RNA干扰文库研究进展及其应用

RNA干扰是一种在进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制,存在于许多不同种属的生物体中,在生物体细胞之间进行传递,具有抵抗病毒入侵和维持基因组稳定的作用.RNA干扰文库是以RNA干扰技术为基础建立的一种简单、高效、大规模、高通量的功能基因组学研究的工具,应用于大规模基因功能的筛选,在基因功能研究、发现新的药物靶基因和疾病相关基因等方面具有广阔的应用前景.     

RNA干扰技术及其在遗传育种中的应用

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是二十世纪末发现的一种基因沉默机制，具有广大的应用前景。本文就RNAi的可能机制、特征、RNAi技术中存在的问题及其在基因组、基因表达调控和干细胞研究、基因治疗、育种等方面的应用进行了综述。     

RNA干扰及其在动物繁殖中的应用

RNA干扰(RNAi)是由短的双链RNA降解内源的同源mRNA而引发的转录后基因沉默现象。RNAi作为一种调控特定基因表达的工具,被称为基因组的免疫现象,已成为当前繁殖领域的研究热点之一。该文就RNAi的发现、RNAi的过程及其在动物繁殖中的应用等方面的研究进展作一概述。     

RNA干扰抑制家畜病毒感染的研究进展

RNAi(RNA-mediated interference)是一种由序列特异性的dsRNA(double stranded RNA)作为触发器来触发同源mRNA降解从而引起基因沉默的细胞机制。利用RNAi方法可以通过沉默特异基因来对目的基因进行功能性分析,另外通过干扰RNA抑制病原性基因的表达来进行病毒性疾病治疗的研究已取得了显著的成就。作者对RNAi的作用机制、RNAi在抑制病毒复制和抵抗病毒感染动物方面的研究进展及应用前景和存在问题进行了综述。     

RNA干扰技术及其在遗传育种中的应用

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是二十世纪末发现的一种基因沉默机制,具有广大的应用前景。本文就RNAi的可能机制、特征、RNAi技术中存在的问题及其在基因组、基因表达调控和干细胞研究、基因治疗、育种等方面的应用进行了综述。     

RNA干扰技术在动物抗病育种中的应用前景

动物疾病尤其是病毒性疾病一直是畜牧业亟待解决的问题,随着转基因技术的出现,生产遗传修饰动物来抵抗特定传染病的策略备受关注。从长远利益来看,这种基因工程动物从遗传本质上提高了畜禽的抗病能力。转基因抗病育种在未来可能成为减少动物传染性疾病的最有前途的方法之一。RNA干扰是双链RNA特异性诱导同源基因表达沉默的现象。研究证实,RNA干扰在细胞水平,小鼠模型以及动物个体的抗病毒效果是非常明显的,RNA干扰技术作为抗病毒策略为生产抗病转基因动物提供了光明的应用前景。RNA干扰技术介导的抗病转基因动物的研究相继取得了阶段性进展,抗疯牛病转基因羊和牛以及抗内源性逆转录病毒猪已经成功获得,虽然目前获得的转基因动物类型有限,但为继续生产抗病转基因家畜提供了有效的参考和依据。     

RNAi及其在家畜繁殖中的应用

双链RNA介导的、序列特异的基因沉默的过程称为RNAi(RNA interference)。它作为新兴的基因阻断技术,具有特异性、高效性,存在放大效应等,为功能基因特异性失活提供了一种有效方法,正成为研究基因功能的重要工具。同时,RNAi还为基因组、基因治疗、药物探察研究提供了有效技术。本文简单介绍了RNAi的发现、特征、作用机制及在家畜繁殖中的应用等方面的研究进展。     

RNAi导致基因沉默的机制和应用进展

RNAi主要通过双链RNA(dsRNA)被核酸酶切割成21~23 nt的干涉性小的RNA,即siRNA,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现的；RNAi需要多种蛋白质因子以及ATP参与,而且具有生物催化反应特征；RNAi具有高效性和高度特异性,作为一种关闭特定基因的新技术,为基因功能研究提供了一个快速、简便的方法,在后基因组时代应用前景广阔。     

高效抑制O型口蹄疫病毒shRNA分子的筛选与验证

针对O型12蹄疫病毒（Foot—and—mouth disease veirus，FMDV）基因组高度保守的VP1和3D区段，选取了120个干扰靶位，根据RNAi技术原理，构建了包括对照在内的82个shRNA表达质粒；通过细胞攻毒试验，提取细胞毒液RNA，然后RT-PCR，最后real—time PCR检测病毒和shRNA的表达量。结果显示，干扰质粒组基因表达抑制率为63％～96．8％，其中pSiRe—Zs—VP1—54和pSiRe-Zs-3D-12等2个表达质粒抑制效率最好，分别为96．8％和87％，表明这2个表达质粒能够明显抑制FMDV的复制。     

RNAi抑制家蚕杆状病毒增殖复制的研究进展

RNA沉默(RNAi,RNA interference)是dsRNA介导的特异性基因表达沉默现象,是生物界一种古老而且进化上高度保守的基因表达调节机制。它是目前抗击病毒的一种重要手段。本文对RNAi的发展、作用机制及在抗家蚕杆状病毒方面进行了综述。     

表达短ie-1 dsRNA的转化细胞对家蚕核型多角体病毒的抑制作用

为了利用RNAi技术提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抗性,根据BmNPV复制必需基因ie-1设计其相应的dsRNA,构建带有ie-1 dsRNA表达盒的转基因载体piggyantiIE-Neo,结果显示:表达短ie-1 dsRNA的稳定转化Bm细胞,对BmNPV的增殖表现出抑制作用,但在病毒感染后期,由于病毒恢复增殖导致RNAi的效果被掩盖。通过反向PCR分析外源DNA片段插入基因组位点,结果显示:在转化细胞中,外源DNA可通过随机整合或按照piggyBac特定的转座位点TTAA插入细胞基因组。     

山黧豆CASase基因的克隆及RNAi载体的构建

β-腈基丙氨酸合成酶（CASase）是调控山黧豆（Lathyrus sativus）内源毒素β-ODAP合成的关键酶。本研究以山黧豆幼根RNA为模板,利用RT-PCR扩增了505 bp的山黧豆CASase基因序列;通过Gateway BP反应将扩增片段连接到入门载体构建pENTR-CASase。经测序验证后,将目的片段插入到植物表达载体构建pSGRNAi-CASase,并将其转化到农杆菌GV3101中;为进一步的遗传转化奠定了基础。     

RNA干扰的研究方法

RNA干扰(RNAi)技术是把与内源mRNA编码区同源的小片段外源双链RNA(doublestranded RNA)导入细胞中,导致特定基因表达沉默的一种技术.本文简要描述了RNAi的起源、原理、在动物方面的应用领域;主要叙述了RNAi技术的机制以及siRNA试验步骤,包括siRNA的设计、合成、检测方法等;比较了各种方法的特点.     

RNAi基因沉默的动力学研究进展

RNA干扰(RNAi)是一种由小双链RNA介导的转录后基因沉默现象。在RNAi发挥基因沉默效能的过程中,许多因素都会直接或间接的影响最终的沉默效率和沉默时间。论文从siRNA类型的选择、siRNA的递送和细胞内的RNAi途径3个方面对RNAi途径中各个影响其效能发挥的因素及其解决方法做一综述,同时对描述RNAi基因沉默动力学的数学模型及其应用进行了介绍。