虫草核苷类成分的提取方法

该研究筛选出1种提取虫草核苷类成分的方法。采用高效液相色谱法,流动相为10%甲醇溶液,流速为1 mL·min~(-1),检测波长260 nm,进样量10μL,测定不同提取溶剂和提取条件制备供试液中尿嘧啶、尿苷、2’-脱氧尿苷、肌苷、鸟苷、腺嘌呤、胸苷、腺苷、2’-脱氧腺苷和虫草素含量。结果表明,当提取溶剂为20%甲醇溶液,提取方法为超声处理,提取时间为90 min,提取次数为3次,虫草样品中核苷类成分可被充分提取。该方法适用于虫草水溶性核苷类成分供试液的制备,为准确测定虫草类真菌样品水溶性核苷类成分提供了依据。     

不同储存时间对蛹虫草中化学成分含量的影响

以蛹虫草为试材,研究了不同储存时间对新鲜蛹虫草中多糖、虫草酸、总黄酮及7种核苷类成分含量的影响。结果表明:随着处理时间的递增,蛹虫草颜色由橙黄色变为暗黄色,最终变为黑色;气味由菌香味变为腐烂臭味;储存时间对新鲜蛹虫草中化学成分含量影响明显,其中的化学成分变化规律为多糖含量先下降后升高,而总黄酮含量则是先升高后降低,虫草酸含量变化为逐步下降;尿嘧啶和腺嘌呤含量逐渐升高,与之相反,腺苷、虫草素和鸟苷含量则是逐渐降低,尿苷和肌苷含量先升高后降低。三次曲线方程可用于描述新鲜蛹虫草中化学成分含量与储存时间的变化关系。多糖、虫草酸、尿嘧啶、腺嘌呤、腺苷和虫草素等指标,可用于新鲜蛹虫草质量控制。     

人工培养蛹虫草核苷类HPLC指纹图谱的建立

建立了蛹虫草(Cordyceps militaris)核苷类高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的分析方法,采集10批不同产地人工培养蛹虫草HPLC图谱,运用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版"软件建立人工蛹虫草标准图谱并以该模式为参照,计算10批不同产地蛹虫草之间的相似度。结果表明:方法的稳定性、精密度、重现性符合方法学要求;建立的核苷类HPLC指纹图谱共得到10个共有峰,并对确认了虫草素和腺苷峰这两个特征峰,各样品图谱与标准指纹图谱的相似度均在0.9以上。     

产不同色素古尼拟青霉菌株功效成分分析

为比较产不同色素古尼拟青霉菌株菌丝体功效成分的差异，本研究对产不同色素古尼拟青霉菌株及对应古尼虫草样品进行试验分析。观察其菌落形态和菌落颜色；用紫外分光光度法测定多糖和D-甘露醇含量；用HPLC法测定虫草素、腺苷、肌苷、胸苷、鸟苷、尿苷6种核苷类成分含量。结果显示，菌落背面绿色的菌株pgjt03，腺苷含量是古尼虫草样品YHCGGB0145的6倍，且虫草素、胸苷、鸟苷、尿苷含量也均达到最高，与它对应的古尼虫草样品YH—CGJT0148虫草素、腺苷、鸟苷、尿苷含量均高于其它古尼虫草；而菌落背面浅灰色的菌株pNt01，核苷类成分含量均低于其他菌株。说明古尼拟青霉产色素与功效成分之间有一定的相关性，古尼拟青霉所产色素颜色越深，功效成分的含量相对越高。通过该研究指出，菌落颜色可作为筛选古尼拟青霉菌株高产功效成分的标志之一，且菌落背面绿色的菌株pgit03，性状优良，生长较快，可作为潜在的生产菌株。     

罗伯茨虫草及其无性型活性成分分析

以10株野生罗伯茨虫草及其无性型罗伯茨被毛孢液体发酵菌丝体为研究对象,采用比色法和高效液相色谱法（HPLC）分别测定其多糖、甘露醇、尿嘧啶、尿苷、鸟苷、腺嘌呤、腺苷及虫草素等活性成分含量,并与西藏那曲野生冬虫夏草作比较。结果表明,罗伯茨虫草尿嘧啶含量高于冬虫夏草,尿苷、鸟苷、腺嘌呤、腺苷含量与冬虫夏草接近,而多糖和虫草素含量与冬虫夏草差距较大。在10株罗伯茨被毛孢中,菌株HRT06的多糖、尿苷、鸟苷及腺苷含量最高,与其余菌株有显著性差异（p〈0.05）,且菌株HRT06的腺苷含量为0.140 mg·g-1,达到中国药典冬虫夏草腺苷含量不得少于0.100 mg·g-1的规定,可以筛选作为优良菌株加以利用。本研究测定罗伯茨虫草及其无性型罗伯茨被毛孢活性成分含量,为综合评价罗伯茨虫草应用价值及其开发利用提供科学依据。     

高效液相色谱结合DA方法对3种虫草的分类研究

利用高效液相色谱测定冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)、柞蚕蛹虫草(Cordyceps militaris)、蛹虫草(Cordyceps militaris)子实体中的尿苷、鸟苷、胸苷、腺苷、虫草素含量和共有特征峰值,并依据他们共有的13个特征峰值对这3类虫草的21个样品建立判别分析模型(discrimant analysis,DA),同时以3个虫草样品对该模型进行判别验证。结果显示,DA方法对3种虫草的判别分类效果良好。表明高效液相色谱法结合SPSS的DA判别分析方法可以作为这3种虫草分析鉴别的新方法。     

鲜蛹虫草与干蛹虫草抗氧化活性和活性物质差异研究

为阐明鲜蛹虫草和干蛹虫草抗氧化活性差异,分别对鲜蛹虫草和干蛹虫草的DPPH自由基清除能力、铜离子还原能力、羟基自由基清除能力和Trolox等效抗氧化活性进行研究,并对其主要活性物质多糖、腺苷、虫草素、总酚、总黄酮和超氧化物歧化酶进行了分析。结果表明,鲜蛹虫草对DPPH自由基清除能力、铜离子还原能力、羟基自由基清除能力均高于干蛹虫草;鲜蛹虫草中腺苷和虫草素含量分别为1.35 mg·g~(-1)和6.71 mg·g~(-1),与干蛹虫草相比差异不显著。鲜蛹虫草中多糖、总酚和总黄酮含量分别为57.4 mg·g~(-1)、87.56 mg·g~(-1)和182.24mg·g~(-1),超氧化物歧化酶总活力为50 265.5 U,均高于其干品。Trolox等效抗氧化活性分析表明,鲜蛹虫草中多糖、超氧化物歧化酶活性、总酚和总黄酮均高于其干品。因此鲜蛹虫草较干品具有更优的开发价值。     

氮源和无机盐对蛹虫草子座产量及虫草素和腺苷的影响

以小麦为主要栽培基质,通过添加不同的氮源和无机盐,选用优质蛹虫草菌株CM-16进行人工培养,探索这2个因素对蛹虫草子座产量及虫草素和腺苷的影响。结果表明:栽培过程中选用6g·L~(-1)的蛋白胨作为最佳氮源,子座干样质量、虫草素和腺苷的生成量均较高,分别为43.1g·盒~(-1)、3.95mg·g-1和2.35mg·g~(-1)。无机盐则选择1.0mg·L~(-1)的硫酸亚铁最为合适,此时子座干样质量、虫草素和腺苷的生成量分别为48.8g·盒~(-1)、4.98mg·g~(-1)和2.10mg·g~(-1)。     

知识窗

正虫草素(cordycepin)又称冬虫夏草素、虫草菌素、蛹虫草菌素,是冬虫夏草和蛹虫草中(尤其是核苷类)主要活性成分,也是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗生素。虫草素是一种天然来源的药物,具有中医医理中冬虫夏草一样的阴阳同补和双向调节人体平衡的功能;它在护肝、保肾、润肺方面效果更好,而且大补气血,     

蛹虫草活性成分的测定

分别用薄层层析法和高碘酸氧化法测定了蛹虫草(Cordyceps militaris)、冬虫夏草(C.Sinensis)及其发酵菌丝中腺苷和甘露醇的含量。结果证明,蛹虫草Y3菌株发酵菌丝的甘露醇含量达16.04％,明显高于天然蛹虫草。不同来源的蛹虫草的腺苷含量相近,为1.4％左右。刚联苯三酚自氧化法测定了蛹虫草的SOD)活性,人工栽培的蛹虫草SOD)活性最高,为1882U/mgPr。上述结果表明,蛹虫草具有和冬虫夏草相似的药效成分,有重要的开发应用价值。     

人工蛹虫草子实体及大米培养基残基中虫草素的提取纯化方法

本实验主要对人工蛹虫草子实体及培养基中虫草素(3‘-脱氧腺嘌呤核苷)进行提取、纯化及纯度鉴定。结果表明：经过对蛹虫草子实体及培养基的粉碎、石油醚脱脂、80-85℃水浴12小时、调节等电点沉淀、732-NH4离子交换树脂的分离、浓缩、4℃下低温结晶，可得到一定纯度的虫草素晶体。     

硒和钙对蛹虫草活性物质含量的影响

向培养液中分别添加不同浓度的亚硒酸钠、氯化钙,用液体振荡培养法培养蛹虫草菌丝体,用HPLC法测定虫草素与腺苷含量,用苯酚-硫酸法测定多糖含量,用高碘酸钠比色法测定虫草酸含量.以研究2种微量元素对蛹虫草菌丝体中虫草素、腺苷、多糖和虫草酸含量的影响.结果表明:向培养液中添加适量的硒或钙,可显著提高蛹虫活性物质含量.添加15 mg/L亚硒酸钠,虫草素和虫草酸含量比对照组分别提高了29.0％和34.9％;添加16 mg/L氯化钙,虫草素含量比对照提高24.05％.     

灵芝孢子粉脂质成分HPLC-ELSD指纹图谱构建及含量测定

以16批（S1～S16）不同来源的灵芝（Ganoderma lucidum）孢子粉为材料，构建灵芝孢子粉脂质成分高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）指纹图谱，将S1～S16的HPLC-ELSD指纹图谱数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版），指认共有峰和评价相似度，采用HPLC-ELSD测定S1～S16中亚油酸、棕榈酸、油酸和麦角甾醇含量。结果表明：共指认4个共有峰，分别为亚油酸、棕榈酸、油酸和麦角甾醇；除S14外，其他15批灵芝孢子粉中脂质成分HPLC-ELSD指纹图谱相似度高，较为稳定；不同来源的灵芝孢子粉中亚油酸、棕榈酸和油酸的含量差异较大，麦角甾醇含量较为稳定。     

光照对蛹虫草子实体农艺性状及活性成分的影响

分别采用白光、紫光、蓝光、绿光、橙光、红光共6种光质,每种光质分别设250、500、750、1000 lx 4种光照强度,在蛹虫草(Cordyceps militaris)生殖生长阶段给予差异化处理,分析不同处理下蛹虫草的农艺性状及虫草素、腺苷含量。结果表明：绿光处理的蛹虫草子实体干重较大,且在750 lx光照强度下子实体干重达到最大值,为每瓶(5.21±0.23) g,较其他5种光质具有显著差异,但不同光照强度间并无显著差异。在高光照强度1000 lx蓝光下,蛹虫草的虫草素含量最高为(2.03±0.07) mg·g^-1,与其他5种光质具有显著性差异;在低光照强度250、500 lx下,紫光、绿光、橙光、红光对虫草素含量积累的影响大于蓝光。在不同光照强度下,橙光处理的蛹虫草子实体腺苷含量相对较高,为(2.52±0.03)～(2.72±0.15) mg·g^-1;光照强度为250 lx时,橙光处理的蛹虫草子实体腺苷含量显著高于其他5种光质的处理;相同光质不同光照强度的处理间,腺苷含量无显著性差异(除紫光外)。总体而言,光质对于蛹虫草子实体生长发育...     

不同光照强度对蛹虫草主要活性成分的影响规律

以优质蛹虫草菌株为试材,分别以不同光照强度对蛹虫草发菌、转色、原基分化、子实体生长等阶段进行单因子对照试验,比较不同阶段不同光照强度下的各蛹虫草试验组在蛋白质、多糖、虫草素、虫草酸等主要活性成分含量的差异及特点,探索蛹虫草不同生长阶段的适宜光照强度及规律。结果表明:蛹虫草发菌、转色、原基分化、子实体生长等阶段的光照强度分别约为0~10、500~200、200~500、300~500lx时,蛹虫草主要活性成分含量相对较高。说明不同生长阶段不同光照强度对蛹虫草主要活性成分的合成和积累可产生明显影响,以各阶段相应适宜光照强度对蛹虫草进行栽培是保证和提高主要活性成分含量的重要措施之一。     

桑蚕蛹虫草高效栽培技术

蛹虫草(Cordyceps militaris),别称北虫草,与野生冬虫夏草同属肉座菌目(Hypocreales)[1]。蛹虫草在我国吉林省长白山以北地区以及辽宁、陕西、广西、福建、甘肃等地均有发现;国外主要分布在法国、德国、英国、美国以及加拿大等地。蛹虫草营养价值丰富,富含多种活性物质,如虫草素、虫草酸、多糖、多酚、氧化酶、腺苷等,在抑制肿瘤、抗疲劳、提高人体免疫力等方面起到重要作用[2,3]。通过对比分析蛹虫草与冬虫夏草的化学成分及营养价值,结果发现两者化学成分相近,而且蛹虫草的虫草素、硒元素、维生素等对人体有益成分含量高于传统冬虫夏草,可替代冬虫夏草进行生产和消费[4]。     

蛹虫草子实体中N6-(2-羟乙基)-腺苷的分离纯化及抗肿瘤作用

为明确蛹虫草(Cordyceps militaris)核苷类化合物HPLC图谱中未知峰化学成分,运用NKA-II大孔吸附树脂、C-18柱分离纯化和结晶等方法,从蛹虫草子实体水提物中得到了未知峰的结晶粉末,通过1 HNMR,13 CNMR、ESI-MS等波谱分析,鉴定出化合物为N6-(2-羟乙基)-腺苷。该化合物对K562肿瘤细胞具有抑制作用,半数抑制有效浓度为0.1μmol/mL。     

不同栽培温度对蛹虫草主要活性成分的影响

以优质蛹虫草菌株为试材,分别以12、16、20、24、28℃5种不同温度进行单因子对照试验,比较不同温度处理后蛹虫草蛋白质、多糖、虫草素、虫草酸含量等的变化,探索不同温度处理对蛹虫草主要活性成分的影响及规律。结果表明:蛹虫草发菌、转色、原基分化、子实体生长等主要生长阶段的培养温度分别为约20、24、24、16℃时,蛹虫草主要活性成分含量相对较高;栽培实际以约16~20、20~24、20~24、16~20℃为宜。说明实行变温管理是提高蛹虫草主要活性成分及产品质量的重要措施之一。     

不同接种物对蛹虫草子实体营养成分的影响

以蛹虫草菌株母种的表层菌皮、母种基内菌丝和成熟的待分离的新鲜子实体顶端接种到液体培养基进行液体培养,分析比较栽培所获得不同蛹虫草子实体的有效成分得出:以母种表层菌皮接种液体培养所获得的子实体虫草素和硒元素含量最高;以母种培养基的基内菌丝接种培养栽培所获得子实体的虫草酸、腺苷、虫草多糖、SOD酶、蛋氨酸、酪氨酸含量较高。     

基于牛蒡根的灵芝固体发酵菌质化学成分的初步分析

以牛蒡根为发酵基质,初步探究灵芝固体发酵所获菌质中多种化学成分的变化。利用可见分光光度计、高效液相色谱仪及定氮仪等测定了牛蒡根原药材和牛蒡根灵芝菌质中多糖、总三萜酸、总黄酮、核苷及蛋白质含量,并进行HPLC指纹图谱分析。牛蒡根经灵芝菌丝体发酵后,多糖含量由9.94%降低至2.76%,总三萜酸含量从无升高至0.14 mg·g^-1,总黄酮含量由3.47%降低至0.34%,4种核苷总量由861.05μg·g^-1升高到1 113.49μg·g^-1,且新合成了腺苷,蛋白质含量由13.38%升高至17.28%。HPLC指纹图谱显示牛蒡根在灵芝发酵前后化学成分差异较大。灵芝固体发酵使牛蒡根多糖和黄酮含量降低,核苷和蛋白质含量升高,并新产生三萜酸和腺苷,具有明显的生物转化作用。