内蒙古自治区鄂尔多斯市马铃薯腐烂茎线虫种类鉴定研究

<正>0 引言马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor Thorne)又名甘薯茎线虫,属于侧尾腺纲垫刃目粒线虫科茎线虫属。马铃薯腐烂茎线虫病是国际公认的一种检疫性疾病,是马铃薯重要病害之一^[1]。该线虫主要侵染植物地下部分,在没有高等寄生植物的情况下,依靠取食土壤中的真菌维持生存^[2],寄主范围广^[3]。近几年,马铃薯腐烂茎线虫危害逐渐上升,可导致马铃薯减产20%～83%,严重时甚至绝收。     

玉米线虫矮化病病原鉴定

为明确东华北春玉米区暴发的一种危害严重、引起玉米植株矮化的新病害病原,从病区采集大量病株及其根际土壤,采用室内人工接种的方法对分离频率最高的3种镰孢菌,即亚粘团镰孢菌Fusarium subglutinans、拟轮枝镰孢菌F.verticillioides和层出镰孢菌F.proliferatum及线虫(群体)进行致病性测定。结果表明:有线虫(群体)的处理能够引起该病害典型症状,即植株矮化,叶片上有沿叶脉方向的黄色或白色失绿条纹,茎基部组织从内向外呈纵向或横向开裂,推断该病的发生和线虫有关。将回接发病植株病土中分离的矮化线虫属Tylenchorhynchus sp.、短体线虫属Pratylenchus sp.、发垫刃线虫属Trichotylenchus sp.、拟盘旋线虫属Pararotylenchus sp.、小环线虫属Criconemella sp.、垫刃线虫属Tylenchus sp.、丝尾垫刃线虫属Filenchus sp.、螺旋线虫属Helicotylenchus sp.和真滑刃线虫属Aphelenchus sp.进行分属后再回接,只有发垫刃属线虫的处理出现与田间发病症状一致的植株。综合形态特征、致病力和分子序列分析结果,确定该病病原为长岭发垫刃线虫T.changlingensis,并将该病害称为玉米线虫矮化病(maize nematode stunt disease)。     

海南岛反季节蔬菜根际寄生线虫种类记述

从海南岛反季节蔬菜根际土壤中分离鉴定出9属12种寄生线虫,分别为肾形肾状线虫(Rotylenchulus reniformis LinfordOliverira,1940)、双宫螺旋线虫[Helicotylenchus dihystera(Cobb,1893)Sher,1961]、刻尾螺旋线虫(H.crenacauda Sher,1966)、咖啡短体线虫[Pratylenchus coffeae(Zimmermann,1898)FilipjevSchuurmans Stekhoven,1941]、穿刺短体线虫[P.penetrans(Cobb,1917)Chitwood,Oteifa,1952]、尖突潜根线虫[Hirschmanniella mucronata(Das,1960)LucGoodey,1963]、异头丝尾垫刃线虫(Filenchus heterocephalus XieFeng,1996)、塞氏纽带线虫(Hoplolaimus seinhorsti Luc,1958)、燕麦真滑刃线虫(Aphelenchus avenae Bastian,1865)、类双尾滑刃线虫(Aphelenchoides parabicaudatus Shavrov,1967)、内卷滑刃线虫(A.involutus Minagawa,1992)和较小拟毛刺线虫[Paratrichodorus minor(Colbran,1956)Siddiqi,1974]。其中,异头丝尾垫刃线虫和内卷滑刃线虫为海南岛新纪录种。     

兰科植物寄生线虫调查鉴定初报

为明确国内兰科植物寄生线虫的发生情况和主要种类,对来自9省(市)的23属213株兰科植物及其介质进行了调查.初步鉴定出短体属、滑刃属、长尾属、针属、剑属、茎属、真滑刃属、垫刃属、丝尾垫刃属、螺旋属和突腔唇属共11属植物寄生线虫.其中,滑刃属、垫刃属、茎属、真滑刃属和螺旋属线虫的检出率较高,分别为39.4％、14.6％、...     

福建省蝴蝶兰根部寄生线虫种类鉴定

为明确福建省蝴蝶兰线虫发生情况,利用改良贝尔曼漏斗法从蝴蝶兰根部及根际介质中进行分离,经形态学鉴定,共有6种植物寄生线虫双尾滑刃线虫(Aphelenchoides bicaudatus)、斯坦纳长尾线虫(Seinura steineri)、奥阿胡长尾线虫(S.oahuensis)、蘑菇滑刃线虫(A.composticola)、普通丝尾垫刃线虫(Filenchus vulgaris)和食菌茎线虫(Ditylenchus myceliophagus).优势种群是双尾滑刃线虫,其次是蘑菇滑刃线虫.     

北方春玉米区长岭发垫刃线虫的分布及遗传多样性分析

 为明确长岭发垫刃线虫(Trichotylenchus changlingensis)的分布,2018年对黑龙江、吉林、辽宁、河北、内蒙古、甘肃6省(自治区)118个地块的玉米根际土壤中长岭发垫刃线虫进行分离及鉴定,结果表明:在6个省(自治区)20个地块的土样中分离到该线虫,分离比例为17.0%。同时采用ISSR分子标记技术对分离到的20个种群进行遗传多样性分析。结果共筛选出16条引物,扩增出93条多态性条带,多态性比率为93.55%。基因分化系数(Gst)为0.4771,遗传变异的47.71%存在于种群间,52.29%存在于种群内。基因流(Nm)值为0.5479,说明所调查地区种群间存在基因流,基因流动较小,但种群间已发生一定程度的遗传分化。UPGMA 聚类分析结果表明,这20个种群具有丰富的遗传多样性,但群体间的遗传关系远近与地理距离无显著相关性。     

新疆果树寄生线虫新记录属、种记述

通过对新疆北部和东部主要果品产地果树寄生线虫种类的调查和鉴定 ,发现新平滑垫刃属 (Neopsilenchus Thorne&;Malek ,)、小环线虫属 (Criconemella de Grisse&;Loof,)、杆垫刃属 (Rhabdotylenchus Xie,Feng ,Li&;Yin ,)及广东杆垫刃线虫 (R guangdongensis Xie,Feng,Li&;Yin ,)、剑针属 (Xiphidorus Monteiro)及萨拉弟尔剑针线虫 (X. saladillenis Chaves&;Coomans,)、钩状垫刃线虫 (Tylenchus hamatus Thorna and Malek ,)、普通丝尾垫刃线虫 [Filenchu svulgaris (Brzeski)Lowmsberyet Lownsbery]、阿布那玛螺旋线虫 (Helicotylenchus abunaami Siddiqi,)、裂片盘旋线虫 (Rotylenchus lobatus Filipjev,)为新疆主要果树上寄生线虫的新记录属和新记录种。     

福建省花生根部寄生线虫种类鉴定

从福建省花生(Arachis hypogaea Linn.)根部及根际土壤中共分离鉴定出11种植物寄生线虫:肾状肾形线虫(Rotylenchulus reniformis)、咖啡短体线虫(Pratylenchus coffeae)、饰环矮化线虫(Tylenchorhynchus annula-tus)、装饰小环线虫(Criconemella ornata)、双宫螺旋线虫(Helicotylenchus dihystera)、食菌茎线虫(Ditylenchusmyceliophagus)、蘑菇滑刃线虫(Aphlenchoides composticola)、燕麦真滑刃线虫(Aphelenchus avenae)、广东杆垫刃线虫(Rhabdotylenchus guangdongensis)、丝尾垫刃线虫(Filenchus sp.)和根结线虫(Meloidogyne sp.)。其中肾状肾形线虫、咖啡短体线虫、装饰小环线虫和根结线虫为花生的重要寄生线虫。     

云南省灯盏花根际土壤寄生线虫的种类鉴定

2001-2005年对云南省灯盏花主要栽培区的灯盏花根部及根际土壤的寄生线虫进行分类鉴定,共鉴定出9种线虫:内卷滑刃线虫(Aphelenchoides involutus)、燕麦真滑刃线虫(Aphelenchus avenae)、异头丝尾垫刃线虫(Filenchus heterocephalus)、双宫螺旋线虫(Helicotylenchus dihystera)、南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、草地短体线虫(Pratylenchus pratensis)、活泼平滑垫刃线虫(Psilenchus hilarulus)、戴维恩垫刃线虫(Tylenchusdavainei)和广东垫刃线虫(Tylenchus guangdongensis)。优势种群是双宫螺旋线虫,其次是南方根结线虫。灯盏花是这些线虫的新记录寄主。     

丝尾垫刃属新种的描述(线虫门:垫刃科)Ⅲ.山地丝尾垫刃线虫新种和东方丝尾垫刃线虫新种

 本文记述了采自香港的丝尾垫刃线虫2新种:山地丝尾垫刃线虫新种(Filenchus montanus n.sp.)和东方丝尾垫刃线虫新种(Filenchus orientalis n.sp.)。前者采集于大屿山的甘蔗(Saccharum officinarum)根际土壤,其主要鉴别特征是侧区有3条侧线、体短、角质层环粗,此新种在头部、尾部等特征上区别于近似种巴洛格丝尾垫刃线虫(F.baloghi(Andrássy,1958)Siddiqi,1986)和毛发形尾丝尾垫刃线虫(Filenchus criniformicaudatus(Kazachenko,1975) Siddiqi,1986)。后者采集于锦田的蕹菜(Ipomoea aquatica)根际土壤,其与近似种普通丝尾垫刃线虫(F.vulgaris(Brzeski,1963) Lownsbery&Lownsbery,1985)的主要区别是尾短、排泄孔位置靠前和阴门位置靠后。     

香蕉穿孔线虫(Radopholus similis)特异性分子检测技术研究

 香蕉穿孔线虫(Radopholus similis)是一种国际公认的极具毁灭性的有害线虫,也是我国重要的进境检疫性有害生物。利用线虫通用引物对香蕉穿孔线虫7个不同群体的ITS进行PCR扩增、克隆及测序,获得ITS片段序列长度为706bp。经与国外香蕉穿孔线虫种群及近缘种的ITS序列进行比对及同源性分析,构建设计了1对香蕉穿孔线虫的特异性引物RsF1/RsR1,特异性扩增片段长度为271 bp;同时引入D2A/D3B作内标,研究出特异性检测香蕉穿孔线虫的一步双重PCR分子技术和方法,该项检测技术特异性好,耗时较短、操作简便、可靠。     

烟草根黑腐病菌的PCR分子检测

 根据烟草根黑腐病菌(Thielaviopsis basicola)与其它烟草病原真菌核糖体基因转录间隔区(internal transcribed spa-cer,ITS)序列间的差异,设计了一对特异性引物TB-5/TB-3,用于T. basicola的分子检测。利用该对引物对包括T. basicola在内的13个烟草病原菌菌株的基因组DNA进行PCR扩增,结果表明:只有T. basicola能扩增到一条400bp左右的特异性条带,其它菌株及阴性对照均无扩增产物。对烟草组织和土壤的检测结果也表明,该对引物能特异性的检测到T. basicola基因组DNA的存在。该引物对T. basicola基因组DNA检测的灵敏度为100fg/μL。     

双重PCR检测马铃薯晚疫病菌和青枯病菌方法的建立及应用

 利用真菌通用引物ITS1和ITS4扩增马铃薯晚疫病菌转录间隔区并进行序列测定,通过序列比较,设计了1对马铃薯晚疫病菌的特异引物INF1/INF2,并对15种不同真菌、细菌和7种疫霉属和腐霉属卵菌基因组DNA进行PCR扩增,结果只有不同来源的马铃薯晚疫病菌株可获得324 bp的特异带。将引物INF1/INF2与卵菌通用引物进行巢式PCR扩增后,其检测灵敏度在DNA水平上可达30 fg。运用设计的引物与马铃薯青枯病菌特异引物结合建立了双重PCR体系,能从马铃薯晚疫病菌和马铃薯青枯病菌总基因组DNA以及人工接种和自然发病的马铃薯植株中分别或同时扩增到324 bp和281 bp的特异片段。实现了同时对马铃薯晚疫病菌和马铃薯青枯病菌的快速可靠检测。     

马铃薯腐烂茎线虫特异性分子检测技术研究

 本研究利用通用引物(rDNA1/rDNA2)研究了21个国内甘薯茎线虫(Ditylenchus destructor)群体和1个韩国马铃薯茎线虫(D.destructor)群体的rDNA-ITS序列,从21个国内群体中扩增出2个大小不同的ITS片段,分别约为940bp和1100bp;经克隆、序列测定和分析比对发现其ITS区存在特异性差异,分别命名为A型和B型,其中18个群体DdTH、DdCL、DdJN、DdMY1、DdYX1、DdZZ、DdLN,DdDX1、DdFN,DdYX2、DDSX1、DdDX2、DdXY,DdLL、DdSX2、DdLY,DdMY2和DdPY的ITS扩增产物约为940bp,称之为A型马铃薯腐烂茎线虫(940bp),3个群体DdSH,DdTS,DdYS为B型马铃薯腐烂茎线虫(1100bp)。设计构建并筛选出A型和B型马铃薯腐烂茎线虫2对特异性引物DdS1/DdS2和DdL1/DdL2,分别扩增出A型马铃薯腐烂茎线虫、B型马铃薯腐烂茎线虫群体的特异片段252bp和485bp;引入D3A/D3B作为内标,设计出一步双重PCR检测技术;同时优化了检测体系和PCR反应程序。该技术具有较高的特异性和灵敏性,能快速、准确地检测出不同型的马铃薯腐烂茎线虫群体。     

大豆猝死综合症病原菌北美种的PCR鉴定

 应用等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)技术,建立了大豆猝死综合症(sudden death syndrome of soybean,SDS)病原菌北美种Fusarium virguliforme与其近似种Fusarium phaseoli(菜豆根腐病菌)的鉴别方法。针对翻译延长因子(EF-1α)基因上的3个SNP(单核苷酸多态性)位点,参照引物设计原则和等位基因特异引物(allele-specific primer,ASP)的要求设计了1对引物Fsg-α-1/2,能特异地扩增F.virguliforme,产生327 bp的电泳条带。另外,根据ITS区序列设计了1对通用引物Fu1/2,能扩增F.virguliforme和F.phaseoli,产生452 bp的电泳条带。本实验在传统的AS-PCR基础上进行改进,引入Fu1/2作为阳性质控引物,将ASP的特异性与双重PCR的严谨性相结合,建立了简便可靠的SDS病原菌鉴定方法。     

Detection of Fusarium oxysporum f.sp. vasinfectum in cotton tissue by polymerase chain reaction

A polymerase chain reaction assay was developed for the detection of Fusarium oxysporum f.sp. vasinfectum (FOV), a serious wilt pathogen of cotton in many parts of the world. Based on small nucleotide differences in internal transcribed spacer sequences between 18S, 5.8S and 28S ribosomal DNAs, primers Fov1 (5'-CCCCTGTGAACATACCTTACT-3') and Fov 2 (5'-ACCAGTAACGAGGGTTTTACT-3') were selected. These primers unambiguously amplified a 400-bp DNA fragment of all the FOV isolates tested (from Angola, Brazil, China and the USA) but did not amplify any other isolates of mycoflora associated with cotton, such as F. moniliforme , Verticillium albo-atrum , V. dahliae , Aspergillus sp., F. oxysporum , F. sambucinum or F. solani . A control PCR assay was developed employing the universal primer pair ITS1 and ITS2 which amplified a fragment of approximately 220 bp from all isolates tested. This control assay demonstrated that all fungal DNAs were readily amplifiable, thus confirming that the lack of amplification with Fov1 and Fov2 primers was a result of primer specificity and not of other possible causes, such as DNA degradation or the presence of PCR inhibitors. The assay was effective on samples from the stems, leaves, roots and calli, and from plant tissues both with and without symptoms. This detection system proved to be accurate and sensitive and could aid not only diagnosis but also disease monitoring and forecasting.     

冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)的快速分子检测

 由冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)引起的疫病是一类植物检疫性病害。为建立该病原菌的快速检测技术,本文比较分析了冬生疫霉和其它疫霉的ITS序列,在此基础上设计了一对检测冬生疫霉的特异性引物751F/752R,该对引物从冬生疫霉中扩增得到一条616bp的条带,而其它19种疫霉和其它真菌菌株均无扩增条带,表明该对引物对冬生疫霉具有特异性。在25μL PCR反应体系中,引物751F/752R检测灵敏度为10龟基因组DNA;而以卵菌ITS区通用引物ITS1/ITS4和751F/752R进行套式PCR扩增,能够检测到10ag的基因组DNA,使检测灵敏度提高了1000倍。该检测体系对灭菌水中游动孢子的检测灵敏度可达0.5个游动孢子。结合快速碱裂解法提取发病组织的DNA,采用该PCR检测技术,在1个工作日内即可从人工接种发病的植物组织中特异性的检测到该病原菌。表明本研究建立的检测方法可用于冬生疫霉的快速分子检测。     

河南郑州小麦禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae)的核糖体基因ITS序列和RFLP分析

 采用PCR技术对河南郑州禾谷孢囊线虫群体的核糖体基因(ribosomal DNA,rDNA)内转录间隔区(Internal Transcribed Spacers,ITS)进行扩增,获得片段长度约为1040bp。利用UPGMA方法分析了河南郑州禾谷孢囊线虫群体与近缘种的系统发育关系,结果表明:中国Heterodera avenae群体,H.australis和H.pratensis亲缘关系很近。8种限制性内切酶(Restriction Enzyme,RE)酶切禾谷孢囊线虫ITS的扩增产物,其中HindⅢ、AvaⅠ不能酶切PCR产物;Alu Ⅰ酶切PCR产物,获得560bp和480bp2个片段;RsaⅠ和Hinf Ⅱ酶切后分别得到3个片段(700、320、20bp和820、180、40bp);CfoⅠ是3个酶切位点(740、150、110、40bp);HaeⅢ和MvaⅠ能分别清晰地观察到3个片段(420、350、180bp和400、340、280bp),但有微小片段无法清晰观察到。9个种群所得RFLP图谱一致,说明郑州禾谷孢囊线虫群体可能是同一种群且不同于欧洲群体(typeA)和印度群体(typeB)的C型。     

谷子锈菌巢式PCR检测体系的建立

<正>由粟单胞锈菌(Uromyces setariae-italicae)引起的谷子锈病是一种危害严重的真菌性病害,该病可在短期内大面积流行,通常导致减产10%~30%。谷子锈病病原菌U.setariae-italicae,属担子菌亚门(Basidiomycotina)、柄锈菌科(Pucciniaceae)、单胞锈菌属(Uromyces),是一种多孢型转     

红掌胶胞炭疽菌的分子检测

 胶胞炭疽菌是引起红掌炭疽病的病原菌。根据GenBank中炭疽属不同种的ITS序列差异,设计了胶胞炭疽菌的特异性引物E1/E2,由此建立的PCR检测体系可以从38个胶胞炭疽菌菌株中扩增得到329 bp的特异性条带,而扩增其它近似或相关菌株时没有相应的特异性条带。该检测体系对胶胞炭疽菌基因组DNA的扩增灵敏度达到10 pg。将引物E1/E2与ITS区通用引物进行套式PCR扩增后,检测灵敏度至少提高10 000倍。当土中胶胞炭疽菌分生孢子达到200个/g土时可检测出。进一步利用此检测体系对携带病原菌的灌溉水、发病组织进行检测,均能快速稳定地检测出病原菌。