油菜子叶及下胚轴对潮霉素敏感性研究

[目的]为油菜潮霉素抗性基因的遗传转化提供依据。[方法]以油菜品种沪油19号、苏州青、五月慢的子叶和下胚轴为外植体,研究不同浓度潮霉素处理对其褐化率、出愈率的影响。[结果]潮霉素浓度为3 mg/L时,五月慢、沪油和苏州青的褐化率分别为87.6%、30.7%、40.1%;褐化的临界浓度均为6 mg/L。苏州青下胚轴对潮霉素的耐受性较强,其褐化的临界浓度高于沪油19号和五月慢。潮霉素浓度为6 mg/L时,沪油19号、苏州青、五月慢子叶的出愈率分别为3.7%、2.3%、0,下胚轴的出愈率分别为5.1%、8.1%、2.2%。[结论]以子叶为外植体时,3个品种适宜的潮霉素筛选浓度为6 mg/L;以下胚轴为外植体时,沪油19号和五月慢适宜的潮霉素筛选浓度为6 mg/L,苏州青为9 mg/L。     

加工番茄品种卡那霉素抗性的筛选

利用4个加工番茄品种,研究了加工番茄外植体及幼苗对不同浓度卡那霉素(Kan)的抗性。结果表明,在一定浓度范围内,卡那霉素对加工番茄外植体及幼苗正常生长产生抑制作用,随着Kan浓度增加,抑制作用增强。Kan对加工番茄子叶、下胚轴外植体及幼苗筛选的适宜浓度在75 mg/L左右。幼苗对卡那霉素比子叶外植体敏感,而子叶外植体对卡那霉素又比下胚轴外植体敏感。     

黄梁木遗传转化受体系统对筛选物敏感性研究

【目的】明确农杆菌介导的黄梁木遗传转化体系对筛选物的敏感浓度,为黄梁木遗传转化研究奠定基础。【方法】以黄梁木子叶、胚轴和无菌苗为材料,探讨筛选物卡那霉素、潮霉素、头孢霉素对试验材料生长的影响,以及对农杆菌LBA4404的抑菌效果。【结果】在不定芽分化、生根阶段,卡那霉素的临界浓度分别为20、10 mg/L,潮霉素的临界浓度均为10 mg/L;当头孢霉素的浓度为100 mg/L时,完全抑制农杆菌生长,而且该浓度对黄梁木不定芽分化、生根影响较小。【结论】在黄梁木子叶和胚轴为试验材料的遗传转化体系中,20和10 mg/L的卡那霉素可作为不定芽分化、生根阶段的筛选选择压,10 mg/L的潮霉素可作为两个阶段的筛选选择压;而100～200 mg/L的头孢霉素可作为农杆菌LBA4404的抑菌浓度。     

提高草木犀遗传转化植株再生率技术的研究

[目的]确定草木犀遗传转化植株的适宜的除草荆选择压力。[方法]分别以草木犀试管苗的子叶、下胚轴和破坏生长点的茎尖为外植体,在含有0、1、3、5、10mg／L除草剂草丁膦的分化培养基Ms＋BA3mg/L＋LAA0．2mg/L中对其进行分化培养,筛选适宜的除草剂选择压力,在此选择压力下,对外植体进行遗传转化,并对转化芽进行分子水平检测。[结果]当除草剂浓度为3mg/L时,所有外植体均无再生芽;转化培养后,子叶、下胚轴和破环生长点的茎尖的再生率分别为0．48％、4．29％和10．1t％;分子水平检测结果显示,外源基因已成功转入草木犀转化芽中。[结论]除草剂对草木犀外植体的适宜选择压力为3mg／L,破坏生长点的草木犀茎尖对外源基因的转化效率较高。     

樱桃番茄再生系统的研究

研究了“美味樱桃番茄”的再生系统 ,以子叶盘和下胚轴切段为外植体 ,分析了不同激素及其质量浓度对外植体诱芽和诱根的影响 ,以及外植体对抗生素卡那霉素的敏感性。结果表明 ,适宜的诱芽培养基为 MS+ZT 2 .0 mg/L +IAA 0 .0 5 mg/L ,生根培养基均为 MS+IAA 0 .1m g/L ;卡那霉素筛选质量浓度为 5 0 mg/L。     

向日葵(Helianthus annuus L.)不同外植体组织培养及其再生的研究

【目的】建立向日葵不同外植体离体培养再生体系，为向日葵遗传转化、突变体筛选奠定基础。【方法】以不同基因型向日葵为材料，研究了向日葵不同外植体在不同的培养基中诱导不定芽再生的频率。【结果】向日葵不同基因型外植体在含适宜吲哚-3-乙酸（IAA）、6-苄氨基嘌呤（6-BA）等激素的培养基中均较易形成愈伤组织，但愈伤组织诱导不定芽的能力则较弱；不同基因型向日葵外植体的不定芽诱导率依次为子叶节＞下胚轴＞子叶＞真叶；诱导子叶节不定芽再生的适宜6-BA浓度为1.2～1.8 mg•L-1， 下胚轴为1.8 mg•L-1，子叶为0.6 mg•L-1，真叶却未见到诱导出不定芽；MS + 0.03 mg•L-1 IAA + 1.2～1.5 mg•L-1 6-BA培养基可用于向日葵子叶、子叶节和下胚轴再生体系；不同基因型向日葵诱导不定芽的能力差别较大，其中，基因型PR29再生能力较强。【结论】本研究成功地建立了向日葵不同外植体离体培养再生途径，并获得了再生植株。     

新疆紫草遗传转化中的抗生素敏感性研究

以新疆紫草为材料,采用不同浓度梯度抗生素处理未转化和转化子叶的方法,研究了不同浓度的卡那霉素和头孢噻肟钠对新疆紫草子叶出愈和发根的影响.结果表明,卡那霉素对新疆紫草子叶的筛选适宜浓度为60 mg/L,头孢噻肟钠对新疆紫草子叶除菌适宜浓度为600～1 000 mg/L.抑菌继代周期为12 d.     

二色胡枝子遗传转化中抗生素浓度优化研究

探讨了卡那霉素、G418和头孢霉素3种抗生素对二色胡枝子不同培养阶段外植体生长、分化和生根的影响及对农杆菌的抑菌效果.确立了由农杆菌介导的二色胡枝子遗传转化研究中抗生素转化体的筛选浓度和头孢霉素对菌株的抑菌浓度.结果表明:在子叶节转化筛选阶段,卡那霉素和G418的适宜浓度分别为20 mg/L和7.5 mg/L;在抗性芽增殖培养阶段.卡那霉素和G418浓度分别为150 mg/L和15.0 mg/L;在生根阶段,卡那霉素和G418浓度分别为20 mg/L和5.0mg/L.而头孢霉素在各阶段适宜浓度为0～300 ms/L;头孢霉素对农杆菌LBA4404和C58抑制浓度为200～300 mg/L时效果理想.     

农杆菌介导的番茄遗传转化体系优化研究

    研究不同的番茄基因型、培养基类型、苗龄、外植体类型、植物表达载体和选择系统等对番茄再生和遗传转化效率的影响.结果表明,7 d苗龄的子叶或13 d苗龄的下胚轴,预培养2 d,侵染20 min,培养基中添加适宜浓度的玉米素(1.0～2.0 mg·L-1)和IAA(0.1～0.2 mg·L-1),以75～100 mg·L-1的卡那霉素筛选,番茄的转化频率最高,分别为51.4%和37.5%.且以卡那霉素抗性基因为筛选标记的质粒p2301 和pBI121作为植物表达载体,其转化频率高于以潮霉素抗性基因为筛选标记的植物表达载体p1301.     

大豆农杆菌介导转化系统的优化研究

对大豆子叶节再生系统及其农杆菌介导转化的适宜筛选剂浓度进行了优化 ;同时以发芽 5天的大豆无菌苗的下胚轴切段为外植体 ,以抗性愈伤为指标 ,对影响农杆菌介导的大豆转化频率的因子进行了研究。结果表明 :不同大豆品种对选择剂的敏感性存在一定差异。 4种选择剂比较 ,PPT抑制效果最好 ,品种之间比较稳定 ;潮霉素次之 ;卡那霉素的有效浓度最高。 4种选择剂的适宜浓度分别为 :卡那霉素 10 0～ 2 0 0 mg· L-1;G4 185 0～ 75 mg· L-1;潮霉素 2 0～ 30 mg·L-1;PPT5 mg· L-1。农杆菌感染时间和共培养时间均对大豆的转化有明显的影响。感染时间以 8分钟左右为宜 ;共培养时间以 2～ 4天为宜。在农杆菌感染和共培养阶段的乙酰丁香酮浓度和 p H值对大豆转化频率有明显影响。p H值以 5 .4 0～ 5 .6 0为宜 ;乙酰丁香酮的适宜浓度为 10 0 μmol· L-1左右。在感染农杆菌之前 ,让外植体在高渗培养基上预培养一段时间能提高大豆下胚轴切段的转化频率。最适预培养天数为 1d。     

3种抗生素对尾巨桉愈伤组织诱导及植株再生的影响

【目的】研究潮霉素、卡那霉素和头孢霉素对尾巨桉愈伤组织诱导、不定芽分化及生根的影响,确立抑制农杆菌生长的头孢霉素质量浓度。【方法】以尾巨桉无菌苗茎段为外植体,先后接种于添加不同质量浓度抗生素的愈伤组织诱导培养基、不定芽诱导培养基以及生根培养基上,统计愈伤组织诱导率、不定芽诱导率和不定芽生根率,观察头孢霉素对农杆菌生长的影响。【结果】(1)培养基中的潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,200 mg/L时,尾巨桉外植体的愈伤组织诱导率分别为6.7%,12.1%和26.7%;(2)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽分化受到明显抑制,不定芽诱导率分别仅有2.6%,10.2%和7.6%;(3)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽生根困难,生根率分别为10.2%,16.2%和10.1%;当头孢霉素质量浓度≥200 mg/L时,农杆菌生长被完全抑制。【结论】尾巨桉对不同抗生素的敏感性存在差异,在尾巨桉遗传转化过程中,抗性愈伤组织与不定芽诱导的潮霉素适宜质量浓度为10 mg/L,卡那霉素为20 mg/L;生根诱导适宜的潮霉素和卡那霉素的质量浓度分别为15 和25 mg/L;抑制农杆菌生长的头孢霉素较适宜的质量浓度为200 mg/L。     

抗生素对高粱愈伤组织诱导和生长的影响

用羧苄青霉素等抗生素进行抑菌试验,以羧苄青霉素和头孢霉素的抑菌效果较好.头孢霉素对高梁愈伤组织的毒性表现出比羧苄青霉素大.浓度低于500 mg/L羧苄青霉素对高梁愈伤组织的生长起促进作用;而分化率随着羧苄青霉素浓度的提高而下降.在农杆菌介导高梁遗传转化时,选用羧苄青霉素是合适的,浓度以250 mg/L为宜.高梁愈伤组织对潮霉素的反应比卡那霉素更敏感,高梁不同基因型愈伤组织对卡那霉素和潮霉素的反应在褐化(死亡)率上表现不同.在以潮霉素作为抗性筛选标记时,选择压以50～75 mg/L为宜.     

金鱼草基因转化中卡那霉素筛选压力的确定

在以抗生素为筛选标记的基因转化中,确定适宜的筛选压力是提高基因转化率的前提。本研究以卡那霉素为筛选标记,在10、20、30、50和100mg／L的筛选压力下,根据金鱼草下胚轴外植体的生长表现、愈伤组织和芽的分化率确定适宜的筛选浓度。结果表明,适宜卡那霉素的筛选浓度为50mg／L。以此浓度为筛选压力进行遗传转化所获得的部分再生苗经Southernblot鉴定,均为转化株。     

天等1号辣椒遗传转化再生体系的研究

对天等1号辣椒的子叶、带柄子叶、带柄真叶和F lam ingo-b ill外植体进行了遗传转化,比较不同激素及其水平对不同外植体芽分化的影响,以及外植体对卡那霉素的敏感性。结果表明,仅有以F lam ingo-b ill为外植体所形成的愈伤组织,能在培养基M S ZT 1.0m g/L IAA 0.2m g/L A gNO32.0m g/L上诱导芽的分化(63%的分化率),在培养基M S ZT 1.0m g/L IAA 0.2m g/L A gNO32.0m g/L GA32.0m g/L上使诱导芽伸长(15%的芽伸长率)。抗性筛选最适卡那霉素浓度为50m g/L。通过根癌农杆菌介导法转化,共获得33株抗性再生苗。PCR和PCR-Sou thern杂交检测结果表明,94%的抗性植株检测到报告基因nptII片段。     

黑籽南瓜离体再生体系与转基因技术研究

以黑籽南瓜为试验材料,子叶为外植体,建立了黑籽南瓜组织培养再生体系,并对转基因常用的抗生素浓度进行了筛选。试验结果表明：萌发4天的子叶是诱导芽再生的最佳外植体,MS＋1．0mg／LBA是诱导芽再生的最适培养基,1／2MS＋0．5mg／LGA,是适合再生苗壮苗和生根的培养基。100mg／L卡那霉素、50mg／L潮霉素适于南瓜的转基因,初步的转基因研究验证了此转化体系的有效性。     

抗生素对水生植物小对叶外植体分化的影响

[目的]研究小对叶对常用的抗生素的敏感性。[方法]将培养2周的小对叶无菌苗叶片切成0.5 cm×0.5 cm的小块,在添加不同浓度梯度的卡那霉素、潮霉素、壮观霉素和氯霉素4种抗生素的MS1培养基上进行培养,诱导其分化出芽,研究了4种抗生素对小对叶外植体分化的影响。[结果]一定浓度的抗生素对小对叶离体叶片的分化均具有抑制作用;确定了4种抗生素作为小对叶遗传转化研究的筛选标记的适宜浓度:卡那霉素为15 mg/L,潮霉素为10 mg/L,壮观霉素为60 mg/L,氯霉素为20 mg/L;小对叶对4种抗生素的敏感程度为:潮霉素>卡那霉素>氯霉素>壮观霉素。[结论]在进行遗传转化之前,对待转化材料进行抗生素敏感性测定是建立小对叶遗传转化系统的必然条件。     

不同抗生素对矮牵牛叶片培养的敏感性试验

[目的]探讨不同抗生素对矮牵牛叶片再生的影响。[方法]以开花前顶部新展开的矮牵牛叶片为外植体,接种于添加不同抗生素(卡那霉素、头孢唑林钠和潮霉素)的基本培养基MS+2.0μg/ml BA+0.2μg/ml NAA上,研究不同抗生素对叶片再生的影响。[结果]20 mg/L卡那霉素、5 mg/L潮霉素可明显抑制矮牵牛叶片愈伤组织的形成和不定芽分化,而头孢唑林钠在400 mg/L以上时才会对不定芽分化产生不良影响。[结论]为建立矮牵牛的遗传转化体系提供了试验参考。