产蛋白酶和纤维素酶纳豆芽孢杆菌（B.Subtilis Natto）的筛选及其生物特性研究

采用酪蛋白平板和羧甲基纤维素钠（CMC-Na）平板初筛法,分别从北京、大连、日本3个产地的纳豆食品中分离筛选到10株产蛋白酶菌株（NY-1～NY-10）和10株产纤维素酶菌株（NS-1～NS-10）。经酶活力测定NY-1为蛋白酶活力最高菌株,NS-1为纤维素酶活力最高菌株。通过2株菌的生长曲线、芽孢形成曲线、产酶动态变化曲线和酶活力传代稳定性试验,得出NY-1的最佳种龄为16 h,最佳芽孢收获时间为28 h,芽孢量的对数值为(6.92±0.047)、蛋白酶产酶高峰时间为18 h,酶活力为（44.12±1.48） U/mL,;NS-1的最佳种龄为14 h,最佳芽孢收获时间为28 h,芽孢量的对数值为(8.41±0.0060),纤维素酶产酶高峰时间为40 h,酶活力为（60.94±1.22） U/mL,蛋白酶和纤维素酶酶活力在7代内保持稳定。     

纳豆芽孢杆菌NY-1产蛋白酶酶学性质研究

试验为研究纳豆芽孢杆菌NY-1产蛋白酶的酶学性质,在液体培养基中培养该菌株并获得粗酶液,之后分别在不同处理条件下对粗酶液中蛋白酶活性进行测定。结果表明,该酶最适反应温度为65 ℃,最适反应pH为9.0,45 ℃时有较好的热稳定性,pH 8.0~9.0有较好的pH稳定性。金属离子Mn²⁺和Zn²⁺对该蛋白酶活性有激活作用,Fe²⁺、Cu²⁺和Mg²⁺对酶活性有抑制作用。     

纳豆芽孢杆菌产蛋白酶固态发酵条件研究

<正>蛋白酶是一种重要的工业用酶,其产量约占酶制剂市场的65%以上[1],广泛应用于食品、药物、皮革制造、蛋白水解和纺织工业等[2-3]。蛋白酶是从动植物组织和微生物代谢物中提取、精制而来的。由于微生物蛋白酶均为胞外酶,与动植物源蛋白酶相比具有相当大的优势,如下游技术处理相对简单、价格低廉、来源广、菌体易于培养、产量高、高产菌株选育简单且快速;此外,微生物蛋白酶还具有动植物源蛋白酶所具有的全部特性和较大的耐热性及一定的酯酶活力,易     

产蛋白酶芽孢杆菌的筛选鉴定及酶学特性分析

为了分离筛选产蛋白酶芽孢杆菌,以开发新型饲料添加剂,本研究选取小鼠肠道内容物为样品,通过对样品进行预处理以及酪蛋白平板检测法分离筛选获得产蛋白酶芽孢杆菌,对该菌进行形态学和分子生物学鉴定并分析其生长规律、产酶规律以及所产蛋白酶的酶学特性。结果表明,经形态学和分子生物学鉴定该菌为特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis),其所产蛋白酶的最适反应条件为50℃,pH=8.0,具有一定的高温耐受性,在弱酸、中性和弱碱性条件下表现出一定的稳定性,Ca²⁺和Mn²⁺能够显著提高酶活(P<0.05),Zn²⁺、Mg²⁺、Cu²⁺和EDTA、尿素溶液对蛋白酶活力具有显著抑制作用(P<0.05),培养至16 h菌体量达到最大值,发酵22 h上清液中的蛋白酶活力达到最高值(57.77 U/mL)。该芽孢杆菌的成功筛选分离以及其所产蛋白酶的分析研究,为新型饲料添加剂的开发利用提供了物质基础。     

纳豆芽孢杆菌的饲料学特性研究

本试验旨在从饲料应用学的角度对纳豆芽孢杆菌的各项特性进行测试,并总结出一套可行的试验方法和结果判断标准.试验通过对纳豆芽孢杆菌的形态和生化培养性质观察,不同温度、酸度、胆盐、人工胃液处理对纳豆芽孢杆菌存活率的影响,常用药物添加剂、微量元素对纳豆芽孢杆菌生长的影响及纳豆芽孢杆菌对几种致病菌和抗营养因子的影响进行了研究.结果表明,纳豆芽孢杆菌对高温、酸性、胆盐和人工胃液有一定的耐受能力,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有较强的抑制作用,并能分解饲料中抗营养因子如半纤维素、植酸盐和果胶.结果提示,纳豆芽孢杆菌是优良的饲用微生物添加剂.     

产纤维素酶芽孢杆菌的分离鉴定

采集健康奶牛的新鲜粪便,利用刚果红平板染色法分离筛选具有产纤维素酶活性的芽孢杆菌,并进行细菌菌落、形态和生化鉴定。结果从牛粪中分离出35株兼性厌氧的芽孢杆菌,利用刚果红鉴别培养基筛选出具有分解纤维素能力的菌株,并测定其水解圈大小,初步筛选出10株纤维素酶高产菌株,并对其进行了种属鉴定:一株为梭状芽孢杆菌,其余9株为芽孢杆菌属细菌。     

纳豆芽孢杆菌的液体发酵条件研究

试验采用PB液体培养基测定纳豆芽孢杆菌生长曲线,确定了最佳接种时间为14h。对碳源和氮源分别采用单因子试验,对无机盐和培养条件分别采用L9(34)正交试验,筛出最佳液体发酵培养基配方为:葡萄糖2g/L、豆饼粉20g/L、氯化猛0.1g/L、磷酸氢二钾2g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁1g/L;发酵温度33℃,初始pH值8.0,接种量为7%,250mL三角瓶的装量为40mL,芽孢数量为19.5亿/mL。     

高产纤维素酶菌株的筛选、鉴定及产酶特性研究

为了从腐殖质土壤中筛选得到高产纤维素酶菌株,本试验进行了产纤维素酶菌株的筛选、鉴定及其产酶特性研究。首先用羧甲基纤维素钠(CMA-Na)培养基初步分离产纤维素酶菌株,再经过酶活复筛得到一株高产纤维素酶菌株B17。经过形态学和16S rDNA测序鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),并对其发酵产酶条件和酶学性质进行初步研究。试验结果表明,菌株B17的最佳发酵条件为:培养时间3 d、发酵温度35℃、初始pH为6.0,该条件下测得CMC酶活达85.48 U/mL、FPA酶活达59.85 U/mL。酶学性质研究表明:菌株所产纤维素酶最适反应条件为温度50℃、pH为6.0,且具在30～60℃、pH为4.0～7.0范围均具有较高酶活。以上结果表明,本研究所得菌株B17具有较高的开发价值,可应用于农作物秸秆饲料的生产。     

枯草芽孢杆菌产纤维素酶活力条件的研究

试验研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)产纤维素酶(CMCA)的活性条件。以杨树叶、酒糟、红薯秧、麸皮为主要试验碳源,通过单因素试验确定最佳碳源,并通过单因素试验和响应面法优化分析碳源添加量、产酶温度、装液量对纤维素酶活力的影响。结果表明,产酶最佳的培养条件为装液量100.510 m L、产酶温度36.995℃、碳源添加量为7.049 g/L。在此条件下,酶活力最高,为3.662 U/mL。     

培养条件对纳豆芽孢杆菌芽孢形成的影响

为了提高纳豆芽孢杆菌芽孢形成率及芽孢数量,在摇瓶、15L自动发酵罐中考察了营养条件、pH值、接种量、溶氧水平对纳豆芽孢杆菌液体培养形成芽孢的影响。结果表明,芽孢形成的最适培养基组成为:葡萄糖15g/l、大豆饼粉10g/l、KH2PO43g/l、NaCl5g/l、MnSO4·H2O0.4g/l,pH值7.0,接种后最适起始芽孢浓度为106个/ml,控制溶氧水平不低于30%,培养20h,芽孢数量可达7.7×109个/ml,芽孢率达98%以上。     

枯草芽孢杆菌的分离筛选

本文基于从秸秆垛底层土壤中分离枯草芽孢杆菌的目的,为发酵秸秆提供菌株,从陕西杨凌农村秸秆垛中采取底层土样并进行分离。分离出11株菌,经过形态特征、生理生化特征等方法从中分离初步鉴定了3株疑似菌株。经对液态发酵条件的优化,对3株疑似菌进行液态发酵试验,以粗蛋白和粗纤维含量为标准,筛选出一株发酵效果最好的菌株b-1进行了16SrDNA序列分析,最终鉴定b-1菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其同源性≥99%。     

一株产赖氨酸芽孢杆菌的筛选

87株芽孢杆菌经过2次菌液上清液赖氨酸含量测定,筛选出1株赖氨酸产量较高的菌株YB83,其在LB上清发酵液中赖氨酸含量达186.85μg/mL,比对照组提高27.68%,该菌通过菌落形态、生理生化特征和分子生物学鉴定为枯草芽孢杆菌。     

枯草芽孢杆菌替代抗生素对平养和笼养肉鸡的影响研究

 将240只1日龄罗斯308（ROSS 308）肉仔鸡,按照饲养方式（地面平养和笼养）以及添加枯草芽孢杆菌替代抗生素与否（替代和不替代）分为4个处理组（1组：抗生素地面平养组;2组：抗生素笼养组;3组：枯草芽孢杆菌地面平养组;4组：枯草芽孢杆菌笼养组）,进行42 d的饲养试验。结果显示：试验全期,肉鸡末体重和饲料/增重比指标,4组显著优于（P<0.05）1组,2组和3组之间无差异（P>0.05）。21日龄和42日龄肉鸡血清生化指标分析显示：4组肉鸡血清白蛋白浓度显著大于1组;且血清尿酸浓度4组小于1组;而2组和3组之间所有血清测定指标均无差异。以上结果证明,无论是地面平养还是笼养方式,枯草芽孢杆菌替代抗生素对改善肉鸡生长性能均有良好效果,其作用机理主要是提高饲料蛋白的营养利用率.     

增殖纳豆芽孢杆菌的豆渣培养基的优化

以豆渣为基质增殖纳豆芽孢杆菌,考察了豆渣含量、NaCl含量、初始pH值和碳源等对纳豆芽孢杆菌生长的影响,采用正交实验设计优化了培养基组成。结果表明:发酵培养基的最佳组成(W/V)为12.5%豆渣、NaCl0.35%和麸皮0.3%,初始pH值6.0;用此培养基发酵,发酵液活菌数达到12.5×108CFU/mL。     

日粮中添加纳豆芽孢杆菌对断奶后犊牛生长性能的影响

本试验旨在研究纳豆芽孢杆菌对断奶后犊牛生产性能、料重比、胴体率等指标的影响.试验选取12头60日龄左右中国荷斯坦奶牛公犊牛,采用完全区组设计,按体重差异随机分为对照组、试验l组和试验2组.试验中直接给犊牛饲喂纳豆芽孢杆菌菌液,至其开食料采食量达到规定要求时断奶,之后再饲喂7周屠宰,称胴体重.结果表明:(1)断奶后,试验1组犊牛日增重较对照组提高了16.2%(P=0.09),试验2组提高了22.1%(P=0.02);(2)与对照组相比较,试验1组和试验2组犊牛日采食量分别提高了6.1%(P＞0.05)和5.6%(P＞0.05);(3)试验1组、试验2组料重比也有降低的趋势,但与对照组差异不显著(P＞0.05);(4)试验1组、试验2组胴体率较对照组有显著提高(P=0.01).     

11株瘤胃源芽孢杆菌生理学特性研究

试验对已筛选的11株瘤胃源芽孢杆菌的产酶活力、耐酸、耐胆盐和抑菌活性及菌株间相容性进行研究。采用3,5-二硝基水杨酸法（DNS法）测定纤维素酶的活力,涂布平板计数法测定菌株的耐酸性、耐胆盐等特性,牛津杯法测定抑菌活性,滤纸片法进行室内相容性试验。结果显示,菌株T-2、T-3和T-10产纤维素酶的酶活力较高;菌株T-2、T-5、T-7、T-8和T-9表现较强的耐酸能力;菌株T-4、T-5、T-9和T-11表现较强的耐胆盐能力。菌株T-4和T-7对副溶血弧菌的抑菌活性较强,T-7对产气杆菌的抑菌活性最强,T-5、T-9、T-10对大肠杆菌抑菌活性较强,而T-3对藤黄八叠球菌指示菌的抑菌性最强。室内相容性试验结果表明,11株芽孢杆菌部分菌株之间存在颉颃作用,由此筛选出优良菌株的复配组合,抑菌可能的最优复配组合为T-3、T-4、T-5;T-3、T-4、T-10;T-4、T-5、T-10;T-3、T-7、T-10。纤维素酶活力较强时可能的最优复配组合为T-2、T-3、T-5;T-2、T-3、T-10;T-2、T-5、T-10;T-3、T-5、T-6;T-3、T-5、T-10。本试验可为动物饲料的研究和开发提供一定的参考依据。     

纳豆芽孢杆菌在反刍动物生产中的应用

纳豆芽孢杆菌是近年来逐渐兴起的一种饲用益生菌,由于有多种益生功能而用于畜禽生产并取得了较好的饲喂效果。作者对纳豆芽孢杆菌的特性、益生作用机理及其在反刍动物生产中的应用进行了概括总结,并提出了纳豆芽孢杆菌作为饲用益生菌所面临的问题及未来的研究方向。     

日粮中添加纳豆枯草芽孢杆菌对犊牛消化道发育的影响

本试验旨在研究纳豆枯草芽孢杆菌对犊牛断奶早期和断奶后8周消化道生长发育的影响。选取24头7日龄中国荷斯坦奶牛公犊,随机分为3个处理,每个处理8头犊牛,试验1、2组犊牛分别饲喂Na型和N1型纳豆枯草芽孢杆菌菌液,对照组不饲喂菌液。饲喂的牛奶中添加纳豆枯草芽孢杆菌菌液,连续饲喂直到开食料采食量达到规定要求时断奶;断奶时各组随机选取4头犊牛屠宰,余下4头犊牛继续饲养,8周后屠宰,称胴体重。结果表明,试验1组犊牛断奶早期瘤网胃重量明显高于对照组(P0.05);试验2组犊牛断奶早期及断奶后8周瘤胃pH显著低于对照组(P0.05),且与对照组相比,断奶早期皱胃pH显著下降(P0.05);试验1组犊牛断奶早期及断奶后8周十二指肠长度较对照组相比明显缩短;断奶后8周两处理组犊牛回肠长度显著小于对照组(P0.05);此外,饲喂纳豆枯草芽孢杆菌还可显著降低犊牛十二指肠和空肠前段食糜的pH(P0.05)。本试验结果表明,饲喂纳豆枯草芽孢杆菌有利于营养物质消化,促进犊牛生长。