鹅源鼠伤寒沙门菌的分离鉴定及药敏试验

对临床送检疑似鼠伤寒沙门菌感染的病例进行细菌分离,利用沙门菌所具有的种属特异性的亲膜蛋白基因inv A做PCR鉴定,结合生化鉴定和血清型鉴定,并分析分离菌的耐药性。从4例病死鹅病料中共分离到4株细菌,经inv A PCR鉴定、生化特点和血清型鉴定确认为鼠伤寒沙门菌。药敏试验结果显示,4株分离菌对庆大霉素、诺氟沙星、头孢曲松等药物敏感性较强,但对多黏菌素B、多西环素耐药。其中,有2个分离株表现出多重耐药性。     

四味穿心莲散及其组分对沙门菌的体外抑菌效果观察

检测四味穿心莲散及其组分(穿心莲、辣蓼、大青叶和葫芦茶)对沙门菌的体外抑菌效果。试验选用穿心莲、辣蓼、大青叶、葫芦茶等10种中药,采用试管二倍稀释法测定各中药水提物、两药联合及市售四味穿心莲散和自制四味穿心莲散对沙门菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示,四味穿心莲散的4种组分中,大青叶对沙门菌的抑菌活性最强,MIC为12.5 mg/mL;4种组分杀菌活性一致,MBC均为400 mg/mL;在两药联合中,4种联合呈现相加作用或协同作用;市售四味穿心莲散MIC和MBC均为200 mg/mL,自制四味穿心莲散MIC为50 mg/mL,MBC为200 mg/mL。分析结果表明,大青叶抑菌效果最好,杀菌效果与其他3种组分一致;自制四味穿心莲散的抑菌效果更具优势,杀菌效果与市售方剂一致。     

鹅源鼠伤寒沙门茵的分离鉴定及遗传进化分析

从发病雏鹅肝脏中分离到1株细菌,根据培养特性、镜检结果、生化特征、血清学分型及PCR检测结果,表明分离茵为鼠伤寒沙门菌.动物试验结果表明,分离菌可致死雏鹅;药敏试验表明,该菌对环丙沙星、痢特灵、茵必治、阿米卡星、链霉素等药物敏感,对利福平和四环素耐药,与其它家禽或水禽来源的沙门菌相比,该分离株耐药性不严重.将分离茵16SrDNA基因进行扩增,PCR产物经胶回收试剂盒纯化后测序,序列Blast分析与血清型鉴定一致.将序列与GenBank上已登录的29株不同来源的鼠伤寒沙门茵序列进行比较,构建系统进化树,结果显示分离菌与美国分离的VDL-SS334株位置最为接近,同源性为95.9％.     

小鼠感染猪源鼠伤寒沙门菌分离株的检测

小鼠对鼠伤寒沙门菌感染的检测分析有助于沙门菌致病机理的研究。从扬州市某屠宰场猪胴体表面采样分离出了一株沙门菌,通过生化鉴定及血清型分析,判断该菌株为鼠伤寒沙门菌。药物敏感性分析表明,该菌株对氨苄青霉素高度耐药,而对头孢类等药物敏感。动物试验结果表明,腹腔注射5×105CFU/只的剂量即可致死小鼠,1×104 CFU/只的剂量感染后,虽然不能致死小鼠,但能引起小鼠肝脏和脾脏的病理损伤和炎症反应,脏器系数升高,肝脏抗氧化系统紊乱;细菌在小鼠体内的定殖能力较强,4周以后肝脏和脾脏中仍能分离到;感染小鼠血清生化指标(ALT、AST、ALP、TP、ALB)异常,部分细胞因子(IFN-γ和TNF)升高。说明该菌株能诱导脾脏中T淋巴细胞的活化。通过以上分析,对该分离菌株的生物学特性有了初步的了解。     

白头翁散与其他中药联合对大肠杆菌的体外抑菌效果

研究中药白头翁散各组分(白头翁、黄柏、黄连、秦皮)以及其他6种中药对大肠杆菌的体外抑菌效果。用传统水煎法分别提取10种中药的有效成分;采用试管二倍稀释法测定单味中药、两药联合组成药对及自制白头翁散对大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)以及最小杀菌浓度(MBC)。结果显示,白头翁散各组分均可有效抑制大肠杆菌,其中黄连的MIC为6.250 mg/mL,抑菌效果最佳。单味中药中对大肠杆菌杀菌效果较好的是黄连、秦皮、诃子,MBC均为200.000 mg/mL;药对中白头翁+黄连、大青叶+诃子对大肠杆菌的MIC均为3.125 mg/mL,抑菌效果最佳;白头翁+黄连对大肠杆菌的MBC为12.500 mg/mL,杀菌效果最佳。自制白头翁散对大肠杆菌的MIC为3.125 mg/mL、MBC为100.000 mg/mL。结果提示,白头翁散4种单药相加的抗菌效果优于单药和部分药对。     

生物被膜形成关键基因csgD对鼠伤寒沙门菌黏附侵袭上皮细胞能力的影响

为了探究生物被膜形成关键基因csgD与鼠伤寒沙门菌黏附侵袭上皮细胞能力的关系,本研究利用Red同源重组系统构建鼠伤寒沙门菌S025株csgD基因缺失株(S025ΔcsgD),利用原核表达载体构建回复株(S025ΔcsgDR);运用结晶紫染色定量、共聚焦显微镜和扫描电镜观察、平板表型鉴定等方法检测鼠伤寒沙门菌生物被膜形成能力,并比较野生株、缺失株和回复株黏附侵袭Caco-2细胞和HeLa细胞的差异。结晶紫染色定量、共聚焦显微镜和扫描电镜观察结果显示,与野生株S025和回复株S025ΔcsgDR相比,S025ΔcsgD生物被膜形成能力显著降低;生物被膜成分分析发现,野生株呈红色干燥粗糙型菌落,而S025ΔcsgD呈白色光滑型菌落,表明其卷曲菌毛和纤维素成分减少,回复株的菌落与野生株相似。黏附与侵袭试验结果显示,与野生株与回复株相比,S025ΔcsgD的黏附率和侵袭率显著降低。结果表明,生物被膜形成关键基因csgD在鼠伤寒沙门菌黏附和侵袭宿主上皮细胞方面发挥关键作用,这为进一步阐明生物被膜状态下的鼠伤寒沙门菌的致病机理奠定了理论基础。     

常用中草药对水产动物致病菌体外抑菌效果研究

试验旨在探讨黄柏、诃子、知母、苏木等常用中草药对水产动物致病菌的体外抑菌效果,为今后水产养殖细菌性疾病的防控提供参考。以美人鱼发光杆菌、嗜水气单胞菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌临床分离株为试验菌株,以抑菌圈直径、最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）及联合抑菌指数（FICI）作为检测指标,研究常用中草药对水产病原菌的抑菌活性。采用水提法提取中草药有效成分,并通过琼脂平板打孔法测定中草药对水产致病菌抑菌圈,微量肉汤稀释法测定中草药MIC和MBC及微量肉汤棋盘稀释法测定联合抑菌指数（FICI）。结果显示,16种中草药对水产致病菌具有不同程度的抑菌作用。药敏试验结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种水产致病菌均具有抑菌效果,抑菌圈直径在10.5~29.0 mm之间,而4种病原菌对马齿苋均表现为耐药;MIC检测结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种病原菌的MIC值为7.81~250.00 mg/mL;MBC检测结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种病原菌的MBC值为7.81~500.00 mg/mL;联合抑菌试验结果显示,苏木与夏枯草、女贞子及青皮联用仅对美人鱼发光杆菌起到协同抑菌作用,对嗜水气单胞菌、创伤弧菌及哈维氏弧菌均无抑菌作用,女贞子和青皮组合仅对哈维氏弧菌抑菌作用为相加作用,该组合在抑菌效果上对其他病原菌表现为无关或颉颃作用,其他药物组合在抑菌效果上对4种病原菌则表现为无关或颉颃作用;联合抑菌圈测定结果表明,中草药联合使用对4种病原菌抑菌作用不一。本试验结果表明常用中草药对水产动物致病菌具有一定程度的抑菌作用。     

鸽源鼠伤寒沙门菌分离鉴定及药敏试验

从江苏省某肉鸽场发生的腹泻症状的死亡鸽中采集病料,分离出1株病原菌,通过PCR鉴定菌株,并进一步做药敏试验。结果表明,病原菌分离鉴定为鼠伤寒沙门菌,属于血清O4群,该菌对20种抗生素均敏感。     

广东五种常见中草药的体外抑菌试验

为测定鸭脚木皮、木蝴蝶、火炭母、岗梅根、倒扣草（鲜）这5种广东常见中草药的体外抑菌活性,采用琼脂平板打孔法、试管倍比稀释法和平板培养法,分别测定其对金黄葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌、枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌的抑制效果.结果表明：大肠杆菌、链球菌对火炭母呈高度敏感,最小抑菌浓度（MIC）分别为1/40、1/80,最小杀菌浓度（MBC）分别为1/40、1/80;链球菌对鸭脚木皮、木蝴蝶均呈高度敏感,最小抑菌浓度（MIC）分别为1/20、1/10,最小杀菌浓度（MBC）分别为1/20、1/10;岗梅根、倒扣草（鲜）对六种菌均无抑制作用.     

猪源鼠伤寒沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

为确定江西2个规模养猪场患病死亡仔猪的病因,通过病理剖检、常规细菌学检查,从采集的病料中进行病原菌的分离鉴定,并利用动物试验和药敏试验,确定分离菌的致病性和敏感药物。结果表明,6株分离菌均符合鼠伤寒沙门菌的生物学特性,分离菌可在48h内致死小鼠,分离菌的耐药性较强,对阿米卡星、卡那霉素、头孢噻肟较敏感,对另外9种抗生素低敏或耐药。确定2个猪场仔猪发病的主要致病菌是鼠伤寒沙门菌。     

12种中药对沙门菌的体外抑菌效果

考察12种中药对沙门菌的体外抑菌作用。采用水煎法制备中草药水提液,分别通过平板打孔法、二倍稀释法和平板接种法对沙门菌进行体外抑菌试验,测定中药的敏感性及最小抑菌浓度。结果表明,在12种中药中,沙门菌对乌梅、黄连、女贞子、丁香呈高度敏感,对栀子、木香、金樱子、龙胆草呈中度敏感,对贯众、薏苡仁、鹿衔草、知母不敏感。乌梅、黄连、女贞子对沙门菌抑制作用较好,最小抑菌浓度分别为15.6 mg/mL、31.25 mg/mL、62.50 mg/mL;栀子、丁香和金樱子抑菌效果次之,最小抑菌浓度为250 mg/mL;木香、知母和龙胆草抑菌效果较弱,最小抑菌浓度均为500 mg/mL。从12种中药对沙门菌的体外抑菌效果来看,在临床上可用乌梅、黄连、女贞子治疗猪源沙门菌感染。     

5株鼠伤寒沙门菌基因缺失株的生物学特性比较

为了探讨crp、cya、sipB、crp/cya、crp/sipB基因缺失株成为鼠伤寒沙门菌减毒候选活疫苗的可能性,对缺失株的生物学特性进行研究。结果显示,缺失株的血清型仍和亲本菌株相同,其中crp、cya、crp/cya、crp/sipB与亲本菌株相比失去了利用麦芽糖、乳糖、山梨醇等碳源的能力,也不能分解H2S、半乳糖和鼠李糖,但仍保留了利用葡萄糖的能力。通过口服方式把5株crp、cya、sipB、crp/cya、crp/sipB基因缺失株接种KM小鼠进行毒力测定和免疫保护性测定,结果它们的半数致死量比野生株的至少高700倍,双基因缺失株的毒力更弱,攻毒后crp、cya、sipB、crp/cya、crp/sipB基因缺失株的免疫保护率分别为90.0%,60.0%,50.0%,60.0%,60.0%。结果表明,crp基因缺失株可作为鼠伤寒沙门菌减毒活疫苗的候选株。     

3种动物专用抗菌药在鸡肠道沙门菌的流行病学临界值的建立

为建立3种动物专用抗菌药（氟苯尼考、安普霉素和达氟沙星）在鸡肠道沙门菌的流行病学临界值（ECOFFs）,本研究选取2017年分离自广东省各地兽医站和养殖场的166株鸡肠道沙门菌,采用琼脂稀释法测定3种动物专用抗菌药的最小抑菌浓度（MIC）,利用非线性回归分析法及NRI（normalized resistance interpretation）和ECOFFinder程序分析处理MIC数据,并最终确定氟苯尼考、安普霉素和达氟沙星对鸡肠道沙门菌的ECOFFs。结果显示,氟苯尼考、安普霉素和达氟沙星对沙门菌的MIC范围分别为2~>512、4~>512和0.015~64 μg/mL;MIC₅₀和MIC₉₀分别为256和>512、16和>512、0.5和16 μg/mL。氟苯尼考和安普霉素的MIC值呈明显的单峰或双峰分布,且界限明显,而达氟沙星的MIC值出现了不连续多峰分布。综合3种分析方法,最终确定氟苯尼考、安普霉素和达氟沙星的ECOFFs分别为16、16和0.125 μg/mL。本研究初步得到了3种药物在鸡肠道沙门菌的ECOFFs,为沙门菌耐药判定标准的制定提供了参考。     

一株鹅源性鼠伤寒沙门氏菌的分离与鉴定

2012年7月,江苏镇江丹阳某养殖户送检3羽病死鹅,无菌采集病料进行细菌分离。此细菌在麦康凯培养基上长出无色菌落且细菌生长良好;能发酵葡萄糖、甘露醇等大多数糖类,不能发酵乳糖、蔗糖、阿拉伯糖和山梨醇,生化特点符合沙门氏菌特性。分离菌血清型为鼠伤寒沙门氏菌,同时16srDNA基因序列分析鉴定结果显示为鼠伤寒沙门氏菌。该分离菌株的药敏结果表明：对链霉素、氯霉素、罗美沙星、萘啶酸等药物多重耐药,而对庆大霉素、卡那霉素、痢特灵、丁胺卡那霉素等药物敏感。     

鼠伤寒沙门菌烈性噬菌体的分离鉴定与生物学特性

旨在分离鼠伤寒沙门菌烈性噬菌体,为控制该病原菌感染或污染提供生物制剂.以1株从市售散装牛奶中分离到的多重耐药性鼠伤寒沙门菌为宿主菌,采用人工诱导方法,连续1周每日给3只试验鸡饲喂宿主菌悬液,7 d后,采用双层琼脂平板法从试验鸡粪便中分离培养噬菌体,并对其效价、核酸类型、宿主谱、热稳定性与酸碱耐受性以及对鼠伤寒沙门菌感染...     

鹅源鼠伤寒沙门菌crp、hfq基因缺失株的构建及生物学特性分析

为构建鹅鼠伤寒沙门菌单基因缺失株并鉴定其生物学特性,本研究以广东地区鹅源鼠伤寒沙门菌流行株A29为研究对象,采用λ-Red同源重组技术,分别构建crp、hfq基因缺失株(A29Δcrp和A29Δhfq)及相应基因回补株,并分别采用相应引物经PCR鉴定。通过细菌培养,对各菌株生物学特性进行比较;通过PCR鉴定各菌株的遗传稳定性;采用K-B纸片扩散法检测各菌株的药物敏感性;将各菌株纯培养物经腹腔注射4周龄小鼠,测定各菌株对小鼠的毒力,并观察感染后小鼠的临床症状及各组织剖检病变与组织病理变化。PCR和测序结果表明,正确构建各基因缺失株和相应回补株。生物学特性试验结果显示,与亲本株相比,A29Δcrp菌落直径极显著变小(P<0.001),不产酸、不产生H₂S,菌体极显著变短(P<0.001);A29Δhfq菌落边缘不整齐,不产生H₂S,菌体极显著变长(P<0.001),表明crp、hfq基因影响细菌的菌落形态、生化特性和形态特征。菌株遗传稳定试验结果显示,菌株传至60代时,基因缺失株仍能够稳定缺失。药敏试验结果显示,与亲本株比较,A...     

乳酸菌制剂对肉仔鸡鼠伤寒沙门菌感染的控制效果研究

本试验旨在研究乳酸菌制剂对肉仔鸡鼠伤寒沙门菌（ST）感染的控制效果。选择无ST感染的1日龄AA公雏480只,随机分为4组,每组6个重复,每个重复20只。其中未感染组饲喂基础日粮;感染组饲喂基础日粮且沙门菌感染;抗生素组在基础日粮中添加40 mg/kg盐酸恩诺沙星;乳酸菌组在基础日粮中添加3×10⁹ CFU/kg乳酸菌制剂（植物乳杆菌、噬酸乳杆菌和屎肠球菌等比例混合）。5日龄时,除未感染组外,其他各组每只鸡灌服1 mL（10⁵ CFU）ST液。7、14和21日龄时,每个重复随机选2只鸡,采血、屠宰、取样。结果显示,ST感染显著降低了1~21日龄肉仔鸡的平均日采食量和平均日增重,日粮中添加乳酸菌制剂显著提高了平均日采食量和平均日增重（P<0.05）,且达到了未感染组和抗生素组水平。基于器官指数和组织载菌量,乳酸菌制剂对肉仔鸡ST感染表现出显著的控制效果（P<0.05）。14、21日龄时,乳酸菌组和抗生素组白细胞介素-10（IL-10）含量均显著高于未感染组（P<0.05）;21日龄时,乳酸菌组肉仔鸡血清IL-10含量显著低于感染组,免疫球蛋白G（IgG）和分泌型免疫球蛋白A（SIgA）含量显著升高（P<0.05）;乳酸菌组肉仔鸡血清IL-10和SIgA含量与抗生素组间差异不显著（P>0.05）,而IgG水平显著低于抗生素组（P<0.05）。综上,日粮中添加乳酸菌制剂能显著抑制肉仔鸡肠道ST的数量及组织感染,能显著缓解炎症反应、提高免疫水平和生产性能。     

鼠伤寒沙门菌BaeSR对氟喹诺酮类药物耐药性的调控机制

BaeSR是鼠伤寒沙门菌(Salmonella Typhimurium)中重要的双组分系统(two component system,TCS),通过调控下游靶基因的转录表达影响细菌的耐药性.本研究旨在探索BaeR过表达后,鼠伤寒沙门菌BaeSR对氟喹诺酮类药物(FQs)的耐药调控机制,寻找BaeR潜在靶基因.首先表达B...     

五倍子等14种中草药对鸽源鼠伤寒沙门氏菌的体外抗菌活性试验

目的:研究14种中草药对鸽源鼠伤寒沙门氏菌的体外抑制作用。方法:采用96孔板倍比稀释法测定其最低抑菌浓度(MIC)。结果:五味子、黄柏、乌梅、山茱萸的抑制作用最强,MIC均为62.5 mg/ml,其次为五倍子,MIC为125 mg/ml,再次为石榴皮及连翘,MIC均为500 mg/ml,黄连、黄芩、川贝母、牡丹皮、秦皮、大黄、山楂对鼠伤寒沙门氏菌无抑制作用。结论:石五味子、黄柏、乌梅、山茱萸对鼠伤寒沙门氏菌具有明显抑制作用,五倍子具有中度抑菌作用,石榴皮及连翘抑菌作用弱,黄连、黄芩、川贝母、牡丹皮、秦皮、大黄、山楂对鼠伤寒沙门氏菌无抑制作用。     

CpxR对鼠伤寒沙门菌连接蛋白基因pmrD的调控作用

前期发现黏菌素对鼠伤寒沙门菌acrB和cpxR双缺失后的cpxR回补株JS△acrB△cpxR::kan/pcpxR(JS△△/pR)的MIC值较标准株JS显著下降了16倍,且JS△△/pR中PhoPQ和PmrAB之间的连接蛋白基因pmrD的表达量显著降低。为探索cpxR对pmrD的调控作用,本研究构建了pmrD的单基因过表达菌株JS△acrB△cpxR::kan/ppmrD(JS△△/pD),并用overlapping PCR扩增得到cpxR和pmrD的共表达基因cpxR-pmrD,构建了cpxR、pmrD共表达菌株JS△acrB△cpxR::kan/pcpxR-pmrD(JS△△/pRD)。用微量肉汤稀释法测定了黏菌素对各菌株的最小抑菌浓度(MICs),同时测定了各菌株在LB肉汤中的生长曲线和黏菌素的杀菌曲线。结果表明,成功构建了鼠伤寒沙门菌pmrD的单基因过表达菌株JS△△/pD和cpxR、pmrD共表达菌株JS△△/pRD。MIC结果显示,黏菌素对JS△△/pR的MIC值较JS显著下降(16倍),JS△△/pD的MIC值没有变化,而JS△△/pRD的MIC值显著上升(16倍)。生长曲线显示,JS△△/pR的生长活性最低,JS△△/pD、JS△△/pRD的生长活性均高于JS△△/pR。黏菌素的杀菌曲线显示,JS△△/pRD在不同浓度黏菌素中的存活率显著高于JS△△/pD。这些结果表明:在JS△△背景下,pmrD对菌株黏菌素敏感性的影响依赖于cpxR,cpxR对pmrD的调控具有双向性,即对生理表达的pmrD具有负调控作用,而对过表达的pmrD具有正调控作用。本试验为全面系统阐明cpxR或cpxR与acrB相互作用调控沙门菌敏感性的分子机制奠定基础。