河豚毒素荧光偏振免疫分析方法的建立

河豚毒素主要存在于河豚鱼中,是一种致命的神经毒素。将量子点标记于河豚毒素,并将其作为示踪物,获得高且稳定的荧光信号,建立荧光偏振免疫分析技术检测河豚毒素。所建立的方法检测河豚毒素检测范围为1.36~101.27μg/L,IC50值为11.76μg/L,检测限为0.67μg/L。在该方法的检测范围内标准平均回收率为(99.91±2.60)%,变异系数为2.60%。与竞争性ELISA相比较,本方法河豚毒素测定值与竞争性ELISA测定值呈线性相关,且具有简单、快速等特点,可应用于临床诊断和食品安全检测。     

肌旋毛虫免疫亲和层析抗原的制备及其特性

以Sepharose 4B为载体,兔抗旋毛虫多克隆抗体为配体,纯化了旋毛虫的S_3抗原,得到亲和层析抗原.本实验结果表明,存在于S_3抗原中的主要抗原成分,同样存在于亲和层析抗原中,亲和层析抗原的分子量范围在103000～40000 u之间,等电点范围在pH4.7～8.8之间.亲和层析抗原经转印后,在硝酸纤维素膜上至少有7条显色带,其中分子量为48000 u,50000u,58000u和87000u的4种蛋白的抗原性较强,而以分子量为48000u的蛋白抗原性最强.     

恩诺沙星免疫抗原的制备与鉴定

通过N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法合成恩诺沙星免疫抗原,用聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外光谱和酶联免疫法分析对恩诺沙星免疫抗原的结构、分子量、免疫原性等特征进行鉴定。经紫外光谱分析恩诺沙星-牛血清白蛋白偶联比为5:1,紫外光谱峰形发生变化并位移。间接酶联免疫法分析证明其免疫兔所获得的抗体与恩诺沙星有良好的特异性,半数抑制浓度为60ng/mL。实验结果表明成功合成了恩诺沙星免疫抗原,并获得了抗恩诺沙星抗体,为ELI SA或TRFI A等免疫方法的进一步研究提供了试验基础。     

重金属镉离子免疫抗原初步制备与鉴定

选用螫合剂Isothiocyanobenzyl-EDTA（IEDTA）分别桥接载体蛋白KLH和BSA。络合重金属镉离子，初步制备免疫抗原和检测抗原，免疫Balb／C小鼠并制备抗血清；利用紫外分光光度法、三硝基苯磺酸法（TNBs）和测定抗体效价初步鉴定抗原。建立了重金属镉离子ELISA快速检测技术及单克隆抗体高效特异的免疫与检测抗原。抗原紫外吸收峰与载体蛋白紫外吸收峰有明显差异，2种抗原游离氨基酸含量在33％～40％之间，抗原蛋白含量均高于70％，血清效价在1：81920以上。结果提示，免疫抗原特异性较好。可用于单克隆抗体制备。     

弓形虫病免疫的研究：弓形虫排泄分泌抗原制备及其对怀孕母羊免疫效…

弓形虫ＧＪＳ株速殖子通过传代细胞（ＢＨＫ－２１）培养，制备排泄分泌抗原（Ｅ／ＳＡ），蛋白含量为２．０９５ｍｇ／ｍｌ；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳分析显示２１条区带，分子量在１８～１２０ＫＤ，其中６８ＫＤ为主带，次带７条。用Ｅ／ＳＡ与佐剂（Ｍ－２０６）制备Ｅ／ＳＡ疫苗，对３０只（２公，２８母）弓形虫血检抗体阴性，混群自然交配５０天的适龄健康绵羊随机分组进行免疫，间隔２０天再加强免疫１次。第１组于混群后８     

西马特罗免疫抗原合成方法的比较

为探讨西马特罗(CIM)免疫抗原合成的有效途径,本研究采用重氮化法、碳化二亚胺法和BS3法分别合成CIM免疫抗原,并采用SDSPAGE和紫外光谱扫描对合成抗原进行了鉴定,并将3种免疫抗原免疫BALB/c小鼠,对免疫效果进行了比较。试验表明,3种方法均合成了CIM免疫抗原,经偶联比的计算,重氮化法的偶联比比较理想,且免疫小鼠后可获得高效价、高特异的抗体。     

感染IBDV雏鸡免疫器官对颗粒抗原的免疫应答

对１日龄感染和未感染传染性法氏囊病毒雏鸡接种小鼠红细胞后，免疫中枢器官（法氏囊、胸腺），外周免疫器官（脾脏），以及消化道和呼吸道相关的局部免疫组织（盲肠扁桃体、哈德尔腺）中浆细胞、ＡＮＡＥ＾＋Ｔ细胞、淋巴细胞数的变化及其分布进行了检测。结果表明：１日龄雏鸡感染传染性法氏囊病毒后，其免疫器官组织对小鼠体液免疫和细胞免疫应答均明显降低。     

磺胺二甲嘧啶免疫抗原的合成研究

试验旨在研究磺胺二甲嘧啶（SM2）免疫抗原的合成。用重氮化方法将SM2分别与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联,合成了免疫抗原SM2-BSA和包被抗原SM2-OVA。紫外扫描和聚丙烯胺凝胶电泳结果表明, SM2-BSA的紫外吸收光谱与BSA、SM2相比均发生了改变,证明偶联成功,并测得SM2-BSA的结合比为13∶1;用SM2-BSA免疫BALB/c小鼠,获得了高效价和特异的多克隆抗体。结果表明,半抗原SM2和载体蛋白偶联成功,并可获得高价、敏感的多克隆抗体。     

Isolation and characterization of an immunogen from the louse Polyplax spinulosa

The reaction of Polyplax spinulosa protein components with antigen-specific rat antisera and with five plant lectins is described. In immunoblotting, the antisera from rats infested with the louse P. spinulosa specifically recognized from 7 to 11 antigenic components of louse whole-body homogenates. Affinoblotting analysis with lectins showed that 10 of these components were glycoproteins with different types of glycan structure. Only one immunogenic antigen was isolated using immunoaffinity chromatography with the gammaglobulin fraction of an antigen-specific antiserum as immunospecific ligand. Further electrophoretic and immunochemical analyses revealed that it was a glycoprotein with relative molecular weight (RMW) 31 kDa and with high mannose type of oligosaccharide.     

盐酸克伦特罗免疫原的合成与鉴定

盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CL) ,异名克喘素、氨哮素,俗名“瘦肉精”。我国农业部亦于1 997年发文明令禁止,至今每年都要开展各种打击非法生产、销售、使用盐酸克伦特罗的专项治理活动,但收效并不理想。盐酸克伦特罗屡禁不止的原因之一是目前的检测方法高效液相色谱-质谱联用法(HPLC -MS)和气相色谱-质谱联用法(GC -MS)不能适应市场监督需要快速、简便、价廉的要求。酶联免疫吸附检测法(ELISA)是一种快速检测方法,不需要复杂的仪器设备,灵敏度高,特异性强,样品前处理简单,非常适合大量样品的检测,便于现场监控。德、美等国都已将EL…     

猪囊尾蚴头节抗原的制备及间接ELISA方法的建立

采用Sephadex G-200层析技术纯化猪囊尾蚴头节抗原,用纯化抗原包被ELISA板,建立间接ELISA方法。通过各种条件优化,最终确定最佳试验条件为:抗原最适包被量为30mg/L;血清稀释度为1∶800;血清最佳反应时间为60min。结果表明,该方法具有较好的稳定性和重复性,可用于分泌抗猪囊尾蚴头节单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选。     

河豚毒素的研究进展

河豚毒素是最先从河鲀中分离提取得到的一种剧毒的生物碱类天然神经毒素,后来在包括水生和陆生的多种动物体中均有发现。河鲀正在成为福建省的一种重要养殖鱼类,药理研究也发现河豚毒素在治疗成瘾、癫痫、局部和全身麻醉及镇痛等方面发挥着重大的作用。河豚毒素的研究具有重要意义,但是河鲀体内河豚毒素的确切来源目前仍没有定论,其生物合成途径也尚待阐明。本文对河豚毒素理化性质、作用及来源等方面进行综述。     

抗隐孢子虫卵黄抗体制备及间接ELISA方法建立

用纯化的隐孢子虫卵囊,经反复冻融、冰浴超声波处理制备免疫抗原,免疫产蛋鸡,收集免疫后的鸡蛋,采用水稀释二步硫酸铵法纯化IgY抗体,用棋盘滴定法建立的间接ELISA方法测得IgY抗体的效价为1∶12 800,经ELISA检测,该抗体特异性强、重复性好,可用于隐孢子虫抗体检测及流行病学调查。     

无色孔雀石绿免疫原的合成与鉴定

用化学方法合成了硝基无色孔雀石绿（NO2-LMG），还原为氨基无色孔雀石绿（NH2-LMG），经红外光谱扫描鉴定NH2-LMG为所需化合物。氨基无色孔雀石绿经重氮法处理后与兔血清白蛋白（RSA）载体蛋白相连，通过紫外分光光谱鉴定，偶联产物与其前体物相比吸收峰发生了飘移，说明偶联成功。通过动物免疫试验和ELISA抗体特异性试验对该人工合成抗原免疫原性和与无色孔雀石绿反应原性的鉴定，表明成功合成了无色孔雀石绿免疫原。     

生物降解型吡喹酮微囊的构建及其药剂学性质的研究

以生物可降解的明胶和阿拉伯胶为囊材 ,采用复凝聚法制得适合肌肉注射的吡喹酮微囊 ;考察其形态学特征及吡喹酮微囊的体外动态与静态释药情况。建立高效液相紫外色谱测定微囊内药物含量。结果 3批生物降解型吡喹酮微囊显微镜下和电镜下外观均一、光滑 ,平均载药量为 10 .0 3%,平均包封率为 6 1.75 %,平均粒径为45 .1μm;体外释药研究结果表明微囊内的药物无突释现象。该生物降解型吡喹酮微囊可达到缓慢释放和长效制剂的基本要求。     

草坪草病害风险性评估体系的初步建立及应用

为探索建立统一的草坪草病害风险性评价尺度,本研究引入有害生物风险分析（Pest Risk Analysis）理论。基于有害生物风险分析的规定程序,结合草坪绿地生态系统特点及模糊数学理论,利用德尔菲法及层次分析法,探讨了草坪绿地病害风险分析体系的建立、评价指标和评价值的计算方法。初步建立了三层次17个评价指标的综合评价模型R=5P1×P2×P3×P4×P5,并运用此模型评价了草坪草5种主要病害的风险性危害值。结果表明,草坪草褐斑病(Rhizoctonia solani)、腐霉病(Phythium ultimum)和镰刀菌枯萎病(Fusarium spp.)3种病害的风险性危害值在0.6～0.8,风险级别为高风险;草坪草锈病(Puccinia spp.)和德氏霉叶枯病(Drechslera spp.)2种病害的风险性危害值在0.4～0.6,风险级别为中等风险。在实际工作中,应根据不同的病害风险等级制定相对应的风险管理策略及具体办法。     

草坪草植株再生体系研究进展

对草坪草在愈伤组织培养、花药离体培养、悬浮细胞培养以及原生质体培养等方面的研究进展进行综述。分析目前该领域研究出现的问题,并展望了草坪草离体培养的发展趋势。     

马波沙星单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的初步建立

马波沙星(MBF)是一种氟喹诺酮类抗菌药。本试验利用碳二亚胺法合成马波沙星免疫原和包被原,经紫外分光光度法、SDS-PAGE和免疫学方法,鉴定人工抗原合成成功。通过免疫小鼠和单克隆抗体技术,获得2株可分泌马波沙星抗体的杂交瘤细胞株(5G2和7H5),并将建筑细胞注入小鼠的腹腔内,获得腹水型单克隆抗体。经过纯化和ELISA鉴定,结果表明5G2株单克隆抗体的效价较高,达1.28×10^5,其单抗亚型是IgG2b,轻链是Kappa。经ELISA方法优化了最佳封闭液和抗原抗体的最佳工作浓度,当MBF药物浓度在100~5000pg/mL时,有良好的线性关系,线性方程y=0.3798x-0.6613,R^2=0.9872,IC50=1.029pg/mL,LOD=45.13pg/mL,LOQ=322.59pg/mL。