氨苄西林诱导大肠杆菌L型的试验研究

为诱导大肠杆菌L型,以氨苄西林作为诱导剂,采用药物纸片法进行反复传代,对抑菌圈边缘菌落进行涂片、革兰氏染色及细胞壁染色、镜检,观察其菌落及菌体的形态,并对获得的稳定细菌L型进行致病性试验,以期为兽医临床开展L型菌检测及其相关试验提供理论基础.结果表明,采用氨苄西林药物纸片(200μg/片)经过9次传代,可获得稳定的细菌L型,且该L型菌具有致病性.     

入侵植物对土壤微生物群落的影响研究

外来植物的入侵是全球三大最棘手的环境问题之一,其严重性仅次于栖息地丧失,目前已经成为一个全球性的问题。入侵植物不仅可以导致全球生物多样性的丧失,改变土壤微生物群落的多样性,还能对生态系统造成严重的破坏,带来巨大的经济损失。本文主要研究入侵植物对土壤微生物的群落的影响。     

犬源大肠杆菌的耐药研究

为了解犬源大肠杆菌的耐药情况,采用微生物学病原分离鉴定法,从40份犬粪样中获得大肠杆菌12株。纸片法药物敏感试验结果:12株大肠杆菌对于头孢曲松、庆大霉素、小诺霉素、林可霉素、磺胺间甲氧嘧啶、氟苯尼考、妥布霉素、左旋氧氟沙星的耐药率依次为:83.3%、83.3%、83.3%、91.7%、66.7%、91.7%、83.3%、100%。     

黄芩对安普霉素耐药大肠杆菌的耐药消除研究

【目的】探讨黄芩对安普霉素耐药大肠杆菌的耐药消除作用。【方法】制备黄芩醇提物,采用琼脂稀释法检测黄芩醇提物对耐药大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC),通过耐药消除试验和影印法检测耐药消除率。进而采用微量肉汤稀释法和纸片扩散法检测消除前后大肠杆菌耐药性的变化,扫描电镜法观察细菌形态的变化,实时荧光定量PCR法检测耐药相关基因相对表达量的变化。【结果】黄芩醇提物对安普霉素耐药大肠杆菌的MIC为41.25 mg/mL,对耐药大肠杆菌的耐药消除率为11.7%～17.0%。黄芩醇提物处理后,大肠杆菌的MIC值由256μg/mL降至16～32μg/mL;扫描电镜观察发现,黄芩醇提物处理组细菌表面受损,菌体形态异常;实时荧光定量PCR检测结果显示,黄芩醇提物极显著提高了大肠杆菌中ompF、fimA、phnE和fhuF基因mRNA的相对表达量(P<0.01)。【结论】黄芩醇提物能提高ompF、fimA、phnE和fhuF基因的表达水平,破坏细菌表面,提高大肠杆菌敏感性,发挥对安普霉素耐药大肠杆菌的耐药消除作用。     

影响大肠杆菌中外源基因表达的因素

大肠杆菌由于遗传背景简单,可进行大规模发酵培养,表达周期短,操作简单及已有大量可供选择利用的载体,而成为人们克隆与表达外源基因的首选。但在外源基因的表达过程中,常常会遇到表达效率不高和产率较低等困难。以往的研究表明,影响外源基因表达效率的因素主要有密码子的选用、目的基因的量、载体的选择、宿主菌的培养控制等。     

大肠杆菌表达系统的影响因素

大肠杆菌已经被广泛地应用于表达各种外源基因,但并非每一种基因都能在其中有效表达。基因的表达受到多种因素的影响,表达效率也有很大差异。本文从外源基因本身特性和表达系统的特性及其他因素等方面阐明外源基因高效表达的影响因素,从而为大肠杆菌表达系统高效表达外源蛋白提供参考。     

ZZMZ菌剂在牛粪堆肥过程中对微生物群落的影响

[目的]为了提高牛粪堆肥中分解纤维素的微生物含量.[方法]以人工接种灭活ZZMZ堆肥微生态调节剂堆肥处理(JSM 堆肥)和未接种ZZMZ堆肥微生态制剂处理作为对照,按40 L/40 t(1‰)添加灭活ZZMZ堆肥微生态调节剂.[结果]表明:接种ZZMZ菌剂可以使牛粪便堆肥细菌数量提高4.53%,放线菌数量提高6.37%...     

柑橘砧木枳雀和枳的根系微生物群落比较分析

为了探讨枳雀耐缺铁的原因,本文采用高通量测序技术比较分析了柑橘耐缺铁砧木枳雀与缺铁敏感砧木枳的根系（包括根际与根内）微生物群落及微生物在枳雀耐缺铁中的可能作用。结果表明,两种砧木的根际微生物数量均显著大于根内;枳雀的根际和根内微生物多样性与枳无显著性差异;两种砧木的根系微生物主要属于变形菌门和放线菌门;共16个属的微生物在两种砧木中的丰度有显著差异,其中11个属在枳雀中的丰度显著高于枳,另5个属则相反。本研究发现枳雀与枳的根系微生物多样性无差异,但具体的微生物组成存在显著差异,部分与铁吸收相关的微生物如产高铁载体菌、根瘤菌、矿物风化菌、耐高盐碱菌在枳雀中的丰度显著高于枳,可能与枳雀耐缺铁有关。     

豆科禾本科牧草混播比例的研究

于1990年9月～1991年3月在四川农业大学试验农场对意大利黑麦草(简称黑麦草),燕麦和光叶紫花苕(简称光苕)的混播比例进行了实验。每种混播组合设四个比例,豆:禾分别为85:15,70:30,50:50,25:75;通过对产量测定、营养成分分析和群落结构的观察,选出了混播最佳比例。光苕和黑麦草混播以70:30为最好,其产量较单播光苕提高70.05％,较单播黑麦草提高57.15％。光苕和燕麦混播以85:15为最好,其干草产量较单播光苕提高62.53％,较单播燕麦提高45.92％。     

长治鸡群大肠杆菌耐药状况的研究

研究长治鸡群大肠杆菌耐药状况、交叉耐药状况、多重耐药状况及是否出现超级大肠杆菌,同时为临床用药提供参考,减少用药成本,控制大肠杆菌的危害,增加养殖户的收入.剖解病死鸡,采集可疑病料进行细菌分离培养鉴定,通过药敏试验确定其耐药情况.试验结果:长治鸡群大肠杆菌对氨苄青霉素耐药程度83%;对红霉素耐药程度67%;对复方新诺明耐药程度50%;先锋V耐药程度50%;对诺氟沙星耐药程度50%;对万古霉素耐药程度50%;对氯霉素耐药程度33%;对庆大霉素耐药程度33%;对阿米卡星耐药程度17%;对环丙沙星耐药程度17%;对利福平耐药程度17%;对复达欣耐药程度17%;对新生霉素耐药程度为0.结论:长治鸡群分离出的6株大肠杆菌中的5株为多重耐药性大肠杆菌,目前未出现超级大肠杆菌.对常用抗菌药物中的青霉素类、大环内酯类、头孢类、喹诺酮类耐药程度达到50%以上,分别为83%、67%、50%、50%;对新药万古霉素的耐药程度也达到了50%.     

A Cross‐Sectional Study Examining the Prevalence and Risk Factors for Anti‐Microbial‐Resistant Generic Escherichia coli in Domestic Dogs that Frequent Dog Parks in Three Cities in South‐Western Ontario,Canada

Anti‐microbial resistance can threaten health by limiting treatment options and increasing the risk of hospitalization and severity of infection. Companion animals can shed anti‐microbial‐resistant bacteria that may result in the exposure of other dogs and humans to anti‐microbial‐resistant genes. The prevalence of anti‐microbial‐resistant generic Escherichia coli in the faeces of dogs that visited dog parks in south‐western Ontario was examined and risk factors for shedding anti‐microbial‐resistant generic E. coli identified. From May to August 2009, canine faecal samples were collected at ten dog parks in three cities in south‐western Ontario, Canada. Owners completed a questionnaire related to pet characteristics and management factors including recent treatment with antibiotics. Faecal samples were collected from 251 dogs, and 189 surveys were completed. Generic E. coli was isolated from 237 of the faecal samples, and up to three isolates per sample were tested for anti‐microbial susceptibility. Eighty‐nine percent of isolates were pan‐susceptible; 82.3% of dogs shed isolates that were pan‐susceptible. Multiclass resistance was detected in 7.2% of the isolates from 10.1% of the dogs. Based on multilevel multivariable logistic regression, a risk factor for the shedding of generic E. coli resistant to ampicillin was attending dog day care. Risk factors for the shedding of E. coli resistant to at least one anti‐microbial included attending dog day care and being a large mixed breed dog, whereas consumption of commercial dry and home cooked diets was protective factor. In a multilevel multivariable model for the shedding of multiclass‐resistant E. coli, exposure to compost and being a large mixed breed dog were risk factors, while consumption of a commercial dry diet was a sparing factor. Pet dogs are a potential reservoir of anti‐microbial‐resistant generic E. coli; some dog characteristics and management factors are associated with the prevalence of anti‐microbial‐resistant generic E. coli in dogs.     

影响大肠埃希菌感受态细胞因素的探讨

研究不同型号的菌株、不同转化溶液、感受态细胞的存放时间、转化时间及转化后的复苏时间等对质粒转化效率的影响.结果表明,转化溶液浓度和感受态细胞的存放时间对转化效率有明显的影响,而转化时间、冰浴时间和转化后的振荡培养复苏时间对转化效率的影响不明显.     

大肠埃希菌F18菌毛结构亚单位抗原特性的研究

利用已经表达的大肠埃希菌F18ab和F18ac菌毛各结构亚单位(FedA、FedE、FedF)的融合蛋白GST-FedA/ab、GST-FedA/ac、GST-FedE/ab、GST-FedF/ab、GST-FedF/ac分组肌肉注射免疫成年健康家兔,分别制备抗GST-FedA/ab、GST-FedA/ac、GST-FedE、GST-FedF/ab、GST-FedF/ac的多价血清.玻板凝集试验结果表明,抗GST-FedA/ab、GST-FedA/ac、抗GST-FedE/ab、GST-FedF/ab、GST-FedF/ac多价血清均能同时凝集F18ab+大肠埃希菌F107/86株、F18ac+大肠埃希菌8813株.通过荧光抗体染色法对抗FedA/ab、FedA/ac、FedE/ab、FedF/ab、FedF/ac的单因子血清的研究,发现F18菌毛"a"抗原因子分布于FedA、FedE、FedF亚单位上,"b/c"抗原因子分布于FedA、FedF亚单位上.     

四种植物提取物对大肠杆菌的抑菌效果研究

 为充分利用当地资源和进一步开发植物药进行畜禽大肠杆菌病防治提供科学依据,采摘了本地生长的马鞭草、马齿苋、忍冬藤、蒲公英等四种植物,应用水提醇沉法制备提取液,用纸片扩散法和试管两倍稀释法对猪源、鸽源、牛源大肠杆菌进行体外抑菌效果试验,同时以小鼠为试验动物,检测四种植物提取液体内的抗菌作用。结果显示,四种植物对猪源大肠杆菌的抑菌圈在10～14 mm之间,均为中敏;对鸽源大肠杆菌在10～22 mm之间,马鞭草极敏,蒲公英高敏;对牛源大肠杆菌在7～14 mm之间,马鞭草高敏,蒲公英、忍冬藤中敏,马齿苋低敏。马鞭草对猪源、鸽源大肠杆菌的MIC和MBC是31.25 mg/mL,对牛源是62.5 mg/mL;蒲公英对猪源、鸽源的大肠杆菌MIC和MBC是62.5 mg/mL,对牛源是125 mg/mL;马齿苋对猪源的MIC和MBC是62.5 mg/mL和125 mg/mL,对鸽源、牛源的MIC和MBC分别是125 mg/mL和250 mg/mL;忍冬藤对猪源、牛源的MIC和MBC分别是125 mg/mL和250 mg/mL,对鸽源MIC和MBC是62.5 mg/mL和125 mg/mL。小鼠体内抗菌作用提示,用蒲公英和马鞭草1.88 g/kg、马齿苋和忍冬藤3.75 g/kg进行预防,可使感染大肠杆菌的小鼠成活率为达100%。四种植物提取液对大肠杆菌体外抑菌和体内抗菌均有较好的效果,马鞭草效果最好     

大肠杆菌菌体O抗原单因子定型血清的制备

为研制大肠杆菌菌体O抗原单因子定型血清,以大肠杆菌参考菌株CVCC1345(O2)、CVCC1350(O7)、CVCC1414(O74)为菌种制备抗原免疫家兔,获得了定型原血清,并通过比较不同免疫程序及剂量优化了定型原血清的制备工艺。进而按照优化后的定型原血清制备工艺,以大肠杆菌参考菌株CVCC1343(O1)、CVCC1345(O2)、CVCC1350(O7)、CVCC1405(O64)、CVCC1414(O74)、CVCC1439(O100)、CVCC1442(O103)、CVCC1455(O116)、CVCC1466(O128)、CVCC3801(O154)为菌种制备抗原免疫家兔,获得了10种O抗原型定型原血清。将定型原血清分别与180种微量凝集试验抗原逐一反应,明确各原血清与非特异性抗原的交叉凝集价,通过用吸收抗原对原血清进行吸收及稀释的方法消除非特异性凝集,最终制备成大肠杆菌菌体O抗原单因子定型血清。血清质量评价结果表明,新制备的单因子定型血清性状为无色、淡黄色或黄色澄明液体,个别有少量絮状物;无菌生长;特异性良好;凝集效价为1︰2。研究结果显示,制备的大肠杆菌O抗原单因子定型血清具有较好的特异性,可以用于对临床分离大肠杆菌进行O抗原血清型鉴定。     

东北地区鸡源大肠埃希菌耐药性试验

为了选择敏感药物以避免抗药性的产生,选用新霉素、头孢噻肟钠、甲磺酸培氟沙星等8种抗菌药对东北地区主要养鸡场分离出的优势血清型致病性大肠埃希菌进行药敏试验.结果8种抗菌药的抑菌圈直径分别是氟苯尼考30 mm,头孢噻污钠28 mm,新霉素27 mm,甲磺酸培氟沙星21 mm,丁胺卡那25 mm ,磷霉素钙19 mm,庆大霉素6 mm,阿莫西林15 mm.根据药物敏感试验结果表明,抑菌作用较强的为氟苯尼考、头孢噻肟钠和新霉素.     

潍坊地区鸡大肠杆菌病的流行病学调查

通过对鸡大肠杆菌临床发病的问卷调查及笔者所在门诊2006年-2008年三年中鸡大肠杆菌确诊病例的统计,对山东潍坊地区鸡大肠杆菌的感染及发病情况进行了调查,在此基础上对某些发病鸡群进行了细菌的分离鉴定和血清型分型。结果显示:潍坊地区鸡大肠杆菌的感染具有较高的比例,O78、O2、O15为该地区的主要优势血清型。该研究为指导潍坊地区鸡大肠杆菌的防治提供了一定的依据。     

大肠杆菌灭活苗的免疫试验

用甘肃省大肠杆菌的代表血清型和筛选的大肠杆菌菌株原生质体融合菌株及大肠杆菌菌株与沙门氏菌菌株原生质体融合菌株研制的大肠杆菌菌苗进行大肠杆菌灭活苗免疫学试验,试验结果表明菌苗免疫性能好,菌苗的免疫高峰期在30 d左右,凝集抗体滴度在28左右,对动物的保护期在4个月以上,而且稳定性能和安全性能均良好,是一种效果较好的菌苗。     

动物源大肠杆菌整合子携带氨基糖苷类耐药基因盒的研究

收集540株不同动物源大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法检测其对22种药物的耐药性;利用多重PCR方法检测菌株携带3型整合子的情况;采用χ2检验分析1型整合子阳性菌及阴性菌的耐药性;采用PCR—DNA测序法对整合子阳性菌株携带的氨基糖苷类耐药基因盒进行分析。结果显示,540株菌对链霉素等20种药物耐药率超过37％,全部菌株均呈多重耐药;1型整合子检出率为86．48％,未检出2及3型整合子;整合子阳性菌株对头孢唑啉等13种药物耐药率显著高于整合子阴性菌;随机选择的67株1型整合子阳性菌株中,有92．54％菌株携带有编码氨基糖苷核苷转移酶和乙酰转移酶基因（aadA2、aadA5、aadA22、aacA4）,共有5种类型基因盒,其中以介导对甲氧苄啶、链霉素和大观霉素耐药的dfrA17＋aadA5组合最为常见;在2株茵中分别发现介导对阿米卡星、氯霉素及甲氧嘧啶耐药的aacA4＋catB3＋dfrA1组合,和介导链霉素、大观霉素耐药的aadA22基因盒,是在四川分离菌中首次发现这2种基因盒。结果表明,1型整合子广泛存在于大肠杆菌临床菌株中,大肠杆菌耐药性与整合子相关,菌株中广泛携带氨基糖苷类及甲氧苄胺嘧啶耐药基因盒。