新疆南疆地区某规模奶牛场牛病毒性腹泻抗原检测

为了解新疆南疆地区某规模化奶牛场牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrheavirus,BVDV)感染情况,采用血清流行病学调查方法,对该规模化奶牛场2358份牛血清样品、35份新生犊牛耳组织样品进行BVDV抗原ELISA检测。结果显示,该场有9份血清样品为BVDV抗原阳性,阳性率为0.38%;对阳性样品的来源牛间隔21d后采血复检,检出1份阳性血清样品,确认该样品来源牛为持续性感染牛;在新生犊牛耳组织中,未检测出BVDV。本次抗原检测证明,新疆南疆地区规模化奶牛场存在一定的BVDV流行和持续感染,建议督促牛场积极开展BVDV净化工作。     

新疆南疆某规模牛场轮状病毒基因分型鉴定与分析

新疆南疆某规模奶牛场部分犊牛出生后1周左右出现严重腹泻,严重地影响了犊牛健康。为查明该牛场犊牛腹泻是否存在牛轮状病毒感染以及病毒基因类型,以及更好地防治犊牛腹泻发生。试验采集了部分腹泻犊牛的粪便样本,提取粪样病毒核酸、设计病毒特异性扩增引物,采用RT-PCR法、基因测序、核苷酸同源性分析及构建遗传进化树。结果显示,待检样本通过VP7特异性引物(VP7-1/VP7/2)和基因分型鉴定引物(VP7-1/G10-2)的RT-PCR扩增得到大小1 062 bp、715 bp目的片段,经测序及核苷酸同源性比对分析,确定该样本为轮状病毒A群G10型,结合临床诊断、病理变化确定该牛场疑似患牛存在牛轮状病毒感染,为该病防控提供了重要的理论依据。     

牛病毒性腹泻病毒的基因分型

根据病毒基因组５＇端非翻译区（ＵＴＲ）的序列比较将牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）分成两组。种系发生分析说明ＢＶＤＶ－１和ＢＶＤＶ－Ⅱ组互有不同，根据５＇端非翻译区和编码ｐ＾１２６多肽的基因区，设计了用ＰＣＲ鉴别ＢＶＤＶ－Ｉ和ＢＶＤＶ－Ⅱ。用该试验，１４０株ＢＶＤＶ毒株中有７６株被鉴定为ＢＶＤＶ－Ⅱ，并注意到ＢＶＤＶ－Ｉ和ＢＶＤＶ－Ⅱ之间的抗原性和病原性差别，ＢＶＤＶ－Ｉ普遍用于疫苗生产、诊断试验和研     

新疆某牛场发生病毒性腹泻病的诊断分析

笔者对新疆某规模化奶牛场发生病毒性腹泻病的诊断与治疗情况进行介绍,分析了牛病毒性腹泻病的发病情况及症状、剖检病理变化、诊断及诊断方法,并对防治方法进行总结,以期为养牛业中牛病毒性腹泻的诊断与防治提供参考。     

牛病毒性腹泻病毒检测方法研究进展

引起牛病毒性腹泻/黏膜病(bovine viral diarrhea-mucosal disease,BVD-MD)的病原为牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV),牛感染后会出现与其他腹泻病相似的症状,仅通过临床表现和病理观察很难做出准确鉴别;其次持续感染(PI)牛是该病主...     

牛病毒性腹泻病毒检测方法研究进展

牛病毒性腹泻病(bovine viral diarrhea, BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)感染导致的传染病。该病会导致牛生产性能下降,给全球养牛业带来严重的经济损失。BVD的临床表现和病理变化与其他牛源腹泻病毒病相似,因此有必要根据不同的条件选择快速高效的BVDV诊断方法,及时采取措施阻断BVDV在牛群间、BVDV持续感染牛(persistently infected, PI)与健康牛之间传播,减少BVDV对养牛业造成的经济损失。用于BVDV检测的方法很多,主要有病毒分离鉴定、荧光定量RT-PCR、RT-PCR、环介导等温扩增技术(LAMP)、重组酶聚合酶扩增技术(RPA)、胶体金免疫检测技术(GICT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、抗原捕获ELISA(AC-ELISA)、间接免疫荧光法(IFA)等。近年一些新兴技术和优化的方法被应用于BVDV的检测,如抗体液相芯片技术、CRISPR-LwCas13a系统、双重纳米RT-PCR法等,均具有特异性强和灵敏度高等优点。作者从抗原、抗体两个方面总结了BVDV检测方法的研...     

吉林某牛场牛病毒性腹泻流行病学调查及分析

为全面了解吉林省某规模化牛场牛病毒性腹泻(BVD)的流行情况,试验采集临床血清样品157份,粪便样品18份,肝脏、精液等组织样品17份,应用BVDV抗体检测试剂盒进行血清抗体检测,利用BVDV1型引物,采用纳米PCR方法对血清及临床样品进行BVDV抗原检测,对抗原阳性样品进行测序分析;将抗原阳性样品经研磨、稀释后用0.22μm滤膜过滤除菌,接入牛肾细胞(MDBK)进行病毒分离培养,盲传3代后再次进行抗原检测;采用免疫荧光技术检测病毒对MDBK细胞的侵染作用;利用Mega软件绘制系统进化树并进行同源性比对分析。结果显示,该牛场临床血清BVDV抗体阳性率为77.1%,血清抗原阳性率为12.1%,临床粪便等样品抗原阳性率为74.3%;病料接入细胞未观察到细胞病变,分离毒株PCR产物测序分析结果与样品抗原检测结果一致;免疫荧光检测结果显示,分离株毒液正常吸附于MDBK细胞中,有明显荧光反应;抗原测序分析显示,该牛场BVD主要流行毒株与BVDV JL-1株同源性高达99.0%,且均为BVDV 1型毒株。本研究对该牛场BVDV流行情况进行了全面调查,为开展净化工作奠定了基础。     

牛病毒性腹泻病毒检测技术研究进展

牛病毒性腹泻(BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)所致牛的一种接触性传染病,呈世界性流行,该病主要表现为腹泻、急慢性黏膜感染、繁殖障碍等,对畜牧业危害严重,是国际贸易中动物检疫的重要疫病之一。快速准确的检测手段,有利于该传染病的早期发现和及时控制。目前,用于检测牛病毒性腹泻病毒的方法很多,论文对近年来国内外应用的等温核酸扩增技术(IAT)、重组酶聚合酶扩增技术(RPA)、指数富集配体系统进化技术(SELEX)、多重PCR技术、多重连接探针扩增技术(MLPA)、RT-PCR抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光试验(IFA)等进行简要介绍,为我国动物检疫工作提供参考。     

新疆某牧场牛病毒性腹泻的诊断及防控

为了查明新疆某规模化牧场犊牛发病死亡的原因,本试验采用现场流行病学调查结合实验室检测方法进行研究。结果表明,该病的发病率为39.43％,病死率为32.14％,易感牛群主要是3月龄以内的犊牛,具有典型BVD症状,病理变化以消化道症状为主,病死牛肠道有大量出血点、肠黏膜溃疡、脱落、肠壁菲薄、胃肠道内容物中有大量气泡、肠系膜淋巴结肿大等;RT-PCR检测结果表明4份病死犊牛的肠组织、32份发病犊牛和3份（3/10）同群亚健康犊牛肠内容物核酸均为阳性;序列对比分析结果表明,该牧场感染的病毒为BVDV-1a型,与Genbank上登陆的部分BVDV-1型参考株的同源性为88.0％-98.4％,与部分BVDV-2型参考株的同源性为31.5％-43.7％;结合实验室检测及临床防控需求,牧场采取了净化阳性牛结合BVD-IBR二联疫苗免疫的方式有效地控制了该病的进一步发生。     

3株牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定及其基因分型

为确定牛呼吸道传染病的病原以及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)在临床健康牛群中是否存在持续性感染,本研究采集了内蒙古自治区和黑龙江省两个牛场牛鼻拭子46份及肺脏样品8份,采用MDBK细胞进行病毒分离培养,经BVDV特异性引物RT-PCR检测有3份样品为阳性。利用间接免疫荧光检测3株阳性样品,可以观察到特异性荧光,表明分离得到3株BVDV,分别命名为480、A0583和Lung-6。进一步研究显示480、A0583和Lung-6均为非致细胞病变型。对3株分离病毒的5'端非编码区和Npro基因进化树分析显示3株病毒均属于BVDV1型,其中480株属于BVDV1c亚型,A0583株和Lung-6株同属于BVDV1m亚型。本研究首次在国内同一个牛场分离到BVDV1m(A0583)和BVDV1c(480)两个基因亚型。本研究为我国BVDV-1型不同基因亚型的抗原关系分析及BVDV疫苗的研制奠定了基础。     

新疆南疆某规模牛场牛传染性鼻气管炎PCR鉴定与分析

本试验对15份疑似感染牛传染性鼻气管炎(IBR)患牛鼻腔分泌物样品提取病毒DNA,以gB基因特异性引物进行PCR扩增,测序、核苷酸同源性分析。结果显示,在15个样品中检测出3个牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)核酸阳性样本,检出率为20%,其中1个样本提交GenBank(KY348790),命名为IBRV-4T3-1,3个IBRV核酸阳性样本之间核苷酸同源性达到99%以上,而与IBRV参考株gB基因核苷酸同源性为88.8%以上,构建的gB基因遗传进化树表明,IBRV-4T3-1与参考株亲缘关系较近,处于遗传进化树中同一分支上,属于α疱疹病毒亚科水痘病毒属(Varicellovirus)牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)。结合发病情况、临床症状,确认疑似患牛感染IBRV。     

牛病毒性腹泻病毒TC株的分离鉴定及E0基因的序列分析

从新疆塔城地区某牛场采集患病犊牛全血,将RT-PCR方法鉴定为牛病毒性腹泻病毒(BVDV)阳性的样品接种到MDBK细胞,传代至第4代,出现典型病变(CPE)。通过间接免疫荧光试验,证明该分离病毒为BVDV,命名为BVDV-TC。设计引物对E0基因进行扩增和序列分析。所得片段与GenBank上已发表的BVDV毒株核苷酸序列的同源性为69.3%~93.8%,氨基酸同源性为73.6%~97.8%,TC株的遗传距离与VEDEVAC株最接近。BVDV-TC是第一个在新疆地区报道的1b亚型BVDV毒株,为新疆地区BVDV感染的防控提供依据。     

牛病毒性腹泻病毒E^rns基因的真核表达及抗原性检测

为研究牛病毒性腹泻病毒（BVDV）E^rns基因的生物学功能，将含有牛病毒性腹泻病毒E^rns基因的质粒pMD18-T—EE^rns经BamHⅠ／HindⅢ双酶切，获得了E^rns片段，再与杆状病毒转移栽体pBlueBaeHis2A连接，构建成重组质粒。将重组质粒pBlueBaeHis2A-E^rns与Bac-N—Blue^TMDNA共转染至sf9昆虫细胞中，获得了重组病毒，经噬斑筛选纯化，感染sf9昆虫细胞进行表达。SDS-PAGE分析结果表明，表达的目的蛋白大小约30ku；Western-blotting检测表明，该蛋白具有良好的抗原性。     

山西一例牛病毒性腹泻病例病原分离鉴定及测序分析

为查找引起山西某牛场疑似牛病毒性腹泻病例的病因,对送检的9份牛鼻腔棉拭子样品,经处理后进行了多病原PCR或RT-PCR检测、病原分离、特征性细胞病变观察、效价测定、RT-PCR鉴定及基因测序分析.结果 显示:从9份样品中检出6份BVDV核酸阳性,IBRV、BRSV、BPIV3、支原体均阴性,病料上清接种MDBK细胞进行...     

牛病毒性腹泻及治疗

牛病毒性腹泻是由病毒性腹泻病毒感染引发的一种传染性疾病,临床上主要表现为急性型、慢性型和隐性感染,其中急性型和慢性型对牛的生长发育会造成巨大影响。为更好地控制该种疾病发生流行,该文主要分析牛病毒性腹泻的诊断和治疗。     

牛病毒性腹泻的症状诊断和防治措施

牛病毒性腹泻又称牛黏膜病,是牛病毒性腹泻病毒引起的一种以腹泻或消化道黏膜损坏为主的传染病。现就该病的病原特点和诊断防治方法作简明阐述。介绍了牛病毒性腹泻病的症状及诊断方法,并提出了该病的预防与治疗措施,以期为牛病毒性腹泻病的诊治提供参考。     

牛病毒性腹泻病研究进展及防控建议

作为影响牛健康的重要因素,牛病毒的客观存在,加大了牛腹泻病出现的概念,需要相关的人员加强对这种疾病研究进展必要了解,制定出切实有效的防控措施,最大限度地降低牛病毒性腹泻病发生的概率,扩大现代化养殖厂的养殖规模.基于此,本文将对牛病毒性腹泻病研究进展进行必要地探讨,并提出相关的防控建议.     

牛轮状病毒与病毒性腹泻病毒的双重RT-PCR检测方法的建立

建立了能够同时检测牛轮状病毒（BRV）与牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的双重RT-PCR方法。应用两对特异性引物进行了双重RT-PCR扩增,这两对引物分别对应于BRV的VP7基因和BVDV的5-UTR中的部分编码序列,其扩增产物分别为342bp和196bp。说明该方法的特异性强、敏感性高,可检测到1pg的病毒RNA,可应用于临床诊断和流行病学研究。     

基因2型牛病毒性腹泻病毒新疆及山东分离株的鉴定

将疑似为基因2型牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus genotyp02,BVDV-2)感染阳性的不同地区源病料样品接种马-达氏牛肾细胞(Mardin-Darby bovine Kidney,MDBK)单层细胞,进行病毒分离培养和传代.通过BVDV-2型特异性RT-PCR检测结果表明,共分离到2株细胞源BVDV-2病毒,命名为XJ-04和SD-06分离株.间接免疫荧光试验表明,上述分离的细胞源BVDV-2病毒能被鼠源BVDV-2重组E2蛋白抗血清或鼠抗BVDV-2单克隆抗体特异性识别,产生特异性胞内荧光.XJ-04和SD-06分离株分别盲传至13代和8代,光镜下观察到病毒感染的MDBK细胞内空泡化、细胞脱落、呈现拉网状的典型细胞病变.2株细胞源BVDV-2病毒感染的MDBK细胞制备超薄切片,在透射电镜下,细胞内质网中观察到约60 nm大小的病毒粒子.经差速离心、20%蔗糖垫底超速离心提纯的病毒粒子,经磷钨酸染色,负染电镜下观察到病毒有囊膜、粒子大小约60 nm的病毒颗粒.