奶牛与黄牛乳腺肥大细胞生物学性质的比较

采用组织化学染色法和免疫组织化学法对同一生理状态的黄牛与奶牛乳腺标本进行处理，比较两品种牛乳腺中肥大细胞的细胞化学性质、所产生的生物活性物质（如NO、5－HT和ER）及乳腺内含P物质（SP）的神经纤维分布特点。结果表明：两种牛乳腺中肥大细胞均为粘膜型肥大细胞，但在同一生理状态下其所产生的生物学物质不尽相同，奶牛与黄牛乳腺肥大细胞的生物学性质存在差异。     

空怀期黑白花奶牛乳腺肥大细胞的分布范型

应用改良的甲苯胺蓝染色法观察空怀期黑白花奶牛乳腺内肥大细胞分布,结果显示,乳腺肥大细胞具有明显的区域性差异,分布于小叶间结缔组织中的肥大细胞称为小叶间肥大细胞,分布于小叶内的肥大细胞称小叶内肥大细胞。     

黄牛乳腺炎与肥大细胞的相关性研究

应用组织学和组织化学方法对正常黄牛与乳腺炎黄牛乳腺不同部位的肥大细胞的数量、活力和组化性质的动态变化进行了研究．结果表明,乳腺炎黄牛乳腺组织中大量的炎性细胞浸染小叶间质、腺泡及腺上皮细胞间、腺泡腔内和乳导管及血管内壁与周围,并急剧增多,均极显著高于正常乳腺（P〈0．01）．其中乳基部最高,均极显著高于乳头部和乳体部（P〈0．01）．腺泡结构渐进紊乱,小叶内血管腔狭窄、变形．同时,乳腺肥大细胞及其脱颗粒的变化趋势均与炎性细胞浸染变化相吻合．由此可见,肥大细胞参与了黄牛乳腺炎的病理进程．     

乳腺肥大细胞的研究进展

乳腺局部免疫状态存在着特殊性,已引起许多学者的重视。但对其中肥大细胞所起的作用研究则较少。文章结合国内外文献,就乳腺肥大细胞的类型、分布、数量变化和作用等做一概述。     

奶山羊乳腺发育过程中肥大细胞的分布

肥大细胞是乳腺内重要的免疫细胞,参与乳腺的免疫防御、发育与重建.对不同发育时期山羊乳腺内肥大细胞的分布特点进行研究,用卡诺氏液固定乳腺组织,甲苯胺蓝染色,肥大细胞呈蓝紫色.结果表明,肥大细胞在乳腺发育的青春期和退化期数量较多,妊娠期数量明显少于青春期(P<0.05).泌乳期内乳腺肥大细胞数量最少,与其他时期差异显著(P<0.05).     

南阳黄牛与奶牛胚胎移植技术综合研究

<正> 本项研究从1986年11月起至1989年11月止,历时3年。主要研究了南阳黄牛与黑白花奶牛的超排程序;南阳黄牛胚胎移植南阳黄牛;南阳黄牛胚胎贮存技术保存南阳黄牛品种基因,利用胚胎移植使南阳黄牛繁殖奶牛,应用胚胎移植使已配黄牛产同胞异种(一黄一奶)双胎的方法,胚胎冷冻保存技术。     

冷冻奶牛胚胎移植黄牛研究

采用国产试剂、器械超数排卵22头黑白花奶牛,超排成功率72.7％(16/22)。采集胚胎143枚,其中可用胚占70％(100/143),超排母牛采集胚数和可用胚数头均6.5枚和4.5枚,按采得胚母牛计算采集胚数和可用胚数头均8.9枚和6.3枚。胚胎移植经冷冻—解冻后68.2％(30/44)可用,胚胎移植18头同期发情黄牛受体,3头妊娠。其中两头受体双胎6个月时流产,1头受体黄牛产下1头黑白花公犊。     

Influence on Cellular Signal Transduction Pathway in Dairy Cow Mammary Gland Epithelial Cells by Galactopoietic Compound Isolated from Vaccariae segetalis

The galactopoietic mechanism of Vaccaria segetalis is still unknown. Understanding dibutyl phthalate (DBP) separated from Vaccaria segetalis on the expression of lactation signal transduetion genes of mammary gland epithelial cells, including prlr, erα, akt1, socs2, pparγand elf5, will be helpful to reveal the molecular mechanism. Western blot and qRTPCR were used to study the change of prlr, erα, akt, socs2, pparγ, and elf5 expression at mRNA and protein level. Colocalization expression of prolactin receptor (PRLR) and estrogen receptor α (ERα) was observed by immunofluoreseence;the expression changes of miRNAs (21, 125b, 143, and 195) and the secretion of β-casein and lactose were detected byqRT-PCR and RP-HPLC. The results showed that Vaccaria segetalis active compound had similar fuctions as estrogen and/or prolactin (PRL) in dairy cow mammary gland epithelial cells (DCMECs), increased the expressions of prlr, erα, akt1,and elf5 genes, while repressed ppaγ expressions. DBP promoted socs2 mRNA expression, but its protein expressionswere repressed. Furthermore, both DBP and PRL could repress the expressions of miRNA-125b, miRNA-143 and miRNA-195 in DCMECs. DBP could repress the expression of miRNA-21, while the influence of PRL on miRNA-21 was not certain.DBP could promote the lactation ability of DCMECs by regulating the ER and PRLR cellular signal transduction pathway.     

Construction of Antibacterial Peptide CecropinB Eukaryotic Recombinant Vector and Its Expression in Dairy Goat Mammary Gland Epithelial Cells

To investigate the expression of antibacterial peptide CecropinB cDNA in dairy goat mammary gland epithelial cells,the CecropinB gene was cloned and was inserted into a eukaryotic vector pECFP-C1 to construct the recombinant plasmid pECFP-B by genetic engineering technique.Recombinant plasmid pECFP-B was transfected into dairy goat mammary gland epithelial to detect the bactericidal activity of CecropinB.The expression of CecropinB was also detected.The result of RT-PCR demonstrated CecropinB gene was expressed in transfected cells.CecropinB recombinant plasmid DNA was injected into udders and CecropinB was expressed in mammary gland,exhibiting bactericidal activity to Staphylococcus aureus in vivo experiments.     

奶牛鲜胚移植技术的研究

用PMSG+PG,PMSG+PG+激光照射,FSH+PG和PSH+PG+促排卵3号四组药物组合,超排处理15头黑白花奶牛。各组获得可用胚胎头均数分别为1.50±2.52枚(n=2)。3.30±2.52枚(n=3),2.86±3.85枚(n=7)和6.00±5.29枚(n=3),四组总头均数为3.40±3.70枚(n=15)。鲜胚移植三批受体妊娠率平均为62.2％(28/45),前两批移植妊娠率高达78.3％(18/23),其中1头供体一次冲胚11枚,移植11头受体,有9头妊娠。15头供体牛冲胚后40d内人工授精全部妊娠。     

奶山羊乳腺发育过程中生长激素、胰岛素及其受体的变化规律研究#br#

 【目的】探讨奶山羊乳腺发育过程中生长激素、胰岛素及其受体表达规律。【方法】关中奶山羊乳腺发育的4个时期即青春期、妊娠期、泌乳期及退化期用放射性免疫学方法（RIA）测定激素的含量,用免疫荧光法（IF）检测激素受体含量。【结果】在乳腺发育过程中血清中生长激素（GH）变化不显著（P＞0.05）,而组织中的GH在妊娠5月（P5M）时出现分泌高峰2.599±0.459 ng&#8226;mL-1（P＜0.01）。血清中胰岛素（INS）在青春期含量变化差异不显著（P＞0.05）,到妊娠1月（P1M）时INS含量高达31.664±6.416 µIU&#8226;mL-1（P＜0.01）,泌乳高峰过后回到正常水平。组织中的INS在进入妊娠期后含量开始增加并持续到泌乳10日（L10D）,之后下降。生长激素受体（GHR）在妊娠期比青春期和泌乳早中期高,在泌乳晚期达到高峰,之后下降。胰岛素受体（INSR）从青春期开始缓慢上升,在泌乳启动后达到高峰。【结论】在乳腺发育过程中血清和乳腺中的GH变化不明显。血清中的INS水平在妊娠初期最高,至分娩时最低,而乳腺中INS在泌乳期处于高水平。GHR在妊娠期和泌乳后期、退化前期表达量较高。INSR在妊娠期和泌乳期维持在一个较高水平,至泌乳中后期下降。     

崂山奶山羊乳腺中孕激素受体基因甲基化与基因表达关系的研究

为了探讨崂山奶山羊乳腺组织中孕激素受体基因(PR)的甲基化与基因表达的关系,本研究通过亚硫酸盐测序法分析了不同时期崂山奶山羊乳腺组织中PR基因的甲基化水平,并利用Real-time PCR技术检测了相应时期PR基因的表达情况。结果显示:在青春期、妊娠早期、妊娠中期、妊娠晚期、泌乳早期、泌乳晚期及退化期崂山奶山羊乳腺中PR基因的甲基化比率分别为13.3%、9.3%、2%、0%、8.7%、10.7%、10.7%;以β-actin为内参基因,相应时期PR基因的表达量分别为1.68、5.96、17.51、54.76、2.28、0.99、1.30。这些结果表明:PR基因的甲基化与基因表达存在负相关关系(γ=-0.87,P=0.01<0.05)。可见,崂山奶山羊乳腺组织中PR基因的甲基化水平对基因表达有一定影响。     

奶牛乳腺成体干细胞的体外分离培养及鉴定试验

[目的]体外分离、培养奶牛乳腺成体干细胞（mammary stem cells,MaSCs）,研究其生物学特性并对其进行扩增和鉴定。[方法]用贴壁筛选法纯化牛MaSCs,传代扩增,测定生长曲线并进行细胞核型分析。[结果]通过体外分离培养获得纯度较高的MaSCs,观察到MaSCs的生物学特性,细胞具有正常核型,分离得到的细胞确实为比较原始的干细胞。[结论]成功地建立了一种分离培养牛MaSCs的方法,分析MaSCs的生物学特性,为进一步深入研究MaSCs的诱导分化及其在乳腺生物反应器中的应用打下基础。