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相似文献
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1.
为了探讨伊维菌素对犬乳腺肿瘤细胞的作用及可能机制,本研究采用CCK-8检测不同浓度伊维菌素对犬乳腺肿瘤细胞(CMT 7364,CIPp)增殖的影响;annexinⅤ-FITC/PI双染色检测伊维菌素对细胞凋亡的影响;转染pEGFP-LC3质粒,荧光显微镜下观察伊维菌素对自噬小体形成的影响;Western Blot检测伊维菌素处理后细胞中自噬标志分子LC3Ⅰ、LC3Ⅱ的表达水平。结果发现:伊维菌素可抑制犬乳腺肿瘤细胞的增殖,并呈现时间与剂量依赖性关系,CMT 7364和CIPp细胞24 h的IC_(50)值分别为10.2μmol/L和10.76μmol/L;伊维菌素对细胞凋亡水平影响轻微,12μmol/L处理24 h和48 h后凋亡细胞比例均小于3%,各处理间无统计学差异(P>0.05);伊维菌素可诱导细胞浆内自噬小体的形成,促进LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转化,诱导细胞自噬。表明伊维菌素通过诱导犬乳腺肿瘤细胞自噬发挥抗肿瘤作用。  相似文献   

2.
本试验旨在筛选建立过氧化氢(H2O2)诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化应激模型的最佳条件,并探究竹叶黄酮(BLF)对奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用。以奶牛乳腺上皮细胞MAC-T细胞系为研究对象,将维持培养基中处理的MAC-T设为对照组,在维持培养基中添加不同浓度(200~1 000μmol/L) H2O2处理的MAC-T设为氧化损伤组,在维持培养基中添加80μg/mL BLF和800μmol/L H2O2处理的MAC-T设为BLF预处理组。采用细胞增殖试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,采用乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞凋亡率,每次试验平行孔6个,重复试验3次。利用倒置荧光显微镜观察细胞内活性氧(ROS)含量的变化,利用试剂盒法检测细胞内抗氧化指标的变化,利用实时荧光定量PCR法检测细胞线粒体损伤相关基因表达的变化,利用流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(MMP)的变化。结果显示:1)600和800μmol/L H2O2  相似文献   

3.
通过测定两性霉素B(amphotericin B,AmpB)的细胞毒性、半数抑制浓度以及利用Western blot、间接免疫荧光、空斑形成、内吞等试验方法探究AmpB对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的抑制作用及其分子机制。结果显示:20μmol/L浓度范围内,AmpB对Vero-E6和Marc145细胞毒性极低;在Vero-E6细胞,AmpB对PEDV HLJBY和CV777毒株的半数抑制浓度(IC50)分别为0.5和0.3μmol/L,在Marc145细胞,AmpB对HLJBY和CV777的IC50均为0.3μmol/L;AmpB处理几乎能阻断病毒感染细胞;AmpB主要抑制PEDV入胞和细胞巨胞饮作用。本研究为研制抑制PEDV或广谱抑制冠状病毒药物提供了新线索。  相似文献   

4.
为了建立HPLC同时测定介孔SiO_2/脂质复合递药系统(LMSNs)中紫杉醇(TAX)与姜黄素(CUR)含量的方法。方法:Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),乙腈与0.1%甲酸水溶液以不同比例梯度洗脱,流速1 mL/min,检测波长227 nm,柱温25℃,进样体积5μL。结果:TAX、CUR分别均在1.5~30μg/mL、6~300μg/mL范围内线性良好(TAX低、高浓度范围R~2各为0.999 7、1.000 0,CUR低、高浓度范围R~2各为0.999 9、0.999 9);TAX低、中、高浓度回收率各为(95.60±1.53)%、(98.83±1.02)%、(101.49±0.70)%,CUR为(101.44±0.04)%、(103.10±1.04)%、(103.66±0.47)%(n=3)。表明本方法准确度高、重复性好,可用于同时测定TAX-CUR介孔SiO_2/脂质复合递药系统中两药含量。  相似文献   

5.
【目的】筛选和分析环状RNA(circRNA)在犬乳腺肿瘤(CMGT)耐药中的作用,为肿瘤诊断和治疗提供新靶点。【方法】以CMGT细胞CHMm作为研究对象,首先通过浓度梯度法和浓度维持法构建CMGT他莫昔芬(TAM)耐药细胞系,然后采用CCK-8法检测CMGT细胞对TAM的敏感性,最后通过高通量测序技术筛选耐药细胞中差异表达的circRNAs,通过GO功能和KEGG信号通路分析其可能参与的生物过程。【结果】经过TAM持续刺激,CHMm形态变为长梭形,半数抑制浓度(IC50)由4.07提高至13.75μmol/L,说明耐药细胞展现更强TAM抗性。测序结果显示,耐药细胞中差异表达的circRNAs 46个,GO功能分析涉及肿瘤细胞外基质、蛋白质类泛素化、细胞黏附和细胞迁移等过程,主要信号通路为Notch、Rap1、ErbB、FoxO和PI3K等通路。【结论】本研究成功构建犬乳腺肿瘤TAM耐药细胞系CHMmTAM,耐药细胞展现更强的增殖能力和TAM抗性。高通量筛选了亲本和耐药细胞中差异表达的circRNAs,耐药性产生可能通过Notch、Rap1和...  相似文献   

6.
本试验以载牛乳铁蛋白肽-壳聚糖纳米粒(BLfcin-NPs)为添加剂,研究其对过氧化氢(H2O2)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)氧化损伤的保护作用。采用单因素完全随机试验设计,以BMECs为模型,采用不同浓度[0(对照组)、100、200、400、600、800、1 000μmol/L] H2O2对BMECs分别处理0、2、4、6、8、12 h,确定构建BMECs氧化损伤模型的最佳H2O2浓度及作用时间。以500μg/mL的BLfcin-NPs预处理BMECs 12 h后用400μmol/L的H2O2处理6 h,检测BMECs内线粒体膜电位(MMP)、抗氧化指标以及抗氧化与凋亡相关基因mRNA相对表达量。结果显示:1)与0μmol/L H2O2处理的对照组相比,不同浓度H2O2作用6 h后显著或极显著降低BMECs活力(...  相似文献   

7.
本研究通过建立人肝微粒体体外孵育试验,考察泰妙菌素对4种CYP450亚酶的探针底物睾酮、非那西丁、氯唑沙宗、氢溴酸右美沙芬代谢的影响,以反映泰妙菌素对人CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1、CYP2D6酶活性的作用。试验分为3组:药物试验组、阳性对照组(不含NADPH)、阴性对照组(不含CYP450抑制剂),孵育体系为100 μL,孵育试验在96孔板中进行。终止反应后使用高效液相色谱串联质谱仪(LC-MS/MS),以内标法检测96孔板中孵育液的剩余探针底物浓度。根据药物试验组与阴性对照组的探针药物代谢浓度之比,计算药物试验组的探针药物代谢率。使用Graphpad Prism 6.0软件,以药物试验组相对代谢率为纵坐标,药物浓度对数值为横坐标作图,计算试验组药物IC50值。针对泰妙菌素与CYP3A4的孵育试验设置多个孵育时间点观察孵育时间对IC50值的影响。试验结果显示,酮康唑对CYP3A4的IC50值为0.044 μmol/L,α-萘黄酮对CYP1A2的IC50值为0.030 μmol/L、4-甲基吡唑对CYP2E1的IC50值为0.022 μmol/L、奎尼丁对CYP2D6的IC50值为0.096 μmol/L。泰妙菌素对CYP1A2及CYP2D6的IC50值均大于50 μmol/L,对CYP2E1的IC50值为0.045 μmol/L,对CYP3A4的IC50值为1.609 μmol/L。延长泰妙菌素与CYP3A4的孵育时间(10~50 min)后,泰妙菌素对CYP3A4的IC50值由1.609 μmol/L增加至 8.657 μmol/L。本研究中4种亚酶常用抑制剂的IC50值与参照值相近,表明所建立人肝微粒体体外孵育试验方法可靠。以IC50值为指标显示泰妙菌素对CYP1A2和CYP2D6无抑制作用,对CYP2E1和CYP3A4存在强抑制作用,泰妙菌素可能是CYP3A4的可逆性抑制剂。  相似文献   

8.
本试验旨在通过探究不同浓度过氧化氢(H2O2)对小鼠卵巢颗粒细胞(MOGC)氧化应激损伤的影响,以构建MOGC氧化应激模型,并探究氧化应激损伤对沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)信号通路的影响。试验选用MOGC,采用单因素试验设计,分别用0(对照组)、100、200、400和800μmol/L H2O2处理24 h,测定细胞凋亡、细胞内活性氧(ROS)生成量、相关抗氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量以及凋亡相关基因表达。结果表明:1)与对照组相比,不同浓度H2O2组细胞活力均显著降低(P<0.05),当H2O2浓度大于200μmol/L并且作用时间超过24 h时,细胞活力低于50%。2)与对照组相比,不同浓度H2O2组细胞凋亡率显著提高(P <0.05)。3)与对照组相比,200、400和800μmol/L H2O2  相似文献   

9.
为建立检测齐帕特罗(ZIL)残留物的间接竞争酶联免疫吸附试验(ic-ELISA),以获得的抗ZIL兔多抗血清为基础,以制备的完全抗原为包被源,通过优化反应条件,建立了检测ZIL残留物的ic-ELISA检测方法。结果表明,兔血清最佳稀释比例为1∶6 000,抗原最佳包被浓度为2μg/mL,半数抑制浓度(IC50)为0.317 ng/mL,线性检测范围(IC20~IC80)为0.136~1.181 ng/mL,最低检测限(LOD,IC10)为0.081 ng/mL。经优化后,检测体系最佳pH为7.4,盐浓度≤0.4 mol/L,甲醇、乙醇、丙酮和和DMSO的含量≤5%,乙腈含量≤10%,且检测基质中牛尿液浓度≤15%时能够获得较高的检测灵敏度,并且该检测方法具有良好的稳定性和特异性,批内和批间重复试验样品添加回收率分别为101%~112%和101%~120%,变异系数均低于10%,检测结果与HPLC-MS检测结果的相关系数为R2=0.990 6。该检测方法检测速度快、灵敏度强、准确...  相似文献   

10.
【目的】研究白藜芦醇(resveratrol, RES)对水牛卵丘细胞体外培养过程中细胞增殖活力、激素分泌、卵丘扩展及抗凋亡和抗氧化能力的影响。【方法】用不同浓度(0(对照组)、1、10、20、30、40、50和60μmol/L)RES培养卵丘细胞,用CCK-8试剂盒测定细胞增殖活力,筛选最佳RES处理浓度及时间用于后续试验。用ELISA法测定培养液中卵丘细胞分泌的雌二醇(estradiol, E2)和孕酮(progesterone, P4)的含量,实时荧光定量PCR法测定卵丘细胞扩展、凋亡和抗氧化相关基因的相对表达量。【结果】与对照组相比,在体外培养24~36 h内,1、10和20μmol/L RES组水牛卵丘细胞的增殖活力均有升高趋势,10μmol/L RES处理36 h细胞活力最强,因此用于后续试验中细胞的处理。体外培养36 h时,10μmol/L RES组细胞增殖能力和E2、P4的分泌显著增加(P<0.05);10μmol/L RES组卵丘细胞扩展相关基因穿透素3(PTX3)、前列腺素...  相似文献   

11.
为了探讨不同浓度的17β-雌二醇对体外培养的奶山羊乳腺上皮细胞增殖和超微结构的影响,试验利用0,25,100,250,500μmol/L 17β-雌二醇处理奶山羊乳腺上皮细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况,比色法检测细胞外乳酸脱氢酶(LDH)含量,并利用透射电子显微镜观察乳腺上皮细胞的超微结构。结果表明:雌激素对乳腺上皮细胞增殖有促进作用,而且细胞增殖率随着雌激素浓度的增加而增加。25,250,500μmol/L的17β-雌二醇对乳腺上皮细胞的损伤较小,而100μmol/L的17β-雌二醇会引起乳腺上皮细胞严重的病理组织形态性损伤。不同浓度的雌激素处理对乳腺上皮细胞的超微结构的影响也不同,250μmol/L和500μmol/L 17β-雌二醇处理的乳腺上皮细胞分裂加速,代谢增强,而且细胞核浆比例失调,部分细胞呈现瘤细胞;而100μmol/L的17β-雌二醇处理的乳腺上皮细胞代谢活动变慢,甚至出现细胞凋亡。说明一定浓度的雌激素不仅可以促进乳腺上皮细胞的增殖,增强细胞的代谢活动,而且对细胞的损伤较小。  相似文献   

12.
本试验旨在研究苜蓿素对脂多糖(LPS)刺激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞活性和炎症相关基因表达的影响。将体外培养的奶牛乳腺上皮细胞分成6组,对照组采用基础培养基,试验组在基础培养基中分别加入1μg/m L LPS(L组)、1μg/m L LPS和2.5μg/m L苜蓿素(L+2.5组)、1μg/m L LPS和5.0μg/m L苜蓿素(L+5组)、1μg/m L LPS和10.0μg/m L苜蓿素(L+10组)以及1μg/m L LPS和15.0μg/m L苜蓿素(L+15组),培养24 h。结果表明:1)与对照组相比,L组奶牛乳腺上皮细胞相对增殖率极显著降低(P0.01),而L+2.5组和L+10组则极显著升高(P0.01);2)与L组相比,L+10组和L+15组细胞超氧化物歧化酶活性显著升高(P0.05),而乳酸脱氢酶活性和一氧化氮浓度显著降低(P0.05);3)与L组相比,L+5组和L+10组细胞的白细胞介素8、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、Toll样受体2和Toll样受体4的相对表达量均极显著降低(P0.01),L+5组细胞的髓样分化因子88相对表达量均显著降低(P0.05)。结果提示,在LPS刺激下,添加苜蓿素能够提高奶牛乳腺上皮细胞活性和抗氧化性能,抑制炎症相关基因的表达,发挥抗炎作用。  相似文献   

13.
通过ELISA和IHC分别检测了乳腺肿瘤患犬血清和组织中CA15-3的浓度和表达情况,发现CA15-3在乳腺肿瘤患犬血清浓度(15. 70 U/m L±12. 93 U/m L)明显高于健康犬血液中CA15-3浓度(5. 72 U/m L±4. 82 U/m L)。IHC结果发现,CA15-3 MOD在乳腺肿瘤组织中(0. 21±0. 08)明显高于健康乳腺组织(0. 10±0. 04),且在不同的组织分级中差异显著(P 0. 05)。结论:血清中CA15-3浓度可作为犬乳腺肿瘤早期诊断和预后评估的生物标志物之一,组织中CA15-3蛋白可作为评估犬乳腺肿瘤恶性程度的生物标志物之一。  相似文献   

14.
为了探究维生素D对发生氧化损伤的猪睾丸间质细胞是否具有保护作用,试验利用H2O2使间质细胞发生氧化损伤,再利用1α,25-(OH)2VD3刺激间质细胞,然后检测间质细胞的活力、总抗氧化能力、过氧化氢酶活力与培养液内睾酮浓度。结果表明:与不添加H2O2时相比,培养液内添加500μmol/L的H2O2可使间质细胞活力、总抗氧化能力、过氧化氢酶活力与睾酮分泌能力极显著降低(P<0.01),500μmol/L H2O2可使间质细胞发生氧化损伤。当在培养液内同时添加500μmol/L的H2O2与100 nmol/L的1α,25-(OH)2VD3时,与仅添加500μmol/L的H2O2相比,间质细胞的活力、总抗氧化能力、过氧化氢酶活力与睾酮分泌能...  相似文献   

15.
试验旨在探究富硒乳酸菌对黄曲霉毒素B1(AFB1)对鸡小肠上皮细胞(CSIEC)凋亡的影响。将体外培养的CSIEC细胞分为对照组(C)、AFB1(300 μmol/L AFB1)、AFB1+0.01 Se(300 μmol/L AFB1+0.01 μmol/L富硒乳酸菌,以Se计)、AFB1+0.05 Se和AFB1+0.1 Se组,待细胞长至60%~70%汇合时,AFB1+0.01 Se、AFB1+0.05 Se和AFB1+0.1 Se组培养液更换为含对应Se浓度的培养液,对照组和AFB1组更换为正常培养液,8 h后向含AFB1组加入300 μmol/L AFB1,继续培养24 h。用CCK-8法检测细胞存活率,ELISA法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性,TUNEL法检测细胞凋亡率,Western blotting检测线粒体通路和内质网通路相关蛋白Bcl-2、Bax、PERK、ATF4、CHOP、GRP78、p53和p21的表达。细胞存活率检测结果表明,与对照组相比,其余各组CSIEC存活率均极显著降低(P<0.01);与AFB1组相比,加硒各组存活率均极显著升高(P<0.01)。LDH活性检测结果表明,与对照组相比,其余各组LDH活性均极显著升高(P<0.01);与AFB1组相比,加硒各组LDH活性均极显著降低(P<0.01)。细胞凋亡率检测结果表明,与对照组相比,AFB1组TUNEL阳性细胞数极显著升高(P<0.01),且与加硒各组差异均不显著(P>0.05)。Bcl-2/Bax表达量检测结果表明,与对照组相比,AFB1组Bcl-2/Bax极显著降低(P<0.01),AFB1+0.05 Se组显著升高(P<0.05)。内质网应激通路相关蛋白表达量检测结果表明,与对照组相比,AFB1组PERK、CHOP、GRP78和p53的表达量均极显著升高(P<0.01);与AFB1组相比,加硒各组PERK、GRP78表达量均极显著降低(P<0.01),AFB1+0.05 Se和AFB1+0.1 Se组CHOP和p53的表达量均极显著或显著降低(P<0.01;P<0.05)。因此,富硒乳酸菌能够缓解AFB1诱导的CSIEC凋亡。  相似文献   

16.
以合成沙丁胺醇(SAL)完全抗原为基础获得针对SAL的多克隆抗体,建立检测SAL的间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测方法,为进一步开发SAL快速检测试剂盒奠定基础。为此,分别用混合酸酐法和活化酯法制备SAL-BSA免疫原和SAL-OVA检测原,免疫新西兰大白兔获得SAL多抗血清,建立检测SAL ic-ELISA检测方法。结果显示,成功合成了SAL-BSA和SAL-OVA,其偶联比分别为17∶1和6.4∶1;免疫后兔血清抗体效价为1∶102400,所建立ic-ELISA的半数抑制浓度(IC50)为24.84μg/L,最低检测限(IC10)为0.78μg/L,线性范围IC20~IC80为3.16μg/L~80.1μg/L;精密度(CV)%<10%,回收率在98%~110%之间。特异性鉴定结果显示,SAL多抗血清除与侧链上含有叔丁基官能团的结构类似物具有较强的交叉反应外,不存在与其他同类分子的交叉反应。以上结果表明,成功建立了检测SAL的ic-ELISA检测方法,为进一步开发SAL快速检测试剂盒奠定了基础。  相似文献   

17.
AO/EB双重染色法检测紫杉醇体外诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡   总被引:2,自引:0,他引:2  
以体外培养犬乳腺肿瘤系CHMm株为模型,用0.1μmol/L的紫杉醇对细胞处理后,用台盼蓝排斥实验和MTT法检测细胞活性,AO/EB双荧光染色荧光显微镜下观察犬乳腺肿瘤细胞凋亡及形态学变化.结果显示,紫杉醇作用后,CHMm细胞生长受到不同程度的抑制,并引起细胞凋亡,出现典型的凋亡形态.表明紫杉醇能抑制CHMm生长,引起...  相似文献   

18.
为了探明As2O3对大鼠肝脏细胞系BRL-3A和肝癌细胞系RH-35中TH信号通路的关键调控因子TRβ1和TRβ1的下游因子Cyclin D1的影响,采用qRT-PCR、Western blot技术检测2种细胞中TRβ1和Cyclin D1的基因和蛋白表达变化。结果显示:(1)与对照组相比,As2O3作用BRL-3A细胞12 h, 1.563μmol/L组TRβ1蛋白表达显著降低(P<0.01)、Cyclin D1表达显著升高(P<0.01);6.250μmol/L组TRβ1表达明显降低(P<0.05)、Cyclin D1表达显著降低(P<0.01)。As2O3作用24 h, 1.563μmol/L组TRβ1蛋白表达明显升高(P<0.05);6.250μmol/L组TRβ1显著升高(P<0.01),Cyclin D1的表达显著降低(P<0.01)。As2O3作用48 h,...  相似文献   

19.
【目的】探讨奶牛脂肪间充质干细胞(bovine adipose-derived mesenchymal stem cells, bAD-MSCs)对氧化应激条件下奶牛子宫内膜上皮细胞迁移能力的影响。【方法】使用0、5、25、50、100、200μmol/L H2O2处理奶牛子宫内膜上皮细胞2、4、6、8、12 h后,通过MTT试验检测细胞存活率、流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平来筛选H2O2诱导奶牛子宫内膜上皮细胞氧化应激模型的最佳条件。在细胞划痕试验中设立对照组、H2O2组、bAD-MSCs共培养组(1∶0.5)、bAD-MSCs共培养组(1∶1)、奶牛乳腺上皮细胞(MACT)共培养组(1∶0.5)和MACT共培养组(1∶1)共6组,分析奶牛子宫内膜上皮细胞迁移能力,并利用Western blotting检测细胞外蛋白调节激酶(Erk)和磷酸化细胞外蛋白调节激酶(pErk)蛋白的表达水平。【结果】MTT试验结果显示,4~12 h内50μmol/L...  相似文献   

20.
为了揭示玉米赤霉烯酮(ZEA)雄性生殖毒性的机理及建立相应的防控措施,研究ZEA对大鼠原代培养的大鼠睾丸支持细胞(SC)的氧化损伤作用以及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对其的保护作用,试验用不同浓度ZEA[0(对照组),5,10,20μmol/L]处理大鼠原代SC 24 h,用试剂盒法检测胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,用流式细胞术检测胞内活性氧(ROS)水平,用JC-1免疫荧光探针结合流式细胞术检测线粒体膜电位(ΔΨm)等的变化;添加NAC[设0(对照组)、20μmol/L ZEA、100μmol/L NAC、20μmol/L ZEA+100μmol/L NAC等4组]保护后,检测其对以上指标的影响。结果表明:与对照组比较,10μmol/L ZEA染毒组SOD活性显著升高(P0.05),20μmol/L ZEA染毒组极显著升高(P0.01);10,20μmol/L ZEA染毒组MDA含量均极显著升高(P0.01);5μmol/L ZEA染毒组ROS水平显著升高(P0.05),10,20μmol/L ZEA染毒组ROS水平均极显著升高(P0.01);5μmol/L ZEA染毒组ΔΨm显著下降(P0.05),10,20μmol/L ZEA染毒组ΔΨm均极显著下降(P0.01)。与20μmol/L ZEA染毒组相比,20μmol/L ZEA+100μmol/L NAC联合处理组睾丸支持细胞胞内SOD活性和MDA含量显著下降(P0.05),ROS水平极显著降低(P0.01),ΔΨm极显著增高(P0.01)。说明ZEA可以造成睾丸支持细胞氧化毒性损伤,且一定浓度的NAC对这一过程具有保护作用。  相似文献   

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