蒙古马肠道细菌总DNA提取方法的比较

本试验采集蒙古马新鲜粪便样品,采用酚－氯仿抽提法和2种细菌基因组DNA提取试剂盒法进行样品中细菌基因组DNA的提取。通过DNA浓度和纯度的测定,并将其作为模板扩增细菌16S rDNA V3区特异性片段对提取效果进行比较,从而找出更适合蒙古马粪便中细菌基因组DNA的提取方法。结果显示,3种提取方法得到的基因组DNA均能用于PCR扩增的模板,其中B试剂盒法提取的DNA数量较多,且纯度高,更适合用于提取蒙古马肠道微生物细菌基因组DNA及后续的蒙古马肠道微生物多样性等分子生物学试验。     

Comparison of four rapid DNA extraction techniques for conventional polymerase chain reaction testing of three Mycobacterium spp. that affect birds

Mycobacteriosis is an avian disease that is most commonly caused by Mycobacterium avium or Mycobacterium genavense. In order to optimize molecular laboratory tests for diagnosing mycobacteriosis in birds, we compared four methods of rapid DNA extraction with isolates of M. avium, M. genavense, and Mycobacterium fortuitum. DNA extraction methods included enzymatic lysis, boiling for 30 min followed by enzymatic lysis, four cycles of freezing and thawing followed by enzymatic lysis, and bead beating followed by enzymatic lysis. The DNA yield and purity for the four methods were evaluated by spectrophotometry and compared. The bead beating with enzymatic lysis technique yielded significantly purer and higher concentrations of extracted DNA compared with other DNA extraction methods. All four methods yielded extraction products for all three organisms that were successfully amplified by polymerase chain reaction (PCR) for a fragment in the 65-kD heat shock protein gene. Subjectively, the PCR amplification products were most abundant for samples extracted by bead beating with enzymatic lysis.     

狼毒大戟的不同提取工艺比较与成分分析

采用不同提取液、不同提取液倍数、不同提取方法对狼毒大戟进行了提取率的研究，同时对不同提取液及提取方法所得提取物质成分进行了分析。结果表明：以甲醇作为提取溶液采用6倍常温浸泡后索氏提取然后再常温浸泡的提取方法提取率最高，以95％乙醇作为提取液采用同样的提取方法其提取率次之；以95％乙醇、石油醚、乙酸乙酯作为提取液采用6倍常温浸泡后索氏提取再常温浸泡的提取方法较其他方法提取率高。甲醇在该方法下不仅提取率最高，而且其提取物所含成分也比较多，乙醇次之。由此可以得出，对于狼毒大戟的粗提取．采用甲醇或者乙醇作为提取溶液比较合适，其最佳提取方法为6倍常温浸泡后索氏提取然后再常温浸泡的提取方法。     

食品中三聚氰胺与三聚氰酸残留检测研究进展

对食品中测定三聚氰胺与三聚氰酸残留的前处理、分离与检测方法进行综述,比较了GC-MS、HPLC、LC-MS/MS、ELISA四种方法用于食品中三聚氰胺与三聚氰酸残留检测的优缺点,并对此类检测方法的发展趋势进行了展望。     

猪源ETEC F18黏附素三种提取方法对照

为探索更为有效的黏附素提取技术,本试验以猪源ETEC F18ab菌株为材料,通过三种方法（切割法、热洗脱法及联合热洗脱与切割法）各提取200mL菌悬液中的黏附素,应用紫外可见分光光度计测定浓度并进行SDS—PAGE分析。结果显示,应用切割法、热洗脱法和联合热洗脱与切割法所得黏附素量分别为5．94、8．84和22．47mg,即应用联合热洗脱与切割法提取的黏附素量明显高于单纯应用热洗脱法和切割法;SDS—PAGE分析表明,联合热洗脱与切割法提取的黏附素蛋白纯度稍低于单纯应用热洗脱法和切割法。综合分析上述结果可知,联合热洗脱与切割法更适用于大量黏附素抗原的提取。     

瑞香狼毒粗提取比较与成分分析

主要采用了不同提取液、不同提取液倍数、不同提取方法对瑞香狼毒进行了提取率的研究．同时对不同提取方法所得提取物的成分进行了分析。结果表明：以6倍95％乙醇作为提取液．采用75℃浸泡5d的提取方法提取率高,成分含量多,特别是针对其杀虫效果而言,采用乙醇作为提取液效果更佳。     

库拉索芦荟提取物对维氏气单胞菌抑菌作用的研究

采用榨汁法、水煮法和醇提法制备库拉索芦荟提取物,通过K-B法和二倍稀释法测定3种方法芦荟提取物对维氏气单胞菌的抑菌作用。结果显示,用3种方法制备的库拉索芦荟提取物对维氏气单胞菌均有不同程度的抑制作用,榨汁法、水煮法和醇提法得到的库拉索芦荟提取物对3株维氏气单胞菌的平均最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)分别为1、0.5和0.125 g/mL,最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC)分别为1、1和0.25 g/mL。库拉索芦荟提取物对3株维氏气单胞菌均有抑制作用,芦荟提取物浓度越高抑菌效果越明显,其中醇提法的抑菌效率高,水煮法的抑菌作用其次,榨汁法的抑菌效果较弱。     

提取东北虎毛发DNA两种方法的比较研究

研究东北虎毛发DNA的水煮抽提法，并将传统的酚仿抽提法和水煮法进行比较。水煮法即通过对细胞的煮沸和冷却，使细胞破裂、蛋白质变性，从而获得用于PCR扩增的模板DNA。通过测定OD值并计算浓度和纯度，同时进行琼脂糖电泳检测、PCR扩增和PAGE电泳检测，分析2种方法提取东北虎毛发DNA的质量差异。结果表明：水煮法提取东北虎毛发中DNA是一种快捷、简便、经济、高效的方法。     

革兰阴性菌外膜囊泡的研究进展

外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是革兰阴性(G^-)菌从细胞膜上脱落下来的囊泡,携带有细菌的大量组分,如外膜蛋白、脂多糖、脱氧核糖核酸等。由于OMVs无活性、不能复制且具有免疫原性,所以被认为是最具潜力的亚单位疫苗,同时OMVs对细菌本身具有多种作用,故OMVs成为研究的热点。本文从G^-菌OMVs的组成成分、形成机制、生物学功能、提取纯化方法及其开发应用前景5个方面综述其研究现状,为G^-菌的致病机制研究、OMVs的疫苗开发应用提供技术指导。     

桑椹与叶片蛋白质双向电泳样品制备方法的比较试验

为建立适合于桑树蛋白质组研究的双向电泳技术体系,以桑品种"大10"的桑椹与叶片为材料,探讨了桑树蛋白质不同提取方法对凝胶电泳效果的影响。结果表明,改良酚提取法与常规的SDS提取法、尿素/硫脲提取法相比,电泳图谱清晰,分离效果良好,能检测到更多的蛋白质组分,适用于桑椹与叶片蛋白质IPG-IEF/SDS-PAGE双向电泳及SDS-PAGE电泳的样品制备。     

从羊皮肤组织中提取总RNA方法的改进

在借鉴动物组织RNA提取方法的基础上,结合使用RNAlater保存液和Trizol试剂,改进了提取步骤和反应体系。利用改良的总RNA提取方法,从羊皮肤组织中快速、高效地提取了高质量总RNA,提取的总RNA可满足基于RNA分析技术的相关分子生物学试验需要。     

热带假丝酵母固体发酵代谢物提取方法的比较分析

本试验比较了几种提取微生物固体发酵代谢物的方法,旨在筛选出一种尽可能多保留了代谢物的方法.试验采用热带假丝酵母固体发酵棉粕源底物,以液相色谱串联质谱( LC-MS)为分析平台,分别采用50％冷甲醇溶液(甲醇法)、酸性甲醇-乙腈溶液(酸性甲醇-乙腈法)和50％乙腈溶液(乙腈法)提取发酵代谢物.结果表明:采用酸性甲醇-乙腈法、乙腈法和甲醇法分别提取出1 831、1 522和1 262种代谢物,提取效率表现为酸性甲醇-乙腈法＞甲醇法＞乙腈法.本试验中3种方法相比,酸性甲醇-乙腈法提取的代谢物种类最多,提取效率最佳,是微生物固体发酵代谢物提取的有效方法.     

Rapid methods for comparing the double-stranded RNA genome profiles of bluetongue virus

Various double-stranded RNA extraction procedures, gel electrophoresis systems, and methods to detect the RNA bands in the gel were investigated to find the most rapid methods to obtain the genome profiles of bluetongue virus in small volumes (1–25 ml) of infected cell culture fluids. Rapid double-stranded RNA extraction procedures coupled with staining the acrylamide gel slabs with ethidium bromide or silver nitrate resulted in well-defined genome profiles from bluetongue virus infected cell cultures in 6–48 h. Radioactive labelling of viral RNA with ³²P was time consuming, cumbersome and expensive. These techniques detect less than 0.5 μg of double-stranded RNA which can be obtained from one 1-ml well of a 24-well cluster plate of bluetongue virus infected cell monolayers. The methods were therefore suitable for rapid comparisons of the electropherotypes of multiple virus isolates.     

细毛羊皮肤组织中毛囊蛋白质2-DE图谱的建立与初步分析

本研究以不同纤维直径的细毛羊皮肤组织中的毛囊作为试验材料,利用不同的提取方法、不同pH范围的IPG胶条以及不同的上样量,探索适用于细毛羊皮肤组织的双向电泳体系,建立细毛羊皮肤组织毛囊的2-DE凝胶图谱.凝胶图谱用ImageMaster 2D Platinum软件自动检测蛋白点比较不同纤维直径的细毛羊差异蛋白.结果显示,TCA/丙酮抽提法最适合细毛羊毛囊组织总蛋白质的提取.上样量为100 μL,选择18 cm、pH 4~7的线性IPG胶条,得到质量较好的双向凝胶电泳图谱,有35个蛋白差异点,为后续优质细毛羊的蛋白质组学研究工作奠定基础.     

植物乳杆菌野生质粒分析及其提取方法的优化

乳酸菌质粒提取研究具有很长的历史。目前已有多个有效的乳酸菌质粒提取方法被报道，其中多数以乳酸球菌为研究对象，而植物乳杆菌质粒提取有效方法报道较少。该研究以植物乳杆菌为研究对象，通过对比分析并优化已报道的乳酸菌质粒提取方法，得到了高效且适于平台期植物乳杆菌野生质粒的提取方法。通过该方法进一步分析了植物乳杆菌野生质粒数和高拷贝质粒，为后续构建植物乳杆菌表达系统所需供体质粒和受体菌株提供了重要依据。     

家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)孢壁蛋白提取方法的优化研究

分别用SDS法、煮沸法、碱溶法和Brosson法,提取家蚕微孢子虫孢壁蛋白,并对孢壁蛋白及处理后的孢子形态进行比较研究。结果表明,不同方法处理后的孢子形态均保持完整,SDS处理后孢子为短杆状且明显变得粗壮,煮沸处理后孢子变小呈梭形,其他方法处理的孢子均有膨胀现象。SDS-PAGE检测显示,SDS法提取的孢壁蛋白出现3条明显的主带,煮沸法提取的孢壁蛋白出现5条明显的主带,0.1 mol/L KOH提取的孢壁蛋白出现2条主带;而Brosson法提取的孢壁蛋白呈现出20~30条带,体现了家蚕微孢子虫孢壁蛋白组成的复杂性,并适合于孢壁蛋白质组学的研究。     

Recirculating elutriator for extracting gastrointestinal nematode larvae from pasture herbage samples

Gastrointestinal nematode (GIN) parasites present an important limitation to ruminant production worldwide. Methods for quantifying infective larvae of GIN on pastures are generally tedious, time-consuming, and require bulky equipment set-ups. This limitation to expedient data collection is a bottleneck in development of pasture management practices that might reduce pasture infectivity. We modified a soil elutriator concept for extracting GIN larvae from fresh herbage samples. Elutriators were constructed from readily available parts and compared to the Baermann funnel sedimentation method for larvae extraction. More samples could be extracted per day in the elutriator than in a Baermann unit with extraction times of 8 min versus 24h, respectively. Accuracy, measured as maximum recovery of larvae seeded onto herbage samples, did not differ between extraction methods (62.3 vs. 69.8% for elutriator and Baermann, respectively, P>0.05). Larvae recovery from herbage in elutriators showed a strong log(e) relationship with extraction time (r(2)>0.98), which will allow development of accurate correction factors for specific herbages to predict total larvae densities at extraction times less than those needed for maximum recovery. An extraction time of 8 min per sample gave the best compromise of speed, accuracy, and precision as measured by regression confidence bands and root mean square error of analysis of variance. Precision of the elutriator extraction for pasture samples was comparable to published methods and was not affected by forage species or canopy strata. The elutriator method was sensitive enough to detect differences in larvae density as small as 8 larvae g(-1) DM among pasture treatments. Elutriators extracted nematode larvae from herbage samples with accuracy and precision similar to existing methods, but did it much faster. Elutriation shows promise as a rapid method for extracting infective GIN larvae from pasture herbage.     

多糖提取和抗氧化活性评价方法的研究现状和进展

作为构成生命活动的四大基本物质之一,多糖与维持生命所需的多种生理功能密切相关。随着研究的进行,多糖的抗氧化活性成为众多学者关注的热点。本文综述了多糖的提取和抗氧化活性评价方法的研究现状和进展,以期为多糖的提取和抗氧化活性评价研究提供借鉴。     

沙棘有效成分提取方法及其在畜禽养殖中的应用

沙棘含有多酚类化合物、有机酸类、萜类、甾体化合物、多糖等多种生物活性物质,对促进畜禽生长,提高畜禽抗氧化功能、免疫力,改善畜禽产品品质有重要作用,是一种理想的抗生素替代品。而将沙棘通过多种提取方式进行有效成分的提取,可以提高其生物利用率,有利于储存和控制用量。文章对沙棘有效成分提取方法及在畜禽养殖中的应用进行论述。     

桑皮苷的提取方法及工艺条件研究

桑皮苷是桑白皮中具有药用保健功能的成分之一。为了从桑白皮中高效提取桑皮苷,比较了超声波提取法和冷浸提取法的提取效果,针对不同提取方法的工艺条件如溶剂、原料质量浓度、提取温度和提取液pH值等因子进行了优选试验。通过高效液相色谱紫外检测法(HPLC)检测提取样品中的桑皮苷含量,确定采用超声波法的提取效果较好,在以75%乙醇作为提取溶剂和原料质量浓度67 g/L、提取液pH 7、提取温度25℃的工艺条件下,桑皮苷的提取得率可达1.346%。