共查询到20条相似文献,搜索用时 640 毫秒
1.
应用分子生物学技术构建了LacZ报告基因的pcDLacZ真核表达载体 ,并对多种促进基因表达的物质进行了筛选。应用筛选的促进基因表达物质对pcDST基因疫苗的免疫增强效果进行了观察。结果 :构建的LacZ报告基因的pcDLacZ真核表达载体 ,肌注后 1天就有表达 ,到第 7天达到高峰。通过对多种促进基因表达的物质进行筛选证明 ,4.5 %斯苯、1 %甘油、2 5 %蔗糖有明显促进基因的表达作用。 4.5 %斯苯、1 %甘油能促进pcDST猪瘟基因疫苗的免疫效果。表明 :4.5 %斯苯、1 %甘油可做为基因疫苗的免疫佐剂使用 相似文献
2.
3.
以LazZ为报告基因,利用DNA重组技术构建了LacZ真核表达粒pCDLacZ,pCDLacZ肌注鼠后,X-Gal染色法及半乳糖苷酸定量分析结果表明,LacZ基因在小鼠胫前肌中处,提示肌肉接种基因疫苗应脂取纵向,接种部位应接近肌腱结合处。 相似文献
4.
对已构建的重组质粒pXST1进行了核苷酸序列分析和免疫原性研究。序列分析结果表明,该粒中含有2个正向串联在一起的ST1基因,且融合在LacZ基因的上游,具有正确的阅读框架。免疫实验结果表明,构建的DH5α重组菌株安全无毒。 相似文献
5.
本文作者构建了pXM1和pGCY6两个质粒,其中质粒pXM,含有高赖氨酸基因和GUS报告基因,质粒pGCY6则由裂解多肽Cecropin B基因和GUS基因组成。这两个基因均以CaMV35S作为启动子,以NOS作为终止子。经纯化的质粒DNA以PEG法导入4个水稻品种:89-2、Laccasin、Cypress、台北309细胞悬浮系的原生质休中,组织化学检测结果表明,GUS基因在原生质体、愈伤组织及 相似文献
6.
马立克氏病病毒gB基因的重组痘苗质粒构建 总被引:1,自引:0,他引:1
根据马立克氏病病毒(MDV)gB基因序列设计PCR引物,以gB质粒为模板,扩增出MDVgB基因5’端到3’端388bp的DNA片段。用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶消化PCR产物,将其克隆入pBluescript质粒,构建中间质粒Ⅰ;用XbaⅠ消化gB质粒,切出MDVgB基因XbaⅠ片段,并正向克隆入中间质粒Ⅰ的XbaⅠ位点,将MDVgB基因137bp的PCR产物与其XbaⅠ片段正向连接,构建中间质粒Ⅱ用EcoRⅠ调出中间质粒Ⅱ中的MDVgB基因,正向克隆入痘苗病毒表达载体p16启动子下游,构建MDVgB基因表达质粒p16-MDVgBMDVgB基因重组痘苗表达质粒的成功构建,为下一步进行重组病毒的构建及CTL应答的深入研究奠定了基础 相似文献
7.
构建了庭荠花芽cDNA文库,用Bcp1作探针,筛选文库。来自油菜cDNA克隆的Bcp1是一种在单倍体花粉和二倍体绒毡层均能表达的花药特异性基因,通过核酸杂交筛选,期望分离出与Bcp1同源性克隆,分析这些基因DNA和蛋白质序列,找出它们具有重要功能的保守序列。 相似文献
8.
新型伪狂现病毒基因缺失株的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
以伪狂犬病病毒Fa株为起我建;的pp63LacZ转移载体质粒与PRV Fa DA经磷酸钙转染,在MDBK细胞内同源重组获得PRV Fa gE/gi^-/LacZ基因缺失株。以PDTK3-6,5-6TK缺失质粒与上述基因缺失株在TK^-143细胞内同源重复且,获得PRV-SA215等三基因缺失株。经核酸杂交证实构建是成功的。生物学特性观察显示,该基因缺失株对多种动物安全,具有良好的免疫原性,有望成为 相似文献
9.
家蚕核多角体病毒Lef—1和DA26基因的克隆及部分序列分析 总被引:2,自引:1,他引:2
lef-1和DA26基因分别位于egt基因的上游和下游.从pUAc-egt中分离出EcoRI-XbaI1.1kb的egt基因片段,进行缺口平移标记,获得探针。与BmNPVDNA经HindⅢ酶切、电泳、转移至NC膜的DNA进行Southernblot杂交,发现BmNPVDNA的HindⅢD片段呈阳性。从BmNPV基因组中分离出10.4kb的HindⅢD片段,用EcoRI酶切得到HindⅢ-EcoRI2.2kb、EcoRI1.4kb和EcoRI-HindⅢ6.8kb3个片段,分别克隆于pUC19中,命名为pUHE2.2、pUE1.4和pUEH6.8。经双链测序并与AcNPV相关基因序列进行比较,发现lef-1基因被克隆于pUHE2.2中,DA26基因克隆于pUEH6.8中。从所测定的lef-1和DA26基因的启动子及5'端部分序列来看,它们在AcNPV和BmNPV之间有极高的同源性。 相似文献
10.
应用FACS、MTT法对猪瘟基因疫苗pcDST、pcDSW免疫鼠外围血中CD4^+和CD8^+淋巴细胞数、淋巴细胞的转化功能等动态变化进行了观察。结果:pcDST、pcDSW猪瘟基因疫苗免疫小鼠后,小鼠的外周血淋巴细胞对LPS有强烈的反应性,CD4^+细胞数量增加,外周血淋巴细胞CD8^+细胞数量在一段时间内增加。CD4^+和CD8^+细胞数量在免疫后32天达到高峰后开始下降。表明pcDST、pcDSW质粒免疫小鼠后诱发免疫反应。 相似文献
11.
用EcoRI酶切PR5B4质粒,采用“V”字形内槽电洗脱法回收约0.804Kb牛冠状病毒基因工程抗体4H12/1D4单链基因片段,并将其插入载体质粒PET-17b的EcoRI位点构成重组质粒PET-D4,将重组质粒转化DH5α感受态细胞,在IPTG的诱导下表达,细菌裂解物经SDS-PAGE电泳筛选,发现含PET-D4细菌经诱导新增一条约28KDα蛋白带,该蛋白带与设计基因工程抗体的大小相符,经光密度扫描,表达量约占菌体总蛋白的14% 相似文献
12.
在以cDNA表达外源蛋白时,表达载体中是否含有intron 会对表达造成一定的影响- 利用基因工程手段将乳腺定位表达载体pSVLWAPtPA 中VP1intron 敲除,构建了表达载体ΔpSVLWAPtPA- 采用基因直接注射方法将两种表达载体分别注入家兔乳腺中,溶圈试验结果显示,VP1intron 去除后,tPA 表达水平有所提高,分娩后第5 d 乳中表达水平分别为400 μg·L-1和650 μg·L- 1- 相似文献
13.
表达禽流感病毒凝素基因的重组禽痘病毒的构建 总被引:17,自引:2,他引:15
为构建表达禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组禽痘病毒,将禽痘病毒启动子LP2EP2驱动的H7亚型AIV HA基因cDNA和大肠杆菌LacZ基因插入禽痘病毒疫苗株F-017的复制非必需区。经蓝班筛选后,对重组病毒又进行了3次蚀斑克隆。以不同代次重组禽痘病毒核酸为模板,利用H7亚型AIV HA基因特异的引物进行聚合酶链式反应,均扩增出1条特异的1.7kb DNA条带。收集不同代次的重组禽痘病毒细胞培养物进行免疫斑点试验,均检测到HA蛋白,表明H7 HIV HA在重组禽痘病毒中获得了成功表达。该重组禽痘病毒的构建为AIV病毒活载体疫苗的研制奠定了基础。 相似文献
14.
表达重组鸡新城疫病毒免疫原蛋白基因的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以NDV HN基因重组禽痘病毒载体与禽痘病毒转染液为材料,以载体质粒的LacZ报告基因为筛选标记,在含有X-gal的培养基上筛选蓝色空斑的阳性重组子,对初次筛选到的蓝色空斑经过三轮蚀斑纯化,得到了能稳定增殖的病毒子,再分别提取病毒子感染细胞,正常对照细胞基因组DNA,BamH I酶切后,以DIG标记的探针进行Southern杂交检测,发现重组病毒感染的细胞基因组DNA在7kb处有一DNA片段,能与 相似文献
15.
尿激酶原基因cDNA在BHK21细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
将人尿激酶原基因cDNA分别插入到真核表达载体pcDNA3的CMV启动子和pSV2neo的SV40启动子下游,构建了重组表达质粒pcDNA3-UK和pSV-2-UK分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染BHK21细胞。ELISA检测结果表明,pcDNA3-UK和pSV2-UK在哺乳动物细胞中能够表达,72h表达量分别为28.7ng/ml和13.5ng/ml。 相似文献
16.
含有IBV S1基因的昆虫杆状病毒表达载体的构建 总被引:4,自引:0,他引:4
以含有鸡传染性支气管炎病毒Holte株S1基因的重组质粒pUC18-S1.Holte和pUC18-S‘1.Holte为材料,分别构建了可表达IBV S1基因的昆虫杆状病毒转移载体质粒pSXIVVI^+X3-S1.Holte(含IBV先导序列),pSXIVVI^+X3/4-S1.Holte(IBV先导序列为融合短肽),pAcGHL-C-S1,Holte。 相似文献
17.
研究了红参皂甙(总皂甙,皂甙组分Rb1和Rg1)对酵母菌(Saccharomycescerevisiae)中的β-半乳糖甙酶诱导的影响,认为人皂甙将穿过细胞膜,在细胞核中起甾体激素作用。为了达到这一目的,把包含CAL1启动子的EcoRI的DNA片段(685bp)插入到质粒YEp356(7.966kb)的LacZ基因上游的多酶切点,假设由此产生的质粒PGAL1-LacZ在半乳糖存在下仅表达β-半乳糖 相似文献
18.
转座子报告基因Tn5gusA5诱变甘蓝黑腐病菌分离与致病相关的突… 总被引:2,自引:0,他引:2
构建携带报告基因的转座子Tn5gusA5于广谱性cos质粒pLAFR1上,利用Tn5gusA5诱变野生型甘蓝黑腐病黄单胞菌,筛选与致病性有关的因子(胞外多糖,胞外酶)突变体,通过Southern杂交和报告基因gus表达验证,突变体是由转座子诱变所致。 相似文献
19.
将人尿激酶原(Pro-UK)基因cDNA分别插入到真核表达载体pcDNA3的CMV启动子和pSV2-neo的SV40启动子下游,构建了重组表达质粒pcDNA3-UK和pSV2-UK,分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染BHK21细胞。ELISA检测结果表明,pcDNA3-UK和pSV2-UK在哺乳动物细胞中能够表达,72h表达量分别为28.7ng/ml和13.5ng/ml。 相似文献
20.
本文重缚和构建了新城疫病毒(NDV)融合蛋白基因,并对该基因进行了鉴定,将新城疫病毒F基因片段经RT-PCR扩增,插入经EcoRI/SalI酶切的克隆载体pUC18及表达载体pGEMEX,转化大肠杆菌JM109株,用氨苄青霉素平板法初步筛选克隆,再用双酶切法,核酸探针,PCR及核苷酸序列分析法鉴定,表明插入成功并且阅读框架正确。 相似文献