产几丁质酶菌的分离鉴定及其抑菌作用的初步研究

从北就地区的土样、砂样和水样中分离并纯化了产生几丁质酶的菌株，其中CT14含几丁质酶活性最高，经对其细胞形态、菌落特征的观察和生化特性检测，证明该菌株是环状芽孢杆菌（Bacillus circulans）。其几丁质酶粗提液能抑制多种植物病原真菌的生长，表明它对植物病原真菌的拮抗作用具有广谱性。     

产几丁质酶菌的分离鉴定及其抑菌作用的初步研

从北京地区的土样、砂样和水样中分离并纯化了产生几丁质酶的菌株，其中CT14含几丁质酶活性最高，经对其细胞形态、菌落特征的观察和生化特性检测，证明该菌株是环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)。其几丁质酶粗提液能抑制多种植物病原真菌的生长，表明它对植物病原真菌的拮抗作用具有广谱性。     

快速、准确鉴别产几丁质酶菌株的新方法

使用几丁质平板法筛选具有几丁质酶活性的细菌时,由于几丁质平板本身趋于透明,而降解环也为透明色,不易观察到明显的抑菌圈,故在筛选几丁质降解菌时,其观察结果受人为因素影响较大。本文首次使用刚果红染色的方法,对几丁质平板进行染色,降解环为浅红色,而未降解部分为深红色;结果表明,降解环的直径大小随着接种时间的延长而逐步增大,且降解环的大小可反映酶活大小。因此,此法可以直观、清晰、准确地对具有几丁质酶活性的菌株进行筛选,在相关菌株的筛选中具有较大的潜在应用价值。     

具分泌几丁质酶活性的生防细菌的筛选鉴定及其几丁质酶基因的克隆和表达

 本研究通过平板透明圈法筛选获得一株具有几丁质酶活性的生防细菌CAB-1,该菌株对番茄灰霉病菌等多种病原真菌表现较强的拮抗活性。通过生理生化、16S rDNA和gyrB基因序列测定,将菌株CAB-1鉴定为萎缩芽胞杆菌（Bacillus atrophaeus）。对菌株CAB-1全基因组序列进行分析和功能预测,发现该菌株存在2个几丁质酶编码基因chit1和chit2。通过PCR技术从菌株CAB-1中克隆出这两个几丁质酶的编码基因并在大肠杆菌中表达,其原核表达产物均表现几丁质酶活性,其中chit1的原核表达产物能够显著抑制灰霉菌分生孢子的萌发。对其原核表达条件进行优化,发现在30℃下振荡培养24 h,IPTG浓度为0.2~1.0 mmol/L时,其蛋白表达量最高。     

芒果主要病原菌拮抗微生物的分离筛选

研究了19株拮抗菌对芒果炭疽病菌和蒂腐病菌的拮抗作用,其中以X-98-2对2种病原菌拮抗作用最强,其发酵液可大大降低芒果炭疽病和蒂腐病的发病率,提高芒果贮藏期的果品质量,经初步鉴定该菌为芽孢杆菌属。采用GC／MS对其发酵上清液分析表明,其抑菌活性成分为氨基糖苷类抗生素。     

作物根际和叶围中产几丁质酶微生物的分布及其抑制真菌作用

从几十种作物的根际和叶围分离获得３５０株微生物，其中细菌和放线菌分别为２００株和１５０株。对所有这些分离物进行了抑制真菌试验和几丁质酶活性测定。在抑菌试验中，以棉花枯萎病菌、棉花黄萎病菌、黄瓜枯萎病菌，及西瓜枯萎病菌作为供试病原菌，有９６个分离物对其中的一种或一种以上的病原菌有抑制作用，其中１８个分离物对这４种病原菌都具有强烈的抑制作用。在几丁质酶活性方面，１０％的细菌和４０％的放线菌都能不同程度地产生几丁质酶。有些菌株几丁质酶活性强，抑菌作用也明显，有些菌株几丁质酶活性弱，抑菌作用弱或无作用，少数菌株几丁质酶活性强，但却无抑菌作用。用几丁质酶液处理病原菌孢子，其萌发率和芽管长度比对照显著降低     

作物根际和叶围中产几丁质酶微生物的分布及其抑制真菌作用

从几十种作物的根际和叶围分离获得３５０株微生物，其中细菌和放线菌分别为２００株和１５０株，对所有这些分离物进行了抑制真菌试验和几丁质酶活性测定。在抑菌试验中，以棉花枯萎病菌、棉花黄萎病菌、黄瓜枯萎病菌，及西瓜枯萎病菌作为供试病原菌，有９６个分离物对其中的一种或一种以上的病原菌有抑制作用，其中１８个分离物对这４种病原菌都具有强烈的抑制作用，在几丁质酶活性方面１０％的细菌和４０％的放线菌都能不同程度地     

可降解水体中烟嘧磺隆微生物的分离与筛选

为了筛选出可降解烟嘧磺隆的微生物,利用富集培养技术从水样中分离得到了5株能以烟嘧磺隆为唯一氮源、碳源和能源的微生物,分别编号为YF1、YB1、YB2、YB3和YB4,其中YF1为真菌,其余均为细菌。将所得菌株定量接种于含不同浓度烟嘧磺隆的培养基中,于30℃、150 r/min摇床上振荡培养5 d后,利用HPLC检测烟嘧磺隆含量,计算降解率。结果发现:这些菌株对低浓度烟嘧磺隆的降解率显著高于对高浓度烟嘧磺隆的降解率,当培养基中烟嘧磺隆的含量为2 mg/kg 时,YF1对该药剂的降解率最高,为80.31 %,其次是YB1和YB2,降解率分别为 78.18% 和73.72%,而YB3和YB4对药剂的降解率只有36.82 %和25.75 %。对3株降解率较高的菌株进行了初步鉴定,发现YF1为黑曲霉Aspergillus niger,YB1和YB2均为芽孢杆菌Bacillus sp.。     

一株产几丁质酶、抑真菌的侧孢芽孢杆菌

从524株芽孢杆菌中筛选出一株几丁质酶活力高的侧孢芽孢杆菌1.864菌株。研究表明该菌对小麦赤霉菌等6种病原真菌具有明显的抑制作用。通过几丁质酶抑制剂以及酶活力变化对抑制真菌活性的相关研究,初步认为该菌株的抑菌物质为几丁质酶。生物测定表明1.864的几丁质酶粗酶对蚊幼具有较高的活性,同时对Bt制剂杀虫活性具有明显的增效作用。     

荒漠草原地区生物结皮的微生物群落与产漆酶细菌分离纯化

为了解生物结皮的微生物组成及影响碳素循环的微生物,文中在采用高通量技术研究西夏王陵生物结皮的微生物群落结构的基础上,采用选择培养基从生物结皮中分离产漆酶的微生物。研究结果表明:细菌的多样性显著高于真菌;变形菌门、酸杆菌门、蓝细菌门、放线菌门、拟杆菌门是绝对优势的细菌门类,子囊菌门和担子菌门是绝对优势的真菌门类;微鞘藻属、藓杆菌属、鞘氨醇单胞菌属、甲基杆菌属在细菌中占比较大的属,链格孢属、菌刺孢属、热子囊菌属、亚脐菇属等是主要的真菌,这些类群在稳定生物结皮结构、碳氮循环、有机物代谢等方面发挥了重要作用。以愈创木酚为唯一碳源从生物结皮中获得能利用愈创木酚的细菌10株,基于丁香醛联氮氧化的颜色反应,筛选出产漆酶能力最强的菌株C01和C06,基于16S rDNA序列的分子鉴定表明,两菌株均为芽孢杆菌。     

防治杨树溃疡病内生菌的分离筛选及鉴定

为筛选到对杨树溃疡病有良好生防效果的拮抗菌,采用平板对峙法初筛、发酵液“三明治”法和改良琼脂扩散法复筛,以及离体组织试验对杨树不同部位组织的内生菌进行了分离筛选,并对目的菌株进行了防治效果测定;采用形态学观察和ITS序列及其系统发育树分析对其进行初步鉴定。结果表明从115株杨树内生菌中筛选出有拮抗效果的菌株24株,并复筛出拮抗效果良好的菌株5株,最终从杨树内生菌中筛选出1株杨树溃疡病拮抗真菌,编号为YGF9,其对杨树离体组织溃疡病防治效果可达76.47%,初步鉴定该菌株为黄绿木霉Trichoderma aureoviride。表明菌株YGF9可有效抑制杨树溃疡病病原菌的生长,是防治杨树溃疡病的潜在生防菌株。     

Recent progress of highly efficient in vivo biological screening for novel agrochemicals in China

This paper describes the recent progress of in vivo biological screening for pesticides in China. According to the criteria, including the severity of damage caused by pests and the economic value of the crops, the investigated insects, pathogens, herbs and other species in the agricultural field were selected as the main screening targets for pesticides. Corresponding in vivo microscreening methods have been established and applied in the pesticide screening procedure, which has higher reproducibility, a shorter time and greater efficiency that offset the drawbacks of conventional methods for pesticide screening. Copyright © 2009 Society of Chemical Industry     

土壤拮抗放线菌的分离及其抗菌活性筛选

以常见植物病原真菌和细菌为指示菌,从分离的422株放线菌中筛选出28株可代谢抗细菌活性物质的菌株,其中N331、N393菌株发酵液对供试12种真菌有显著的抑制作用。离体条件下,N331、N393菌株发酵液对供试真菌菌丝生长的抑制中浓度(EC50)均小于15 mL/L;对玉米弯孢病菌、棉花枯萎病菌、小麦根腐病菌、黄瓜霜霉病菌孢子萌发的EC₅₀亦小于15 mL/L。盆栽试验结果表明,N331、N393菌株发酵原液对黄瓜霜霉病的保护效果分别为97.4%和85.6%,治疗效果分别为83.3%和59.3%。     

粉红螺旋聚孢霉高效生防菌株的筛选与评价

粉红螺旋聚孢霉Clonostachys rosea是一种重要的植物病原生防真菌。本研究测定了不同地理来源的42株粉红螺旋聚孢霉菌株对核盘菌Sclerotinia sclerotiorum菌核的寄生能力,以及菌株几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性,同时测定了不同菌株对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea的拮抗作用以及对番茄果实灰霉病的防治效果。结果表明,不同来源的粉红螺旋聚孢霉菌株对核盘菌菌核均有一定的寄生能力,45.2%的菌株寄生能力达到4级,β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性与其寄生能力呈极显著正相关。研究发现,粉红螺旋聚孢霉菌株对番茄灰霉病菌有一定的拮抗作用,抑制率最高可达78.4%;HN-56、STG-21-1、GS6-1等菌株对离体番茄果实灰霉病的防效达到75%以上,显示出良好的生防潜力。本研究为丰富植物真菌病害生防资源和高效粉红螺旋聚孢霉生防制剂的研发奠定了基础。     

咪唑乙烟酸高效降解菌降解性能的研究

研究了丙酸杆菌属（Propionibacterium）、海球菌属（Marinococcus）和酸单胞杆菌属（Acidomonas）单一菌株和混合菌株对咪唑烟酸的降解能力及环境条件对降解活性的影响。结果表明,混合菌株处理的咪唑乙烟酸,在第90天时的降解率高达87.20％,明显优于单一菌株。此外,外界环境条件对降解菌的活性也有显著的影响,在培养温度为25～30 ℃,土壤湿度为田间最大持水量的50%,咪唑乙烟酸残留浓度为100 μg/kg,最佳接菌量为5 mL/kg时,3株降解菌的降解活性最强,对咪唑乙烟酸的降解率最高。     

溴氰菊酯降解菌的分离筛选与应用潜力评价

为解决杀虫剂溴氰菊酯的残留污染问题及丰富其降解菌资源库,采用富集培养法,从长期被溴氰菊酯污染的土壤中分离筛选到1株高效降解菌株XQ08,经形态学特征、生理生化及16S rDNA鉴定其为嗜麦芽寡养单胞菌Stenotrophomonas maltophilia,并对菌株发酵条件、菌剂制备方法及应用潜力进行了初步研究。结果表明:在纯培养条件下,XQ08菌株5 d内对50 mg/L溴氰菊酯的降解率可达66.76%;在35 ℃、pH=8及以麦芽糖为碳源、氯化铵为氮源的条件下可获得理想的发酵效果,同时明确了XQ08液体菌剂的制备方法。分别在室内盆栽与田间种植的香菜上喷施高剂量 (推荐剂量10倍,有效成分6.25 g/hm2) 的25 g/L溴氰菊酯乳油,于施药后2、24和48 h施用XQ08菌剂,3、5、7和9 d后,香菜上溴氰菊酯的降解率分别超过20%、50%、60%及70%;7 d后施用菌剂处理组溴氰菊酯残留量均低于0.5 mg/kg,9 d后残留量均低于0.2 mg/kg。本研究首次报道了嗜麦芽寡养单胞菌对溴氰菊酯的降解,发现其XQ08菌剂可有效促进溴氰菊酯的降解,且其降解符合一级动力学特征。嗜麦芽寡养单胞菌XQ08菌株能有效降低或清除蔬菜上的溴氰菊酯残留,具有较好的应用潜力和开发价值。     

番茄内生细菌的分离及拮抗菌株的筛选

生物防治以其安全、高效及无污染等特点已经成为植物病害防治的重要途径。植物内生细菌在植物体内具有稳定的生存空间、不易受外界环境的影响等特点,近年来受到广泛关注[1]。番茄灰霉病和叶霉病是番茄重要病害,多年来一直依赖化学药剂防治。据报道,这两种病害的生防菌株主要是从土壤中分离的,与植物内生细菌相比,这些“外来”微生物在与植物根际土壤中大量习居微生物的竞争中难以占居优势,田间防治效果大多不明显甚至无效。作者从健康番茄植株体内分离内生细菌,筛选出对灰霉病菌和叶霉病菌有拮抗作用的菌株,以期探索新的生物防治途径。1材料…     

杏采后病害病原拮抗菌的分离筛选及鉴定

针对杏采后主要病害病原菌细交链孢(Alternaria tenuis Nees)和灰葡萄孢(Botrytis cinerea Pers.ex Fr.)进行拮抗菌的分离筛选及鉴定,分别采用组织分离法、表面分离法和土壤稀释分离法从杏果实、叶片及根围土壤中进行了分离并采用离体和活体筛选,对拮抗效果好的菌株JK-14和JK-11进行形态学、生理生化及分子生物学鉴定.共分离到14株对这两种病原菌都具有抑制效果的菌株,占分离总数的13.5％,离体筛选结果表明:JK-14和JK-11能明显抑制病原菌的菌丝生长,对细交链孢和灰葡萄孢的抑制效果R分别为0.74和0.68,0.74和0.73.活体筛选结果表明,JK-14和JK-11对杏采后黑斑病和灰霉病的防治效果显著,处理果实的发病率和病斑直径明显小于对照.经鉴定,JK-14和JK-11分属芽胞杆菌属(Bacillus)和类芽胞杆菌属(Paenibacillus).     

Isolation and characterization of efficient isoxaben-transforming Microbacterium sp strains from four European soils

Nutrient-agar plates containing isoxaben (500 mg litre(-1)) were used to isolate isoxaben-metabolising bacteria from four European soils incubated with the herbicide under laboratory conditions. In flask experiments, inoculation of a basal salts medium containing nitrogen and [phenyl-U-14C]isoxaben with an isolate (B2b) resulted in 33% recovery of the initial radioactivity as [14C]carbon dioxide after 2 weeks. A major metabolite identified by GC-MS and NMR analysis as 3-(1-ethyl-1-methylpropyl)isoxazol-5-ylamine accumulated both in basal salts and nutrient broth media. 2,6-Dimethoxybenzoic acid, a suspected metabolite of isoxaben, was not detected in either liquid media. However, the capability of the B2b isolate to use 2,6-dimethoxybenzoic acid as a source of carbon was demonstrated. Soil inoculation with the B2b strain resulted in an increase in the recovery of [14C] carbon dioxide from both [phenyl-U-14C] and [isoxazole-5-14C]isoxaben. The metabolite identified as 3-(1-ethyl-1-methylpropyl)isoxazole-5-ylamine only accumulated if the soil was autoclaved before inoculation. This metabolite was rapidly mineralized by the microflora of a natural soil without history of isoxaben treatment. Homology patterns of sequenced 16S rDNA between isoxaben-transforming isolates and reference strains showed that the four isolates identified belonged to the genus Microbacterium.