水禽源沙门菌的分离鉴定与PFGE分子分型

为了明确目前广东省水禽源沙门菌的优势血清型及其分子流行病学动态,采用细菌分离纯化、生化特性鉴定和PCR扩增从316份样品中分离鉴定出188株水禽源沙门菌;采用玻片凝集法将分离株分为4(B、D、C1、E1)个群别8种血清型;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型法对分离株进行分子分型,得到PFGE-XbaⅠ带型62种,菌株间相似度为54.1%~100.0%,分为A^I共9个聚类簇与11个单一基因型。结果表明,广东水禽源沙门菌优势血清型为鼠伤寒沙门菌,PFGE-XbaⅠ带型具多样化,其中11种PFGE-XbaⅠ带型在区域和年份小范围集中流行,32种带型跨区域与跨时间交叉分布呈散在"流行暴发",不同血清型分离株的PFGE-XbaⅠ带型差异较大,相同血清型的分离株PFGE-XbaⅠ带型一般具有相同图谱型或聚类在一起。本研究采用PFGE法进行分子分型分析具有流行病学意义,并探明了本地沙门菌分离株血清型与分子分型的关系。     

鸡源沙门菌的耐药性及脉冲场凝胶电泳分型研究

为了解北京地区鸡源沙门菌血清型的分布、耐药性以及基因型情况,利用Riboprinter全自动微生物基因指纹鉴定仪对分离到的沙门菌进行血清型鉴定,采用微量肉汤稀释法进行药物敏感性测定,应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行基因分型.结果显示,共分离到15株肠炎沙门菌、1株鼠伤寒沙门菌,沙门菌对利福平、萘啶酸和多黏菌素E的耐药...     

一株沙门菌噬菌体的分离及其生物学特性

应用双层平板噬菌斑试验,从养殖场粪便、污水中分离到85株能裂解沙门菌的噬菌体,并筛选到1株裂解性强、噬菌谱广的噬菌体SQC73。随后测定了其酸碱耐受性、热稳定性、最佳感染复数和一步生长曲线。结果表明,SQC73酸碱耐受性和热稳定性良好,最佳感染复数为100∶1,潜伏期为20 min,暴发期为70 min,平均裂解量为25.3;灭菌效果试验显示SQC73可以有效消灭平板上99%以上的沙门菌,模拟污染试验表明可以有效消灭96%以上的沙门菌,具有作为环境灭菌剂的潜力。     

鼠伤寒沙门菌烈性噬菌体的分离鉴定与生物学特性

旨在分离鼠伤寒沙门菌烈性噬菌体,为控制该病原菌感染或污染提供生物制剂.以1株从市售散装牛奶中分离到的多重耐药性鼠伤寒沙门菌为宿主菌,采用人工诱导方法,连续1周每日给3只试验鸡饲喂宿主菌悬液,7 d后,采用双层琼脂平板法从试验鸡粪便中分离培养噬菌体,并对其效价、核酸类型、宿主谱、热稳定性与酸碱耐受性以及对鼠伤寒沙门菌感染...     

猪霍乱沙门菌裂解性噬菌体的分离鉴定及生物学特性研究

以药敏试验筛选出的多重耐药猪霍乱沙门菌为宿主,经双层琼脂纯化法从健康猪粪便中获得裂解性噬菌体SP3383。电镜观察发现该噬菌体为长尾病毒科成员;酶切分析表明其基因组为大于47.4 kb的双链DNA,可被限制性内切酶Nco I和BamH I酶切;生物学特性研究表明SP3383对温度和酸碱环境耐受力较好;最佳感染复数为0.1,潜伏期约为30 min,爆发期约60 min,平均爆发量为48 PFU/cell。本研究可为应用噬菌体治疗耐药猪霍乱沙门菌感染提供参考。     

沙门菌烈性噬菌体的分离鉴定、生物学特性及基因组分析

旨在为研制沙门菌特异性抗菌制剂提供试验数据和参考,以禽源沙门菌为宿主菌,从鸡场污水中分离纯化沙门菌噬菌体,并对其生物学特性和基因组学进行研究。结果显示：分离到1株沙门菌烈性噬菌体S5,透射电镜下该噬菌体头部直径约50 nm,尾部长约200 nm,头部呈正二十面体对称,属有尾噬菌体目、长尾噬菌体科;该噬菌体对20株沙门菌的裂解率为75%,效价为8×10⁹PFU·mL^-1;在30~60℃作用30 min和1 h的效价基本不变;pH 4.0~11.0对噬菌体活性影响不明显;最佳感染复数为0.000 1,一步生长曲线显示其感染宿主菌后5 min内（潜伏期）效价基本保持不变,暴发期约为95 min,平均裂解量为50 PFU·cell^-1。噬菌体S5是双股DNA病毒,基因组全长为72 519 bp,GC含量39.45%,含有9种tRNA,预测到109个ORF,未发现任何编码细菌毒力因子等有害产物的基因。沙门菌烈性噬菌体S5,裂解效果较好、对环境适应性强、遗传背景清楚,以期成为防控沙门菌的抗生素替代产品。     

鹌鹑沙门菌的分离鉴定

对病死鹌鹑的肝脏和心血进行了细菌分离培养、生化鉴定及动物接种试验,确定为沙门菌。在水井、禽舍输水系统处采取的两处水样中,同样分离鉴定出了上述细菌。动物试验结果表明,从脏器中分离到的沙门菌比从水样中分离到的沙门菌致病力更强。药敏试验结果表明,从脏器中分离的沙门菌对强力霉素、多黏菌素B敏感,水样中分离的沙门菌对卡那霉素敏感。     

鸭源阿培依姆沙门菌的生物学特性及致病性分析

为探究鸭源阿培依姆沙门菌的生物学特性及对雏鸭的致病性,本实验将本研究室前期分离到的1株阿培依姆沙门菌BJ1999分别接种至不同培养基测定菌落生长特征,接种至LB肉汤培养基测定细菌生长特性,通过生化反应试验测定其生化反应特征,结果显示,分离菌BJ1999株在Rambach培养基、XLD培养基、亮绿琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基中均生长,且呈典型沙门菌菌落颜色和形态;在LB肉汤中生长良好;生化反应结果也符合沙门菌属细菌的特征。通过结晶紫染色法测定该分离菌生物被膜(BF)形成能力,结果显示,分离菌在LB肉汤中培养48 h和96 h的BF形成能力均极显著弱于鼠伤寒沙门菌ATCC14028株(P<0.001)。采用PCR方法检测该分离菌的毒力基因,结果显示扩增到胞内存活(msg A、spiA等)、Ⅲ型分泌系统结构和功能(invA、hilA等)、菌毛结构和功能(lpfA、lpfC)、铁代谢(sitC)等相关的毒力基因共18个。进一步选用健康雏鸭,以109cfu/只、108cfu/只皮下注射和109cfu/只口服感染该菌,评估分离菌对雏鸭的致病性。结果显示,109cfu/只和108cfu/只皮下...     

小鼠感染猪源鼠伤寒沙门菌分离株的检测

小鼠对鼠伤寒沙门菌感染的检测分析有助于沙门菌致病机理的研究。从扬州市某屠宰场猪胴体表面采样分离出了一株沙门菌,通过生化鉴定及血清型分析,判断该菌株为鼠伤寒沙门菌。药物敏感性分析表明,该菌株对氨苄青霉素高度耐药,而对头孢类等药物敏感。动物试验结果表明,腹腔注射5×105CFU/只的剂量即可致死小鼠,1×104 CFU/只的剂量感染后,虽然不能致死小鼠,但能引起小鼠肝脏和脾脏的病理损伤和炎症反应,脏器系数升高,肝脏抗氧化系统紊乱;细菌在小鼠体内的定殖能力较强,4周以后肝脏和脾脏中仍能分离到;感染小鼠血清生化指标(ALT、AST、ALP、TP、ALB)异常,部分细胞因子(IFN-γ和TNF)升高。说明该菌株能诱导脾脏中T淋巴细胞的活化。通过以上分析,对该分离菌株的生物学特性有了初步的了解。     

鸽源阿哥纳沙门菌的分离鉴定和生物学特性研究

为了解云南某鸽场的肉鸽发病原因,拟定治疗方案,试验无菌采集病鸽肝脏组织,划线于麦康凯培养基进行细菌分离培养、生化鉴定、血清型鉴定、16S rDNA同源性分析、动物回归试验、药敏试验及毒力分析。结果显示,在麦康凯培养基上可见圆形、光滑、无色半透明的菌落,初步鉴定为革兰氏阴性菌;经沙门菌属血清凝集试验和16S rDNA同源性分析,鉴定该菌为阿哥纳沙门菌（Salmonella Agona）,其抗原结构式为：O抗原1（+）、4（+）、12（+）,H抗原fg（+）、s（+）,将其命名为SSYN036株。细菌生长曲线测定表明,该菌株生长速度较快;动物试验表明,该菌株对试验小鼠致病强,接种浓度为5×10⁸、5×10⁷、5×10⁶和5×10⁵ CFU/mL的小鼠在7 d内死亡率分别为100%、100%、60%和30%;病理切片显示产生明显的多灶性坏死炎症及炎性细胞浸润;药敏试验表明,该菌株对青霉素、苯唑西林、链霉素、强力霉素和四环素存在耐药,对利福平中度敏感,对阿莫西林、氨苄西林、庆大霉素、妥布霉素和头孢他啶等11种抗菌药物敏感;菌株毒力基因检测表明,菌株含有spvB、spiA、pagC、msgA、invA、sipB、prgH、spaN、tolC、iroN、sitC、lpfC、sifA、sopB和pefA共15种毒力基因。本研究为了解鸽源沙门菌的致病性和菌株生物学特性提供了新的信息,具有重要的公共卫生学意义。     

肠炎沙门菌mreB基因缺失株的构建及其体外生物学特性研究

MreB蛋白广泛存在于原核生物中,主要生物功能是聚合形成类似于肌动蛋白微丝的纤维,参与细胞形状的维持。为研究肠炎沙门菌的mreB基因缺失对环境压力的应激变化,本研究利用Red重组方法构建肠炎沙门菌SM6株的mreB基因缺失株,同时构建其回补菌株,观察缺失株SM6ΔmreB的形态学变化,分析其对温度缺氧应力、渗透应力以及耐酸性的变化。结果显示,缺失株SM6ΔmreB的菌体变为球状,生长受到抑制;SM6ΔmreB对升温缺氧压力的耐受能力显著低于亲本株和回补株(p<0.05);在渗透压条件为100mmol/L和200mmol/LNaCl时缺失株的生存能力明显弱于亲本株和回补株(p<0.05);缺失株在强酸环境中的生存能力显著低于亲本株和回补株(p<0.05),而对中性和弱酸性环境的适应能力与亲本株相似。本研究为进一步探究MreB蛋白在沙门菌的致病机制以及菌蜕形成过程中的作用奠定了基础。     

硒的生物学功能及在蛋种鸡生产中的应用

硒作为动物营养中不可或缺的补充剂,在动物体内及生产中起着重要的调节平衡作用。近年来,硒参与调节生物体的生长性能、繁殖性能以及抗氧化和免疫功能备受关注。本文就硒的存在形式、生物学功能以及硒在蛋种鸡生产中的应用进行综述,为微量元素硒在蛋种鸡养殖生产中的合理应用提供参考。     

貉肠炎沙门菌htra基因缺失株的构建及生物学特性

为研究HtrA蛋白对貉源肠炎沙门菌毒力和生物学特性的影响,本试验利用Red同源重组方法对HtrA蛋白编码基因htra进行敲除,并从生长特性、生化特性、耐pH应激与氧化应激、抗血清杀伤和菌株毒力等方面对突变菌株进行评价,结果显示:与野生型菌株相比,htra基因缺失株生长特性和生化特性无明显差异,但其对酸性和碱性环境的敏感性增加,对血清的耐受力下降,动物实验结果显示htra基因缺失后肠炎沙门菌对小鼠半数致死量有显著提高。本试验成功构建貉肠炎沙门菌htra基因缺失株,为研究HtrA蛋白的作用机制奠定了基础。     

1株跨属感染猪霍乱沙门菌和大肠杆菌烈性噬菌体的分离及其生物学特性

从健康猪肠道内容物分离鉴定猪霍乱沙门菌（Salmonella choleraesuis,S.choleraesuis）的烈性噬菌体,并对其进行生物学特性分析。以S.choleraesuis 13122为宿主菌,用双层平板法从猪肠道黏膜和食糜样品中分离噬菌体,用电镜形态观察和基因组测序确定其分类,用点滴法和双层平板法测定其在大肠杆菌上的宿主谱,用浊度法测定其裂菌效力。分离到1株猪霍乱沙门菌噬菌体,命名为沙门菌噬菌体L6jm（Salmonella phage L6jm）。L6jm头部呈正多面体直径约75 nm,具有非收缩性的尾部,长约190 nm,其基因组无整合酶基因和细菌基因组,故判定为烈性噬菌体;L6jm可感染S.choleraesuis 13122并跨属感染1株大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）244,同时,可裂解9株大肠杆菌,包括1株产肠毒素大肠杆菌（ETEC）;L6jm在S.choleraesuis 13122和E.coli 244上的最佳感染复数分别为0.01和0.001;潜伏期均为15 min,暴发期分别为145和125 min;L6jm在≤50℃,pH为3~11时稳定;L6jm在液体培养基中对S.choleraesuis 13122有显著（P<0.05）的抑菌效果,对ETEC104在MOI 100时也可产生显著（P<0.05）的抑菌效果。L6jm可跨属感染S.choleraesuis和E.coli,且能裂解1株ETEC,具有防治沙门菌和大肠杆菌感染的应用潜力。     

5株鼠伤寒沙门菌基因缺失株的生物学特性比较

为了探讨crp、cya、sipB、crp/cya、crp/sipB基因缺失株成为鼠伤寒沙门菌减毒候选活疫苗的可能性,对缺失株的生物学特性进行研究。结果显示,缺失株的血清型仍和亲本菌株相同,其中crp、cya、crp/cya、crp/sipB与亲本菌株相比失去了利用麦芽糖、乳糖、山梨醇等碳源的能力,也不能分解H2S、半乳糖和鼠李糖,但仍保留了利用葡萄糖的能力。通过口服方式把5株crp、cya、sipB、crp/cya、crp/sipB基因缺失株接种KM小鼠进行毒力测定和免疫保护性测定,结果它们的半数致死量比野生株的至少高700倍,双基因缺失株的毒力更弱,攻毒后crp、cya、sipB、crp/cya、crp/sipB基因缺失株的免疫保护率分别为90.0%,60.0%,50.0%,60.0%,60.0%。结果表明,crp基因缺失株可作为鼠伤寒沙门菌减毒活疫苗的候选株。     

肠炎沙门菌ArgG基因缺失株的构建及生物学特性分析

为研究ArgG基因对肠炎沙门菌的致病作用和生物学特性的影响,本试验利用λ-Red重组法构建肠炎沙门菌ArgG基因缺失株,并从生化特性、生长特性、生物被膜形成能力、运动能力、体外应激、巨噬细胞存活能力等方面进行研究。结果显示,与野生型菌株相比,ArgG基因缺失株生化特性、运动能力无明显变化,在LB培养基中生长速度变化不明显,但在M9培养基中缺失株不生长;ArgG基因缺失株生物被膜形成能力下降约60%,抗酸、碱应激能力分别下降约12%和10%左右,巨噬细胞内的存活能力和其对小鼠的毒力降低。本研究成功构建了肠炎沙门菌ArgG基因缺失株,并证明ArgG基因与营养代谢、抗应激能力和毒力密切相关,为肠炎沙门菌的基因缺失苗的研究提供理论依据。     

一株沙门菌温和噬菌体PEA2-3生物学特性及基因组分析

泛耐药菌和多重耐药菌的检出率不断上升,噬菌体在防控治疗耐药菌的传播和感染上有良好的应用前景。本研究旨在利用耐药菌株分离出宽裂解谱温和噬菌体,丰富了沙门菌温和噬菌体库。利用丝裂霉素C诱导、分离纯化出1株温和性噬菌体,命名为Salmonella virus PEA2-3,测定其部分生物学特性并进行生物信息学分析。透射电镜观察显示,噬菌体头部宽约为61 nm,尾长93 nm,属于有尾噬菌体目(Caudovirales)、罗斯蒙特病毒属(Rosemountvirus);最佳感染复数为0.01;一步生长曲线显示潜伏期为20 min,裂解期约为80 min;能够裂解不同来源的沙门菌(38/72)及大肠杆菌(23/52),是1株宽裂解谱的溶原性噬菌体,具有较好的应用价值。基因组测序结果显示,该噬菌体基因组全长52 770 bp, GC含量为45.99%,基因组共注释到73个CDS,8个CDS被赋予已知功能蛋白,不存在抗生素抗性基因或者毒力基因。噬菌体PEA2-3全基因组提交至NCBI的GenBank数据库,获得序列号为MW508890。结果显示,这是1株能同时裂解大肠杆菌与沙门菌的宽裂解谱高效价温和...     

鼠伤寒沙门菌sapC基因缺失株的构建及生物学特性分析

旨在研究鼠伤寒沙门菌ABC转运膜蛋白SapC在沙门菌致病机制中的功能。本研究利用λ-Red重组技术构建了鼠伤寒沙门菌sapC基因缺失突变株SMΔsapC,对其进行生长特性、酸性应激试验、多黏菌素B敏感性试验、生物被膜检测、胞内存活和小鼠体内毒力试验。结果显示,基因缺失株SMΔsapC与亲本菌株和互补菌株相比,其生长速度无明显差异;在酸应激条件下,SMΔsapC存活率显著低于亲本菌株;sapC基因缺失降低了鼠伤寒沙门菌生物被膜的形成能力;同时,SMΔsapC基因缺失株在鼠源巨噬细胞内的增殖能力和小鼠体内的毒力显著低于亲本菌株。研究表明,sapC基因影响鼠伤寒沙门菌的抗酸能力、生物被膜形成能力,从而影响沙门菌在体内外的毒力。本研究为进一步阐释鼠伤寒沙门菌的致病机制奠定了基础。     

肠炎沙门菌C50336ZinT基因缺失株构建及其相关生物学特性

为研究锌调控蛋白ZinT在肠炎沙门菌致病中的作用,本试验利用λ-Red同源重组系统构建了肠炎沙门菌(C50336)ZinT基因缺失突变株(C50336ΔZinT),并对其生物学特性进行分析。结果显示,与野生型菌株和回复菌株相比,缺失株C50336ΔZinT在LB培养基中生长速度无明显差异,生化特性亦无明显变化,但其在Minimal培养基中生长明显变慢。此外缺失株C50336ΔZinT对H_2O_2处理和高渗环境的适应能力显著下降,但在巨噬细胞内的存活率无明显降低。动物试验表明,ZinT基因缺失突变株的毒力和野生型菌株相比仅有轻微下降。本试验探讨了ZinT与肠炎沙门菌锌摄取和毒力间的联系,为进一步阐释肠炎沙门菌感染致病机制奠定基础。