安徽省克氏原螯虾白斑综合征病毒和虾虹彩病毒检测及分析

2020年检测安徽省滁州、安庆和合肥的20个稻田养殖的200只克氏原螯虾(Procambarus clarkii)鳃组织中白斑综合征病毒和虾虹彩病毒,结果发现白斑综合征病毒阳性检出率为97.5％,病毒含量达106拷贝/mg的检出率与克氏原螯虾死亡率呈正相关.虾虹彩病毒阳性检出率为13％,只在滁州的3个和合肥的2个稻田的养殖虾中检出.     

海南沼虾(♀)×日本沼虾(♂)的人工种间杂交及其RAPD分析

运用人工授精方法,进行海南沼虾(♀)×日本沼虾(♂)杂交试验,获得了可育的F1代杂种,并对F1代及其双亲进行了RAPD分析。共进行6批杂交试验,4批抱卵,3批获得杂交虾,成活率分别为30%,48%,64%。形态上,F1代兼有双亲特征,但偏向父本。RAPD扩增结果显示,海南沼虾和日本沼虾的扩增带型存在显著的差异,F1杂种兼有双亲的特征带,父、母本之间的遗传距离为0.785 6,父本与F1的遗传距离为0.410 9,母本与F1的遗传距离为0.423 8。从分子水平确认了日本沼虾(♀)和海南沼虾(♂)种间杂交的成功,并为进一步寻找经济性状相关分子标记提供了条件。     

海南沼虾(♀)×日本沼虾(♂)的人工种间杂交及其RAPD分析

运用人工授精方法,进行海南沼虾(♀)×日本沼虾(♂)杂交试验,获得了可育的F1代杂种,并对F1代及其双亲进行了RAPD分析。共进行6批杂交试验,4批抱卵,3批获得杂交虾,成活率分别为30%,48%,64%。形态上,F1代兼有双亲特征,但偏向父本。RAPD扩增结果显示,海南沼虾和日本沼虾的扩增带型存在显著的差异,F1杂种兼有双亲的特征带,父、母本之间的遗传距离为0.785 6,父本与F1的遗传距离为0.410 9,母本与F1的遗传距离为0.423 8。从分子水平确认了日本沼虾(♀)和海南沼虾(♂)种间杂交的成功,并为进一步寻找经济性状相关分子标记提供了条件。     

日本沼虾幼虾的耐盐性研究

在人工养殖条件下,研究了日本沼虾幼虾（体长为2．0～2．5cm）在不同盐度条件下的平均死亡时间（MST）、半数死亡时间（ST50）、半致死盐度（MLS）以及生长率和成活率。结果表明：日本沼虾在盐度为32、34、36条件下的MST分别为19.63、6．63、2．93h;在盐度为30、32、34、36条件下的ST50分别为26．67、11．27、2．60、1．53h;MLS-24、MLS-48、MLS-72、MLS-96分别为30．71、26．66、26．31、25,80;当盐度为12时,日本沼虾幼虾的增长率和增重率最高。这说明日本沼虾的耐盐性较高,能在盐度较高的水域中养殖。     

新型青虾饲料添加剂对日本沼虾消化酶和生长的影响

为了探讨芝芪菌质对日本沼虾消化酶和生长的影响,将日本沼虾随机分成4组,1组为对照组,另3组为试验组,在基础日粮中添加1％芝芪菌质,饲养4个月后测定日本沼虾生长情况和肝胰腺消化酶的活性.结果显示与对照组相比,试验组日本沼虾肝胰腺中的消化酶活性和增重率显著提高.表明饲喂适量的芝芪菌质能通过影响日本沼虾消化酶活性间接影响日本沼虾对饲料的消化吸收,影响日本沼虾的生长.     

日本沼虾卵黄磷蛋白生化性质分析

采用电泳洗脱法从成熟日本沼虾卵巢中提纯卵黄磷蛋白,并初步分析了其生化性质。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示:其相对分子量为458 ku;由3个多肽亚基组成,分子量分别为110 ku,96 ku,89 ku,且三亚基上均有糖辅基的结合;样品缓冲液中β-巯基乙醇的有无并不影响亚基的分离,推测亚基间不存在二硫键。     

4种常规养殖虾肌肉营养品质分析与评价

对人工养殖的克氏原螯虾、罗氏沼虾、日本沼虾和南美白对虾的肌肉营养成分检测表明,克氏原螯虾的水分和粗灰分最高,罗氏沼虾的总糖和磷的含量较高,日本沼虾的粗脂肪、钙、铁、铜、铅含量较高,南美白对虾的含肉率、粗蛋白含量最高.4种虾均富含单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸,其中油酸(十八烯酸)含量最高;从EPA+DHA的含量来看,南...     

日本沼虾和克氏原螯虾胃容量的研究

以体重0.672～4.827g的日本沼虾(Macrobrachium nipponense)和3.678～43.163g的克氏原螯虾(Procambarus clarkii)为试验对象,研究这两种虾的胃容量及其与体长、体重间的关系。结果表明,日本沼虾和克氏原螯虾胃容量随着体重和体长的增加而增加;将日本沼虾、雄性克氏原螯虾和雌性克氏原螯虾的胃容量(y)和体重(x)进行回归分析,分别得方程式:y=0.021 5x+0.006 5(r2=0.948 5),y=0.044 7x-0.008 5(r2=0.964 8),y=0.043 6x+0.0519(r2=0.978 7);3.009～4.827 g的日本沼虾比胃容量显著小于0.672～2.811g的个体,12.967～42.071g的雄性克氏原螯虾比胃容量显著小于3.678～9.754 g的个体,不同规格的雌性克氏原螯虾比胃容量差异不显著。     

丁香酚对日本沼虾麻醉效果的研究

研究了丁香酚对日本沼虾的麻醉效果。在不同浓度(100,200,300,400和500mg/L)和不同温度(17,22和27℃)条件下,观察日本沼虾的麻醉状态和苏醒状态,然后对试验数据进行统计分析。结果表明(P<0.05):日本沼虾进入麻醉状态所需的时间(麻醉时间)随丁香酚浓度的升高而缩短,随麻醉温度的升高而缩短;苏醒所需时间(苏醒时间)随丁香酚浓度的升高而加长,随麻醉温度的升高和而缩短;苏醒后第14d统计,各实验组存活率均为100%。多重比较结果表明(P<0.05):对于麻醉效果的影响,不同的麻醉浓度之间存在显著差异,不同的麻醉温度之间也存在显著差异;对于恢复效果的影响,麻醉浓度100mg/L和200mg/L之间的差异不显著,浓度400mg/L和500mg/L之间差异也不显著,麻醉温度17℃和22℃之间差异不显著,其他两两相互比较,差异均显著。研究表明,丁香酚对日本沼虾的麻醉效果良好,是一种合适的麻醉剂。     

虾虹彩病毒TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法的建立

[目的]建立检测虾虹彩病毒(SIV)的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR,为实现虾虹彩病毒病(SIVD)快速诊断及疫情监测提供一种新的技术手段.[方法]根据SIV的MCP基因保守序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,将目的片段克隆至pMD18-T载体制备重组质粒pMD18-T-MCPSIV;优化反应体系及扩增条件后建立检测SIV的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR,以pMD18-T-MCPSIV为标准品绘制标准曲线,并通过特异性、敏感性、重复性试验及临床应用验证其实用性.[结果]制备的重组质粒(pMD18-T-MCPSIV)DNA稳定性好,满足作为标准品的要求;标准品起始模板范围为2.0×101~2.0×109拷贝/反应时,建立的标准曲线具有良好线性关系.优化后的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR灵敏度高,对重组质粒的检测灵敏度可达20拷贝/反应,对虾组织SIV的检测灵敏度约10拷贝/mg,其临床检测的敏感性与套式PCR相当;与虾类其他常见病原无交叉反应,组内和组间变异系数分别为0.27%~0.54%和0.61%~0.95%,且扩增与产物分析同步完成,整个检测过程仅需1 h左右.采用建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR与目前农业农村部推荐的套式PCR同时对276份临床虾样品进行SIV检测,结果显示,两种方法的大部分检测结果一致,符合率为98.6%,但检测低拷贝数样品时前者具有更高的灵敏度.2018和2019年广西虾样品的SIV阳性检出率分别为19.7%和7.5%,且养殖凡纳滨对虾、罗氏沼虾和红螯螯虾均检测到SIV阳性.[结论]基于SIV MCP基因保守序列建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、定量范围宽及简单快速等优点,适用于虾类样品SIV检测,可为SIVD快速诊断及疫情监测提供一种新的技术手段.     

天津地区日本沼虾群体遗传多样性的微卫星分析

为了评估天津地区日本沼虾(Macrobrachium nipponense)野生种质资源遗传背景,采用9对微卫星分子标记(Mn33、Mn37、Mni04、Mni01、Mni06、Mni76、Mni13、Mni40、Mni58)对日本沼虾4个野生群体(YDXH、DLJH、XQLH和YQSK)进行了遗传多样性研究。结果表明,9对微卫星引物在日本沼虾4个群体中的等位基因数(Na)为3～12,有效等位基因数(Ne)为1.976 9～10.816 5,观测杂合度(Ho)为0.285 7～0.975 0,期望杂合度(He)为0.494 2～0.896 7,多态信息含量(PIC)为0.474 9～0.888 0,说明日本沼虾群体的遗传多样性水平较高;分子方差分析(AMOVA)显示,群体中仅有2.04%(P0.01)的遗传变异来源于群体间,97.96%(P0.01)的变异来源于群体内,表明遗传差变异主要存在于个体间;群体间遗传分化指数(Fst)为0.010 4～0.037 7,说明群体间的遗传分化程度并不明显;基于群体间Nei’s遗传距离采用UPGMA法对4个群体进行聚类树构建,永定新河(YDXH)与独流减河(DLJH)首先聚为一支,其次与西七里海(XQLH)聚为一支,最后与于桥水库(YQSK)聚为一支。     

日本沼虾（Macrobrachium rtipportertse）胚胎及幼体复眼发育的研究Ⅰ．外形和组织结构研究

用光镜研究了日本沼虾胚胎及幼体复眼外形和组织结构发育过程。外形发育研究结果表明：受精卵发育到第8d，胚胎中出现点状复眼色素；9—11d。点状色素逐渐连成线状，厚度逐渐增加；12—13d，色素区明显。经戊二醛固定复眼区为枯红色；第14d，小眼开始出现，随着胚胎发育，色素区越来越明显，小眼数量也越来越多，至第1期溞状幼体，复眼内小眼发育已较完善。组织结构研究结果表明：受精卵发育第8d，胚胎内复眼原基区可见两层细胞，表层为眼基细胞，内部为神经细胞；9—10d，眼基细胞开始纵向分裂，形成放射状细胞簇；第16d，复眼内小眼结构已十分复杂，小眼由角膜、角膜细胞、晶锥、晶锥细胞、虹膜色素细胞、小网膜细胞等组成。     

海南沼虾ITS-1序列分析

为了了解海南沼虾遗传方面信息,利用ITS-1分子标记技术对珠江海南沼虾群体作了研究.研究结果表明:①其ITS-1片段在1700～1900 bp之间,较日本沼虾短;②其碱基含量变化范围为:27%～30%(A),27%～31%(G),14%～16%(C),43%～46%(G+C);③其ITS-1序列中包含着非常丰富的SSR序列信息,具体为(AG)n,(GA)n,(AGT)n,(AGC)n,GCA)n重复,在个体中出现的比例分别为100%,100%,25%,12.5%,12.5%.(AG)n,(GA)n是多态位点;④BLAST比对结果表明,海南沼虾同日本沼虾和刀额新对虾都有较高的同源性.此研究结果在一定程度上填补了海南沼虾ITS-1方面研究的空白,同时也为海南沼虾后续研究提供了理论参考.     

太湖日本沼虾的遗传多样性分析

利用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对太湖湖区不同水域（无锡、宜兴、苏州及湖州水域）野生日本沼虾群体进行基因组DNA的遗传多样性分析。在事先优化的条件下,试验从选用的50个随机引物中筛选出16个有效引物,共检测到117个清晰稳定的位点,大小为200bp～2000bp,其中92个位点具有多态性。四个群体的多态位点比例分别为49．57％、60．68％、53．85％、57．26％,杂合度为0．2077～0．2163,Shannon信息指数为0．2967-0．3053,群体间遗传分化指数Gst值为0．1644-0．2002。AMOVA分析结果显示,群体的遗传变异有16．67％是由群体间遗传变异引起的,显著性检验表明群体间遗传变异对总遗传变异影响显著。遗传距离显示四个群体有一定遗传分化,其中苏州和宜兴群体间遗传距离最大（0．1481）,无锡与宜兴群体间遗传距离最小（0．1141）。利用UPGMA进行聚类分析表明,无锡与宜兴群体首先聚在一起,湖州与苏州群体随后聚在一起,再与无锡、宜兴群体聚在一起。     

太湖日本沼虾的遗传多样性分析

利用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对太湖湖区不同水域（无锡、宜兴、苏州及湖州水域）野生日本沼虾群体进行基因组DNA的遗传多样性分析。在事先优化的条件下,试验从选用的50个随机引物中筛选出16个有效引物,共检测到117个清晰稳定的位点,大小为200bp～2000bp,其中92个位点具有多态性。四个群体的多态位点比例分别为49．57％、60．68％、53．85％、57．26％,杂合度为0．2077～0．2163,Shannon信息指数为0．2967-0．3053,群体间遗传分化指数Gst值为0．1644-0．2002。AMOVA分析结果显示,群体的遗传变异有16．67％是由群体间遗传变异引起的,显著性检验表明群体间遗传变异对总遗传变异影响显著。遗传距离显示四个群体有一定遗传分化,其中苏州和宜兴群体间遗传距离最大（0．1481）,无锡与宜兴群体间遗传距离最小（0．1141）。利用UPGMA进行聚类分析表明,无锡与宜兴群体首先聚在一起,湖州与苏州群体随后聚在一起,再与无锡、宜兴群体聚在一起。     

日本沼虾雄性生殖系统的研究——雄性生殖系统的结构及发育

日本沼虾的雄性生殖系统由精巢、输精管、端壶腹和雄性生殖孔组成。精巢外被一层结统组织膜，内为许多生植小管，小管壁包括生精上皮和管壁上皮，生精上皮不断向管腔内增殖，形成不同发育阶段的雄性生殖细胞，输精管分为前输精管（细段）、中输精管（螺旋段）和后输精管（直段），其管壁均由高柱状上皮和矮柱状上皮构成，具有分泌功能；端壶胞壁肌肉层厚，其它结构与输精管壁相仿。精巢的发育季节性明显。     

镉对日本沼虾的毒性研究

[目的]研究Cd2＋对日本沼虾的急性毒性作用。[方法]采用急性毒性实验的方法测定Cd2＋对日本沼虾的24、48、96h的半致死浓度。以96h的半致死浓度为最高浓度设置5个浓度组进行急性胁迫实验,测定日本沼虾肌肉中超氧化物歧化酶（SOD）、谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）的活力。[结果]24℃下Cd2＋对日本沼虾的24、48、96h的LC50值分别为0.038、0.022、0.019mg/L。在几个Cd2＋浓度梯度胁迫下,SOD、GPT和GOT活性均受到不同程度的抑制,并且随Cd2＋浓度的升高,抑制作用越明显。[结论]Cd2＋对日本沼虾有较强的毒性作用。     

日本沼虾输卵管上皮细胞内病毒粒子的超微结构观察

研究了日本沼虾输卵管上皮细胞中的病毒,结果表明病毒粒子球状,直径约100 nm,外有膜包被,其包涵体直径1-3μm,有2种类型,第1种包涵体内充满高电子致密物及多层膜状物,第2种包涵体内电子致密颗粒均匀,边缘有病毒粒子黏附。在输卵管中发现该病毒对研究甲壳动物病毒病的发病机制具有重要价值。     

Cu~(2+)对日本沼虾的毒性研究

[目的]探讨日本沼虾重金属中毒死亡的机制,为其养殖水质管理提供依据。[方法]采用直线内插法,计算Cu2+对日本沼虾24、487、29、6 h的半致死浓度(LC50),通过胁迫试验,测定日本沼虾肌肉中超氧化物歧化酶(SOD)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)的活性。[结果]24℃条件下Cu2+对日本沼虾244、87、29、6 h的LC50分别为0.189、0.134、0.1230、.110 mg/L。随着Cu2+浓度的增加,日本沼虾肌肉中SOD活性逐渐降低。Cu2+能明显抑制日本沼虾肌肉组织中GPT和GOT活性,且随着Cu2+浓度的增大,抑制作用增强。[结论]Cu2+对日本沼虾的毒性作用较强。Cu2+可能是通过影响日本沼虾体内的酶的功能而损害其各种生理活动,从而使虾体受害。     

罗氏沼虾养殖效益调查及经济潜力分析

2017年对罗氏沼虾养殖产业进行了调查。结果表明,罗氏沼虾稻田养殖经济效益为3万元/hm~2、混养经济效益2.85万元/hm~2。制约该产业经济效益的主要因素包括商品虾规格、上市时间、销售模式和虾苗繁育技术。通过推广种草养殖新技术和分类销售,稻田罗氏沼虾养殖经济效益提高了20.16%。