高的HA抗体水平,较高的HI滴度,并且能够诱导机体产生较高水平的IL-4和IFN-γ。肺组织病毒含量测定以及组织病理学观察结果显示:HA共有序列密码子优化的DNA疫苗pCA-opti-CS免疫后能够有效限制病毒A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)和rPan09HA在肺脏中的复制,减轻肺脏病理变化。结果提示:HA共有序列密码子优化的DNA疫苗pCA-opti-CS能够诱导小鼠产生较高水平的体液免疫和细胞免疫应答,并具有较好的交叉保护效力,能够保护小鼠抵抗异源流感病毒的攻击。本研究为流感通用疫苗的研究提供了有益的参考。     

山豆根多糖对猪圆环病毒2型感染小鼠体内外炎性因子分泌水平的影响

旨在探究山豆根多糖对猪圆环病毒2型（porcine circovirus 2,PCV2）感染小鼠体内外炎性因子分泌水平的影响。通过PCV2感染小鼠脾淋巴细胞建立体外炎症模型,用不同浓度（100、200、400 μg/mL）的山豆根多糖作用细胞,采用ELISA法测定细胞分泌IL-1β、IL-8、MCP-1水平和细胞内COX-1活性;利用PCV2体内感染昆明种小鼠建立氧化胁迫模型后,腹腔注射低、中、高浓度[100、200、400 mg/（kg·BW）]的山豆根多糖,应用ELISA法测定小鼠脾脏、肺脏组织和血清中炎性因子IL-1β、IL-8、MCP-1分泌水平和COX-1活性。结果显示,与PCV2感染模型细胞相比,经不同浓度山豆根多糖处理的小鼠脾淋巴细胞中炎性因子IL-1β、IL-8、MCP-1水平和细胞内COX-1活性均不同程度降低,其中,400 μg/mL的山豆根多糖作用最佳（P<0.01）;利用不同浓度的山豆根多糖腹腔注射PCV2感染小鼠后,均能抑制PCV2感染小鼠的脾脏、肺脏组织和血清中炎性因子IL-1β、IL-8、MCP-1分泌水平和COX-1的活性,其中,高浓度[400 mg/（kg·BW）]的山豆根多糖作用最佳（P<0.01）。综上提示,山豆根多糖能够抑制PCV2感染小鼠炎性因子分泌,从而发挥抗炎作用。     

黄芩苷对H6N6禽流感感染小鼠肺损伤的影响

为探究黄芩苷对H6N6禽流感病毒感染小鼠肺损伤的影响，选取108只昆明小鼠，随机平均分为6组(对照组、阳性组、西药组和低、中、高剂量黄芩苷组)。攻毒3 d后用不同剂量黄芩苷连续治疗9 d,各组在第3,6,9天时随机选6只小鼠，取其肺脏进行病理观察及HE染色制作切片，检测肺组织病毒含量及小鼠血清中IL-1、TNF-α、IFN-γ和5-HT含量。结果表明：攻毒3 d后，相比对照组，其余各组小鼠肺脏出现病理损伤；治疗3 d时，相比阳性组，高剂量黄芩苷组小鼠肺脏指数、病理评分和病毒含量均显著降低(P<0.05),治疗6 d时，相比阳性组，低、中、高剂量黄芩苷组小鼠血清中IL-1、TNF-α、5-HT含量均极显著降低(P<0.01),中、高剂量黄芩苷组IFN-γ均极显著升高(P<0.01);相比西药组，高剂量黄芩苷组小鼠肺脏指数、病理评分、病毒含量及血清中IL-2含量均无显著差异(P>0.05)。说明黄芩苷通过降低病毒在肺脏中的复制，调节血清中炎性因子(IL-1、TNF-α、IFN-γ和5-HT)含量，减轻H6N6禽流感患鼠肺的损伤。     

H5N1亚型禽流感病毒感染海兰白鸡模型的建立

为建立H5N1亚型禽流感病毒感染海兰白鸡模型,本研究选取1株鹅源H5N1高致病性禽流感病毒A/goose/guangdong/1/96(H5N1)(简称GD1/96),测定其对4周龄海兰白鸡的半数致死量.感染模型试验中,将30只4周龄海兰白鸡随机分成3组,每组10只,5只直接感染,5只同居,试验组设置一个重复,将病毒液稀释至10^4.5EID₅₀,滴鼻、点眼各0.1 mL,对照组接种PBS,感染后24 h放入同居鸡;感染后连续观察14 d,记录死亡时间,每天采集咽喉拭子和泄殖腔拭子;感染组和同居组第3、5 天各剖解3只鸡,采集气管、肺脏、脑、脾脏、肾脏和十二指肠,进行病毒分离;qRT-PCR法分析感染组和同居组第3、5 天鸡肺组织中IFN-α和TNF-α的相对表达量.结果显示,GD1/96株的鸡胚半数感染量(EID₅₀)为10^-8.167/0.1 mL,对4周龄海兰白鸡的半数致死量为10^4.5 EID₅₀.感染模型试验结果显示,以10^4.5EID₅₀的攻毒剂量感染海兰白鸡,感染组鸡在感染后8 d全部死亡;在感染和同居3 d后,各组鸡的咽喉拭子和泄殖腔拭子均可检测到病毒;感染和同居后第3、5 天,各组鸡的6种组织中均可分离到高滴度的病毒;IFN-α和TNF-α在感染组和同居组的鸡肺脏组织中的表达量均显著增加(P <0.05).本试验建立了海兰白鸡的H5N1亚型禽流感病毒感染模型,为H5N1亚型禽流感病毒的致病机理及表达抗流感基因转基因鸡的研究奠定了基础.     

猪流感病毒A/swine/Guangdong/2/2012(H1N1)毒株攻毒BALB/c小鼠细胞因子动态变化的研究

为了测定H1N1亚型猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)对小鼠的致病性,本试验对A/swine/Guangdong/2/2012(H1N1)株SIV HA基因进行克隆及遗传分析,并将SIV尿囊液经鼻腔感染6周龄BALB/c小鼠,观察感染后小鼠的一般状况、器官系数和组织病理学变化,在病毒感染后第1、3和7天使用荧光定量PCR测定小鼠肺脏、脾脏、脑组织中7种细胞因子mRNA的表达量,研究其对小鼠的致病特性。结果显示,该病毒属于经典SIV,病毒经鼻腔感染后可引起小鼠活动减少、采食量降低,但无咳嗽和死亡;病理组织学变化为肺间隔较正常组织明显增厚,毛细血管明显扩张充血,周围肺泡腔呈代偿性肺气肿;小鼠肺脏、脾脏组织样本中IFN-α、IFN-β、IP-10、IL-1β、TNF-α、IRF-3和IL-10 mRNA含量在感染后第3天均显著升高(P<0.05),而脑组织样本中IL-1β和IL-10在小鼠攻毒后第3和7天均显著上调(P<0.05)。     

流感病毒PR8F的拯救及其对BALB/c小鼠的致病力

为了研究H1N1流感病毒对BALB/c小鼠的致病相关分子机制、传播机制以及开发新型疫苗,将本实验室保存的A/PR/8/34株的8个质粒参照Paulina构建的流感病毒8质粒突变系统做定点突变,利用反向遗传操作技术,成功拯救出H1N1流感病毒突变株PR8F。将PR8F株以106 TCID50/100μL的剂量滴鼻感染BALB/c小鼠,观察小鼠临床表现及体质量变化。解剖攻毒后不同时间小鼠并观察体内主要脏器的病理特征,提取各脏器RNA,通过实时荧光定量PCR方法,检测PR8F株在小鼠体内不同脏器中的病毒残留量和在BALB/c小鼠肺脏中的扩增效率。结果表明,H1N1流感病毒突变株PR8F感染小鼠4~7d后全部致死;PR8F株在小鼠体内各脏器中的病毒残留量有很大差异,肺脏中最多,且病毒在肺脏内呈指数形式扩增。本试验建立了H1N1流感病毒PR8F株对BALB/c小鼠的感染模型,为H1N1流感病毒致病机制和传播机制的研究奠定基础。     

2株H1N1猪流感病毒的遗传进化分析及其生物致病性

对挑选的2株猪流感病毒A/swine/Guangdong/BRT15/2016(H1N1,BRT15)和A/swine/Guangdong/YJ4/2014(H1N1,YJ4)进行遗传进化分析与小鼠致病性试验。全基因组序列的遗传进化分析结果显示,BRT15与YJ4的HA、NA、M基因属于欧亚类禽猪源流感病毒分支,NP、PA、PB1和PB2基因属于pdm/09分支,NS基因属于北美三元重组分支。分别将BRT15与YJ4感染BALB/c小鼠进而比较分离株对小鼠的致病力,结果显示BRT15与YJ4毒株对小鼠具有不同的致病力,YJ4攻毒组小鼠死亡率高于BRT15组。肺部滴度检测显示,感染病毒后3d,YJ4组病毒滴度显著高于BRT15(P0.01),感染病毒后6d,YJ4和BRT15组病毒滴度无明显差异(P0.05);脑部滴度检测显示,感染病毒后3,6d,YJ4组和BRT15组病毒滴度均无明显差异(P0.05)。     

山豆根多糖对感染PRRSV小鼠脾脏细胞因子水平的影响

探讨山豆根多糖对PRRSV感染小鼠脾淋巴细胞分泌细胞因子水平的影响。将70只昆明种小鼠随机分为7组(A组、B组、C组、D组、E组、F组、G组),每组10只,雌雄各半,依据前期已经建立氧化应激模型的感染条件,D组、E组、F组、G组小鼠于试验第1、2、3天分别采用口服、滴鼻和腹腔注射3种途径联合感染PRRSV病毒原液1.0mL/只,A组、B组、C组给予生理盐水1.0mL/只。第4、5、6天,A、D组小鼠分别腹腔注射生理盐水,0.2mL/10g。B组小鼠腹腔注射5.0mg/kg的脂多糖(LPS)溶液,C组、E组、F组、G组小鼠分别腹腔注射不同剂量的山豆根多糖(200、50、100、200mg/kg)。供试小鼠均于第14天处死,并取其脾脏制备匀浆。采用ELISA检测脾匀浆中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和MCP-1等细胞因子的水平。结果显示,PRRSV感染小鼠后能升高小鼠脾脏匀浆内TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和MCP-1水平,50mg/kg~100mg/kg剂量的山豆根多糖能降低上述细胞因子的水平。结果表明,山豆根多糖能有效降低PRRSV感染小鼠脾脏细胞因子的水平。     

无菌大鼠深二度烫伤感染模型机体炎性反应的研究

为探究无菌大鼠深二度烫伤感染模型机体炎性反应，试验利用无菌大鼠分别建立深二度烫伤损伤模型和烫伤后绿脓杆菌感染模型，比较这两种模型和SPF级大鼠深二度烫伤模型在愈合过程、炎性反应及病理变化等方面的异同。20只6周龄雌性Wistar无菌大鼠，在超净工作台内采用恒温恒压烫伤仪94℃作用8 s造成大鼠深二度烫伤，随机分为2组，一组伤口感染浓度为1×10⁵ CFU/mL绿脓杆菌菌液0.5 mL，一组不做处理，创面保持无菌状态，SPF级Wistar大鼠在同样条件下烫伤，创面不做处理。分别观察3组大鼠的伤口结痂时间、脱痂时间和愈合时间，并在烫伤前（0 h），烫伤后24 h、3 d和7 d时，取血清，检测炎性因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1α（IL-1α）、粒细胞-巨噬细胞刺激因子（GM-CSF）的变化。结果显示，感染绿脓杆菌大鼠组开始结痂所需时间显著长于SPF级大鼠组和无菌大鼠组（P<0.05）；而脱痂及愈合所需时间显著变短（P<0.05）；感染绿脓杆菌组大鼠烫伤24 h时，皮下组织中可见淋巴细胞，有慢性炎性反应；3 d时，真皮深层有化脓性感染，横纹肌周围可见大量炎细胞，烫伤7 d时，皮下组织中有轻微血管扩张充血，化脓性感染减轻，无菌烫伤大鼠与SPF级烫伤大鼠皮肤在烫伤后一周内有轻度炎性反应。3组大鼠烫伤后，血清GM-CSF、IL-1α及TNF-α水平均较烫伤前显著升高（P<0.05）；烫伤24 h时，感染绿脓杆菌大鼠组和无菌大鼠组血清IL-1α水平显著高于SPF级大鼠组（P<0.05）；无菌大鼠组血清GM-CSF水平显著高于SPF级大鼠组和感染绿脓杆菌大鼠组（P<0.05）；烫伤3 d时，染绿脓杆菌大鼠组和无菌大鼠组血清IL-1α水平显著高于SPF大鼠组（P<0.05），无菌大鼠组血清GM-CSF水平显著高于染绿脓杆菌大鼠组（P<0.05）。综上所述，无菌大鼠对烫伤刺激反应迅速强烈，血清中炎性因子迅速升高，SPF级大鼠深二度烫伤后炎性反应缓慢；无菌大鼠深二度烫伤伤口感染1×10⁵ CFU/mL绿脓杆菌，脱痂时间和愈合时间反而缩短。     

Clarithromycin suppresses induction of monocyte chemoattractant protein-1 and matrix metalloproteinase-9 and improves pathological changes in the lungs and heart of mice infected with influenza A virus

The influenza A virus (IAV)–cytokine–trypsin/matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) cycle is one of the important mechanisms of multiple organ failure in severe influenza. Clarithromycin, a macrolide antibiotic, has immune modulatory and anti-inflammatory effects. We analyzed the effects of clarithromycin on the induction of chemokines, cytokines, MMP-9, trypsin, vascular hyper-permeability and inflammatory aggravation in mice with IAV infection. IAV/Puerto Rico/8/34(H1N1) infection increased the levels of monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) and cytokines in serum, and MMP-9 and trypsin in serum and/or the lungs and heart. Clarithromycin significantly suppressed the induction of serum MCP-1 and MMP-9 and vascular hyperpermeability in these organs in the early phase of infection, but did not suppress the induction of trypsin, IL-6 or IFN-γ. Histopathological examination showed that clarithromycin tended to reduce inflammatory cell accumulation in the lungs and heart. These results suggest that clarithromycin suppresses infection-related inflammation and reduces vascular hyperpermeability by suppressing the induction of MCP-1 and MMP-9.     

鼠源重组UBC13蛋白对脂多糖诱导的小鼠急性炎症的影响

试验旨在探讨鼠源重组UBC13蛋白对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性炎症的影响。将24只SPF雌性小鼠随机分成4组:PBS组,LPS模型组,重组UBC13蛋白高、低剂量组(分别为100和25μg/只),每组6只。LPS模型组与各蛋白剂量组腹腔注射20 mg/kg LPS,PBS组腹腔注射等体积PBS;注射结束1 h后,各蛋白组按相应剂量背部皮下多点注射重组UBC13蛋白,PBS组与LPS模型组注射等体积PBS。给予蛋白24 h后处死小鼠。收集小鼠肺脏、脾脏、胸腺及肝脏组织,计算脏器指数,HE染色观察组织病理学变化,实时荧光定量PCR检测肺脏、脾脏、胸腺和肝脏中IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA的相对表达量,以及肺脏中iNOS mRNA的相对表达量,综合评价鼠源重组UBC13蛋白对LPS诱导小鼠急性炎症的影响。结果显示,与PBS组相比,LPS模型组小鼠肺脏、脾脏及肝脏指数均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),且肺脏、脾脏和肝脏组织均出现病理变化。实时荧光定量PCR结果显示,与PBS组相比,LPS模型组肺脏、脾脏、胸腺和肝脏中IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA相对表达量均极显著升高(P<0.01),肺脏中iNOS mRNA相对表达量也极显著升高(P<0.01);与LPS模型组相比,UBC13蛋白高剂量组肺脏、脾脏和肝脏中病理变化明显改善,肺脏、肝脏、脾脏中IL-1β、TNF-α、IL-6及肺脏中iNOS mRNA表达量均极显著降低(P<0.01);胸腺中TNF-αmRNA表达量显著降低(P<0.05),IL-6 mRNA和IL-1β表达量极显著降低(P<0.01)。表明鼠源重组UBC13蛋白可下调炎性因子的表达,从而改善LPS诱导的小鼠急性炎症反应。     

橄榄苦苷对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

本研究为探讨橄榄苦苷联合依达拉奉对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响及其保护作用机制,将50只健康小鼠分成假手术组、模型组、橄榄苦苷组、依达拉奉组、橄榄苦苷＋依达拉奉组。利用双侧颈总动脉结扎方法制备慢性脑缺血再灌注小鼠模型,造模后药物处理21 d,用放射免疫法检测脑组织肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1（IL-1β）、白细胞介素10（IL-10）含量,用比色法检测脑组织ATP酶、髓过氧化物酶（MPO）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性及丙二醛（MDA）含量,用免疫组织化学法及Western blotting法检测大脑皮层脑源性神经营养因子（BDNF）的表达。结果显示,与假手术组相比,模型组脑组织TNF-α、IL-1β、MDA的含量及MPO活性极显著升高（P<0.01）,IL-10、ATP酶、SOD、CAT水平均极显著降低（P<0.01）,大脑皮层BDNF表达水平极显著降低（P<0.01）。与模型组比较,橄榄苦苷或依达拉奉治疗后,脑组织TNF-α、IL-1β、MDA的含量及MPO活性极显著降低（P<0.01）,IL-10、ATP酶、SOD、CAT水平均极显著升高（P<0.01）,大脑皮层BDNF表达水平极显著升高（P<0.01）。橄榄苦苷和依达拉奉联合治疗后脑缺血再灌注损伤的恢复更加显著。综上所述,橄榄苦苷和依达拉奉对小鼠脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其机制可能与改善神经功能、减少自由基损伤和抑制炎症因子水平有关,橄榄苦苷和依达拉奉联合治疗可以发挥更好的作用。     

Plasmacytoid dendritic cell depletion leads to an enhanced mononuclear phagocyte response in lungs of mice with lethal influenza virus infection

Plasmacytoid dendritic cells (pDCs) have been implicated both in the control and pathogenesis of influenza virus infection. We demonstrate that pDC depletion has marked effects on the response of mononuclear phagocytes, including conventional DCs (cDCs) and macrophages, to lethal influenza virus infection. Infection of mice lacking pDCs through antibody-mediated depletion resulted in substantially increased accumulation of mononuclear phagocytes and their progenitors in lungs compared to non-treated controls. pDC ablation resulted in a 5- to 35-fold enhancement of intracellular TNF-α and IL-6 production from inflammatory cDCs and exudate macrophages. Purified pulmonary cDCs and macrophages cultured from pDC-depleted mice produced significantly elevated levels of pro-inflammatory cytokines and chemokines compared to pDC-intact counterparts. Elimination of pDCs resulted in decreased lung IFN-α production and an immediate and transient reduction in lung virus burden but did not impact disease outcome. These data reveal a suppressive effect of pDCs on the inflammatory response to influenza virus infection in the lung.     

小鼠细胞因子实时定量PCR检测方法的建立及应用

采用荧光SYBR Green I建立小鼠细胞因子mRNA实时定量PCR的检测方法;并利用建立的实时定量PCR的检测方法时感染H5N1禽流感病毒的BALB/c小鼠不同时间采集的肺脏组织中几种重要致炎细胞因子及趋化因子mRNA表达水平进行了检测.对HSN1禽流感病毒感染的BALB/c小鼠肺脏细胞因子的检测具有高度的特异性,检测的灵敏度为10~1～10~2拷贝数.H5N1禽流感病毒感染BALB/c小鼠后,小鼠肺脏中IL-1β、IL-6、TNFα、MIG、IP-10、RANTES、MIF和HMGB1细胞因子mRNA表达水平与时照组小鼠相比均有明显差异.建立的实时定量PCR能在基因转录水平敏感和特异地反应细胞因子的表达水平,该技术在基础和临床免疫研究中,具有良好的应用价值.     

microRNA-124-3p调控H1N1亚型猪流感病毒致小鼠肺损伤的研究

为研究microRNA-124-3p（miR-124-3p）对H1N1亚型猪流感病毒（swine influenza virus，SIV）感染小鼠所致肺损伤的调控作用，本试验构建miR-124-3p腺病毒表达载体，通过小鼠尾部静脉注射法构建miR-124-3p差异表达小鼠模型，试验分3组：过表达组、抑制组和对照组。48 h后，各组小鼠鼻腔接种H1N1亚型SIV，每只10⁵ EID₅₀（50 μL）。连续观察14 d，计算小鼠平均体重变化率、观察病理切片并测定相关炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA相对表达量。结果显示，已成功将pre-miR序列及其sponge序列插入腺病毒的穿梭质粒，并将其共转染293A细胞。实时荧光定量PCR检测证实，与对照组相比，过表达组和抑制组小鼠黑色素瘤细胞miR-124-3p表达水平分别极显著升高（P<0.01）和显著降低（P<0.05），表明成功构建腺病毒表达载体。过表达组、抑制组和对照组小鼠体重变化率分别为－5.5%、－12.4%和－8.6%。抑制组和对照组均可见肺泡壁增厚，其间有多量淋巴细胞浸润，部分肺泡内出现纤维蛋白渗出，且抑制组病理变化更为严重，肺泡中还有大量的红细胞浸润；而过表达组仅有少量的淋巴细胞浸润，肺脏组织较正常。与对照组相比，过表达组检测的炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达水平均显著降低（P<0.05）；抑制组炎症相关炎症因子mRNA表达水平均显著升高（P<0.05）。本试验结果表明，miR-124-3p对H1N1亚型SIV感染小鼠所致的肺脏炎症因子的表达具有抑制作用，同时能减轻肺脏病理损伤。     

Infectivity and pathogenicity of 14-month-cultured embryonated eggs of Toxocara canis in mice

Infectivity and pathogenicity to mice of embryonated eggs of Toxocara canis, that had been maintained in 2% formalin for 14 months at 4 degrees C, were evaluated by immunological and pathological assessment at 1, 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 42 and 67 weeks post-infection (WPI). On each date, three infected mice and two age-matched uninfected mice were sacrificed for serum collection and histological processing of the liver, lungs, musculature, and brain. Infectivity assessment by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) revealed that the overall immunological pattern of infected mice tended to be towards the Th2 type response. Serum IgG1 antibody titers in infected mice were significantly higher than that of the uninfected control mice throughout the trial (P<0.05). On the other hand, no significant difference in titers of IgG3 antibody, an indicator for the Th1 type response, was observed between the infected and control mice, except at eight WPI (P<0.05). Pathogenicity was assessed semiquantitatively by comparing the mean number or diameter of inflammatory foci as well as histopathological changes in the liver, musculature, brain, or lungs of the infected mice and the control mice. Each hematoxylin and eosin (H&E) stained tissue section slide was examined under 100x magnification and 15 random fields were counted. Degree of inflammatory injury among the four organs was scored and categorized into four levels: normal (0), mild (1+), moderate (2+), and severe (3+). An index of inflammatory injury (mean score of experimental group/mean score of 10 control groups of 20 uninfected mice) of 2-3 is considered as moderate to severe, 1-2 as mild to moderate, and 0-1 as normal to mild. Histopathological changes were moderate to severe in the liver and lungs, mild to moderate in the musculature, and only normal to mild in the brain throughout the trial. It is noteworthy that apocrine-like change in epithelial cells of the bile duct was observed in most of the infected mice from eight WPI onward. Furthermore, larvae trapped by organized granulomas were found in soft tissue near the musculature at 12, 20, and 28 WPI. Altogether, not only were the infectivity and pathogenicity of the 14-month-cultured T. canis embryonated eggs retained, the hatched larvae were also capable of eliciting some special pathological changes in the murine host.     

Immunosuppression in experimental trypanosomiasis: effects of Trypanosoma equiperdum on the pathogenesis of influenza virus infection in deer mice (Peromyscus maniculatus)

The effects of Trypanosoma equiperdum infections on the immunological and pathological responses of deer mice (Peromyscus maniculatus) to influenza virus exposure were investigated. Mice carrying a 5 week trypanosome infection along with an age- and sex-matched trypanosome-free control group were simultaneously exposed to influenza Ao (WSN) virus. T. equiperdum infection significantly (P less than 0.01) converted a sub-lethal virus attack into a fatal pneumonic process in a small proportion of animals. In addition, the trypanosome caused a reduction (p less than 0.1) in virus replication on PID 1 and 2, accompanied later by a tendency towards virus persistence in the lungs of affected mice. This tendency was manifested by a log reduction in virus titres between PID 2 and 4 and PID 4 and 6 in the lungs of trypanosome-infected mice, compared to 2 log drops over the same periods in the lungs of control mice. T. equiperdum infection also significantly (p less than 0.001) depressed serum and pulmonary neutralizing antibody titres to influenza virus.