广西鸭圆环病毒的流行病学调查

为了解广西鸭圆环病毒(Du CV)流行情况,试验采用PCR技术对2010—2014年间采自南宁、柳州、桂林等10个城市活禽市场的2 897份临床健康鸭内脏组织样品进行检测,同时对采自83个鸭群的187份发病或死亡鸭组织样品分别进行Du CV、大肠杆菌(E.coli)、鸭疫里氏杆菌(RA)、禽流感病毒(AIV)、鸭肝炎病毒(DHV)、副黏病毒(AMPV)、鸭坦布苏病毒(DTUMV)检测。结果表明:10个城市均检测出Du CV阳性样品,其平均检出率为8.01%(232/2 897);187份鸭组织样品中Du CV样品阳性率为20.32%(38/187),其中Du CV单纯感染仅占18.42%(7/38),而二重感染和三重感染的比率分别为50.00%(19/38)和31.58%(12/38)。说明Du CV在广西大部分地区鸭群中呈不同程度的流行,感染率逐年升高,且Du CV感染往往造成其他病原继发感染而引起鸭群发病甚至死亡。     

玉林市鸭圆环病毒感染的流行病学调查

为了解广西玉林市鸭圆环病毒( duck circovir-us,DuCV)的流行情况,项目组通过ELISA血清抗体检测的方法对玉林市周边140个规模化鸭场采集的血清样品4200份进行检测,结果显示ELISA抗体检测阳性率为16. 33％( 686/4200 ) ,表明玉林市鸭群存在DUCV隐形感染的可能. 1 样品采集...     

广西猪圆环病毒3型流行病学调查与分析

本研究旨在了解新发猪圆环病毒3 型（porcine circovirus 3,PCV3）在广西猪群的感染情况及流行特点,为有效防控PCV3提供科学依据。试验采用PCR检测方法对2017年9月至2019年3月广西482个规模猪场送检的917份病猪样品进行PCV3检测,并分析PCV3阳性率在广西不同地区、年份、季节和年龄段猪群之间的差异。对145份PCV3阳性病料进行猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪伪狂犬病病毒（PRV）和猪流行性腹泻病毒（PEDV）检测。结果显示,PCV3除在百色、防城港未检出,在广西其他12个地市均存在不同程度的感染;2017~2019年广西PCV3样品阳性率和PCV3猪场阳性率均呈逐渐上升趋势;夏季PCV3阳性率最低,且明显低于其他3个季节;育肥猪PCV3阳性率最高,为21.70%,其次是流产母猪、保育猪、流产胎儿,阳性率分别为20.00%、19.05%和11.02%,哺乳仔猪PCV3阳性率最低,为8.21%;PCV3单一感染率较高,为30.34%,与其他病原混合感染情况也较为常见,甚至出现四重感染。调查结果表明,PCV3感染在广西普遍存在,且近年来感染呈增加趋势,可能有一定的季节性,对各生长阶段猪群均有一定程度的危害,以育肥猪最为严重,对母猪和保育猪危害也较大;PCV3单一阳性率较高,但仍以混合感染为主,尤其是与PRRSV和PCV2的混合阳性率较高,提示这3种病原在感染致病过程中可能存在协同作用。     

江西省部分地区鸭圆环病毒的检测与分子特点

本试验旨在了解江西部分地区鸭圆环病毒(duck circovirus, DuCV)的流行情况及其优势流行基因型。通过采集病死鸭的组织样品并提取组织DNA,利用PCR对鸭圆环病毒进行检测,并对部分阳性PCR产物进行测序,用BLAST、MEGA 10和DNAstar分析序列相似性,绘制系统进化树。结果,8个养鸭场中有5个鸭场检出鸭圆环病毒;42份组织样品中有18份为鸭圆环病毒阳性,阳性率为42.9%;PCR产物序列测定及BLAST分析显示均为鸭圆环病毒的基因片段,与GenBank上登录的相应序列相似性均在95%以上;序列进化分析表明,所测5条鸭圆环病毒序列均属于DuCV-1型,其中有3条序列属于DuCV-1a亚型,2条序列属于DuCV-1b亚型;5条所测序列的核苷酸相似性均在97%以上,且与其他DuCV-1型序列相似性均在95%以上,与DuCV-2型相应序列相似性均在80%～90%之间。结果表明,江西部分地区鸭圆环病毒的流行较为严重,且优势基因型为1型。本研究对了解江西地区鸭圆环病毒病的流行及开展该病的防控提供了一定的理论依据。     

鸭甲型肝炎病毒1型与3型双重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

旨在建立一种针对鸭甲肝病毒1型（DHAV-1）和鸭甲肝病毒3型（DHAV-3）的高效快速、高灵敏度和高特异性的双重TaqMan实时荧光定量PCR （q-PCR）检测方法并应用于临床疑似样品检测。根据DHAV-1和DHAV-3的VP1基因保守区域,分别设计合成了2对特异性引物和探针,在此基础上建立并优化了双重TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果显示：优化后标准曲线的相关系数（R²）均在0.999以上,扩增效率（E）在105%~110%,其组内变异系数（i-CV）与组间变异系数（c-CV）均在0.77%以下。运用双重q-PCR方法对不同稀释度的混合质粒与病毒核酸进行检测,结果表明,建立的双重TaqMan q-PCR特异性高;同时检测DHAV-1和DHAV-3的灵敏度均可达10个拷贝,分别是常规PCR方法的1 000倍和100倍。对40份来自苏中、苏北地区的疑似鸭肝炎病毒感染的鸭组织病料进行检测,结果表明,q-PCR方法检出36份阳性病料,阳性率为90%;而常规PCR方法未能检出高Ct值的样品,阳性率为72.5%（29份阳性病料）。建立的双重TaqManq-PCR检测方法为DHAV-1与DHAV-3的临床样品检测提供了高效、灵敏、特异的工具,推动了临床分子流行病学调查及病毒定量分析等研究。     

辽宁省猪圆环病毒2型血清学调查与分析

为了解辽宁省猪圆环病毒2型（PCV2）感染情况,对来自辽宁省14个市的59个规模化商品猪场的734份血清、17个种猪场的329份血清、45户农村散养户的146份血清,采用ELISA（酶联免疫吸附试验）方法进行PCV2抗体检测。结果显示,59个规模化猪场中有51个为阳性,阳性率86.4%（51/59）,其734份样品中有351份为阳性,样品阳性率为47.8%（351/734）;17个种猪场中有15个为阳性,阳性率为88.2%（15/17）,其种猪群样品阳性率为47.6%（81/170）,仔猪群样品阳性率为29.6%（47/159）;45户散养户中有23户为阳性,阳性率为51.1%（23/45）,检测的146份样品有58份阳性,样品阳性率39.7%（58/146）。可见,PCV2在辽宁省各地的感染已经很普遍,并且种猪群感染率高于仔猪群,规模场的感染率高于农村散养户。     

广西猪圆环病毒2型感染的流行病学调查

结合流行病学、临床症状、病理变化，采用PCR技术，对2004年1月至2005年5月采自广西14个市97个疑似猪圆环病毒2型（PCV2）感染发病猪场的197份组织病料（脾、肺、淋巴结）进行了PCV2检测；同时，对鉴定为PCV2阳性的组织病料和猪场进行了猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪流感病毒（SIV）和猪伪狂犬病病毒（PRV）的检测，另外，对6个地（市）11个生猪屠宰场采集的外观健康屠宰猪的295份组织样品（脾、肺、淋巴结）进行了PCV2检测。结果显示，在197份组织样品中检出PCV2阳性病料108份，平均阳性率为54．82％（108／197），阳性猪场62个，平均阳性率为63．92％（62／97）。PCV2与PRRSV、CSFV、SIV、PRV混合感染的组织病料总阳性率为42．13％（83／197），混合感染的猪场总阳性率为57．73%（56／97）。从21头外观健康屠宰猪的组织样品中检测到PCV2，阳性率为7．10％。由此可见，PCV2感染在广西猪群中已普遍存在，混合感染和健康带毒现象使病情更加复杂。     

2018年广西重要猪源病毒性疫病流行病学调查

为了解2018年广西猪群重要疫病流行情况,试验采集广西各地的病死猪组织样品及病猪腹泻拭子,应用多重实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）,应用多重实时荧光定量PCR检测猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒1型（PCV1）、猪圆环病毒2型（PCV2）及猪圆环病毒3型（PCV3）,应用多重RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪轮状病毒（PRoV）。结果显示,所检测的694份组织样品中,CSFV、PRRSV、HP-PRRSV、PRV、PCV1、PCV2、PCV3的阳性率分别为11.10%、18.88%、7.20%、5.19%、2.45%、67.00%和5.76%;2种病原混合感染率为41.21%,3种病原混合感染率为4.32%,其中PRRSV和PCV2混合感染率最高。所检测的792份肠内容物及拭子腹泻样品中,PEDV、PDCoV、TGEV、PRoV的阳性率分别为9.72%、5.81%、1.77%和6.31%;2种病原混合感染率为5.30%,其中PEDV和PRoV混合感染率最高。结果表明,当前多种重要病毒性疫病仍在广西猪群发生和流行,并且多重感染普遍存在,应进一步加强监测和防控。     

2021年云南省玉溪市活禽交易市场禽流感病毒监测

为了解云南省玉溪市活禽交易市场禽流感病毒污染情况,2021年对该市8个县（市、区）活禽市场进行采样检测。全年共采集63场次1 455份棉拭子样品（禽咽喉/泄殖腔双拭子860份、环境拭子317份、运输工具拭子278份）,采用荧光RT-PCR方法进行流感病毒A型、H5/H7/H9亚型流感病毒核酸检测。共检出A型流感病毒核酸阳性435份,未检测到H5和H7亚型病毒核酸阳性;除检出7份未分型阳性样品外,在44场次检出H9亚型病毒核酸阳性428份,场次阳性率为69.84%,样品阳性率为29.42%,其中活禽、环境、运输工具样品阳性率分别为32.56%、25.87%、23.74%,差异具有统计学意义（P <0.05）。一年四季均能检测到H9亚型病毒阳性,但3—6月份样品阳性率低于年均阳性率,1、2、7、10、12月样品阳性率明显高于其他月份,各月份间样品阳性率差异具有统计学意义（P <0.01）。各县（市、区）的场次阳性率存在差异（P <0.05）,但样品阳性率差异无统计学意义（P> 0.05）。结果表明：玉溪市活禽市场H5、H7亚型高致病性禽流感病毒的污染状况得到有效控制...     

2015—2016年广西梧州市主要病毒性猪病的检测与分析

采用RT-PCR及PCR技术,对广西梧州市7个县（市、区）屠宰场2015—2016年送检的1 304份猪组织样品（肺脏、淋巴结、脾脏）进行高致病性蓝耳病病毒（HPRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）核酸检测,对7个规模场送检的70份病死猪组织病料样品（肺脏、淋巴结、脾脏）进行HPRRSV、CSFV、伪狂犬病病毒（PRV）、圆环病毒（PCV）核酸检测。采用ELISA技术,对梧州市7个县（市、区）送检的8 572份血清检测猪瘟免疫抗体,对2 066份血清检测猪蓝耳病免疫抗体。结果显示：HPRRSV、CSFV核酸检测均为阴性;规模场病死猪组织病料的PRV核酸阳性率为14.3%,PCV为57.1%;猪瘟免疫抗体合格率为90.41%,蓝耳病免疫抗体合格率为73.48%。监测结果表明：梧州市流行的生猪高热病主要涉及猪伪狂犬病和猪圆环病毒病2种病毒病;猪蓝耳病和猪瘟的强制免疫,有效控制了该地主要猪病毒性疫病的发生与流行。     

2018-2020年广东鸭圆环病毒流行病学调查

为调查广东省鸭圆环病毒(DuCV)流行情况,本研究根据已报道的PCR方法,对2018年12月-2020年7月采自广东省9个不同地区的910份临床鸭组织病料进行鸭圆环病毒(DuCV)、大肠杆菌(E.coli)、腺病毒(FAV)、细小病毒(DPV)、禽流感病毒(AIV)和鸭坦布苏病毒(DTUMV)检测。结果表明:DuCV总检出率为23.18%(211/910);2019年第三季度较高,为34.61%;DuCV单重感染为16.24%(32/197),二重感染和三重感染分别为62.43%(132/197)和21.31%(42/197)。研究结果表明,DuCV在广东省鸭养殖场中存在不同程度的流行,夏季和冬季为多发,DuCV的感染会造成免疫抑制进而导致其他病原的感染,加重疾病的严重程度和死亡率。本研究调查结果为广东省养殖户了解广东地区DuCV的流行态势提供可支撑的数据。     

An investigation of duck circovirus and co-infection in Cherry Valley ducks in Shandong Province, China

The co-infection of duck circovirus (DuCV) with Riemerella anatipestifer (RA) or/and Escherichia coli (E. coli) or/and duck hepatitis virus I (DHV-I) in Cherry Valley ducks in China's Shandong Province was investigated by using polymerase-chain-reaction (PCR)-based methods. For this study, 742 ducks sampled at random from 70 duck farms during 2006-2007 were examined using PCR and dot-blot hybridisation (DBH) tests. Overall the DuCV infection rate was 33.29%. Compared with those at 2 weeks of age, the ducks at 3-4 weeks of age were more susceptible to DuCV infection. Compared with the DuCV-negative ones, the DuCV-positive ducks had a higher rate of infection by DHV-I (25.5% vs. 7.475%), RA (23.48% vs. 8.28%) and E. coli (16.19% vs. 4.85%). This investigation shows that DuCV infection is common in Cherry Valley ducks on some farms in Shandong Province.     

鸭圆环病毒ORF3基因的克隆及序列分析

为了解鸭圆环病毒(DuCV)不同分离株ORF3基因变异情况及分析其同源性,本研究从临床病料中分离10株DuCV,扩增ORF3基因并测定其序列.通过与已知序列比对分析发现,DuCV ORF3基因分为两种基因型,大小分别为237 bp和297bp.ORF3基因同一基因型之间的核苷酸同源性为95.8％～100％,氨基酸同源性为88.6％～100％,而不同基因型之间的核苷酸同源性仅为87.8％～91.6％,氨基酸同源性仅为72.2％～81.0％.     

Genetic diversity and genotype analysis of duck circovirus

To investigate the genetic diversity and genotype of duck circovirus (DuCV), nine full-length DuCV genomes were determined from clinical samples. Multiple sequence alignment and phylogenetic analyses were performed on the nine viral genome sequences as well as on 27 genome sequences retrieved from the GenBank database. Pairwise analysis showed that the determined genome sequences have a genome organization identical to the 27 sequences and share 83.3%-99.8% identity among themselves and 82.6%-99.9% with the other 27 sequences. Phylogenetic analysis revealed that all 36 viral genome sequences are divided into two lineages, DuCV1 and DuCV2, in which the nucleotide diversity between genome sequences in these two lineages ranged from 13.2%-17.4%; these may be regarded as two types of viruses. Viruses under DuCV1 and DuCV2 are further clustered into different sublineages. When analyzed using the method for genotype definition proposed by Grau-Roma et al, these different sublineages can be defined as genotypes DuCV1a, DuCV1b, DuCV2a, DuCV2b, and DuCV2c. In addition, the viral sequences obtained from mainland China are different in genomic size and share a diversity of no less than 13.2%, including the sequences that came from all genotypes. This suggests that the DuCVs prevalent in domestic duck flocks in China are ecologically divergent.     

鸭圆环病毒套式PCR检测方法的建立

根据GenBank发布的鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)序列(AY228555),运用Primer Premier 5.0设计2对引物,建立了适合DuCV快速检测的套式PCR方法,采用该方法对从安徽省望江县采集的发病鸭肝脏、胸腺、法氏囊、肾脏和脾脏等内脏病料进行DuCV检测。结果显示,套式PCR对所有内脏病料均能扩增出340 bp的条带,而正常鸭胚、健康鸭肝脏、鸭瘟病毒、禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、网状内皮组织增生病毒、鸡传染性贫血病毒、鸭源大肠杆菌和鸭疫里氏杆菌的扩增结果均为阴性;该方法第1次扩增的敏感性是1 ng,第2次扩增的敏感性是1 fg,第2次比第1次扩增的敏感性高106倍;表明本试验所建立的套式PCR方法可用于鸭圆环病毒(DuCV)感染的临床诊断和流行病学调查。     

Development of a polymerase chain reaction procedure for detection and differentiation of duck and goose circovirus

This article reports the complete nucleotide sequences of four duck circovirus (DuCV) isolates from sick ducks in Taiwan and development of a polymerase chain reaction (PCR) for detection and differentiation of goose circovirus (GoCV) and DuCV. Sequence comparison showed that Taiwanese DuCV isolates had 82.5%-83.8% nucleotide sequence identity to the German and North American DuCV isolates. This is the first report on the presence of DuCV and its associated diseases outside Germany. A PCR test was developed using a universal primer pair based on conserved sequences present in the genomes of GoCV and DuCV. This PCR test could detect and differentiate between GoCV and DuCV by the size of PCR product each virus produced (256 bp for GoCV and 228 bp for DuCV). Application of this PCR test to samples of bursa of Fabricius from sick birds in the field showed that 9 of 26 goose samples contained GoCV, while 13 of 34 duck samples contained DuCV. This PCR test could serve as a fast and sensitive method for detection and differentiation of DuCV and GoCV.     

2019年我国部分地区鸭圆环病毒基因序列测定与分析研究

为了解近年鸭圆环病毒流行毒株的基因遗传特点和变异情况,通过采用PCR的方法对我国部分地区的30份鸭圆环病毒阳性样品进行全基因组扩增与克隆、序列测定及遗传进化分析。结果显示:30株DuCV流行毒株之间的全基因序列同源性为85.8%~99.9%,其中26株DuCV的全基因序列长为1993~1995 bp,与德国代表株处于同一进化分支,属于基因1型,4株DuCV的全基因序列仅有1988 bp,与中国台湾代表株属于同一进化分支,属于基因2型;Cap蛋白和Rep蛋白的氨基酸序列的变异分析表明Cap蛋白的变异程度要显著高于Rep蛋白。     

鸭圆环病毒PT07基因组序列测定与分析

本研究采用PCR方法从临床健康的番鸭法氏囊组织中分段扩增获得鸭圆环病毒(DuCV)PT07全长基因组,将扩增片段分别克隆,获得重组质粒,测序结果表明,DuCV基因组全长为1988nt。经基因组结构分析发现,DuCVPT07的基因组有3个开放阅读框(ORF),其中V1/rep和C1/cap是2个主要的ORF,分别编码Rep蛋白和Cap蛋白;在V1/rep和C1/cap的5'起始端之间存在与启动滚环复制有关的1个茎环结构和1个正向重复序列。遗传进化分析发现,DuCV可分为2个群,PT07与TC1/2002～TC4/2002和FJ0604同处一个进化分支,而与Ger、33753-52和MH25关系较远。     

鸭新城疫病毒和鸭圆环病毒二重PCR检测方法的建立

本研究根据GenBank中鸭新城疫病毒(NDV)的F基因和鸭圆环病毒(DuCV)的V1/rep基因的保守序列,各设计一对特异性引物,并对二重PCR的扩增条件进行优化,建立了鸭NDV和DuCV的二重PCR检测方法。对混合样品进行扩增,得到2条大小为493bp(鸭NDV)和218bp(DuCV)的特异性条带,与预扩增片段相符。而对番鸭细小病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭源小鹅瘟病毒、鸭H9亚型流感病毒、鸭疫里氏杆菌、大肠杆菌、禽多杀性巴氏杆菌等病原检测,结果为阴性。该方法的敏感性试验表明,鸭NDV的核酸最小量为40fg,DuCV为20fg。     

广西野猪猪瘟病毒感染情况的调查报告

作者报道采用RT-PCR和ELISA方法检测猪瘟病毒在野猪身上的感染情况。采集广西5个地市28份野猪脾淋组织作病毒检测，设计针对猪瘟(classical swine fever, CSF)病毒的特异性引物CSFVE2,进行RT-PCR检测，所检样品结果全呈猪瘟阴性；同时，运用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒检测以上样品，结果也都呈阴性。这一结果初步表明所检测的广西5个地区的野猪没有感染猪瘟病毒。