云南绵羊感染吕氏泰勒虫的鉴定及其遗传进化分析

为了解云南高海拔地区绵羊泰勒虫的分型,从临床上出现焦虫可疑临床症状的绵羊养殖场采集病料,通过形态学和分子生物学相结合的方法对16份来自高海拔地区昭通永善县的绵羊血液样品进行检测。血液涂片染色后形态学检测结果表明,其中4份血液涂片的红细胞内虫体直径约0.5～1.5μm,呈圆点形、卵圆形或短杆状。血液样品DNA PCR扩增、焦虫18S序列比对及基于核糖体小亚基RNA(small subunit ribosamal RNA,SSU rRNA)基因位点分析结果表明,本次可疑送检绵羊的血液病原为吕氏泰勒虫,检测株与国内报道的感染株同源性为99.6%～100%,属同一亚型,未出现变异虫株。     

中国不同地区羊吕氏泰勒虫分子流行病学调查及遗传进化分析

为了解吕氏泰勒虫在中国不同地区山羊和绵羊中的流行情况,本研究应用基于吕氏泰勒虫18S rRNA基因位点的PCR检测方法,对采自中国河南、甘肃、陕西、山西、贵州、云南、新疆7个地区的281份羊血液样品进行检测,并对阳性样品测序以进行序列分析。结果显示,羊吕氏泰勒虫总感染率为35.23%（99/281）。不同采样点羊吕氏泰勒虫感染率差异极显著（P<0.01）,其中河南省羊吕氏泰勒虫感染率最高（98%,49/50）,新疆最低（0）。绵羊和山羊吕氏泰勒虫感染率分别为51.67%（31/60）和30.77%（68/221）,差异极显著（P<0.01）;放牧羊吕氏泰勒虫感染率（41.55%,86/207）极显著高于舍饲羊（17.57%,13/74）（P<0.01）;羊吕氏泰勒虫感染率在春、夏、秋及冬四季分别为56.00%（28/50）、42.75%（59/138）、9.43%（5/53）和17.50%（7/40）,差异极显著（P<0.01）;≥ 12月龄和<12月龄羊吕氏泰勒虫感染率分别为33.50%（67/200）和39.51%（32/81）,差异不显著（P>0.05）。此外,遗传进化分析表明,本研究获得的羊吕氏泰勒虫分离株与中国流行的吕氏泰勒虫分离株同源性高达99.60%以上,且位于同一分支上。本研究为进一步了解中国不同地区羊吕氏泰勒虫的流行现状及分布提供了重要参考依据。     

羊泰勒虫吉林株的鉴定及系统进化分析

为了解吉林省延边地区流行的羊泰勒虫种类,采用血涂片镜检和PCR方法对羊泰勒虫进行鉴定和遗传学分析。血涂片镜检观察发现,血涂片红细胞中存在圆形虫体。对羊泰勒虫MPSP基因生物信息学分析显示,MPSP编码的蛋白包含3个N-糖基化位点,14个潜在抗原表位,含有信号肽结构。建立系统进化树显示,分离到的3个虫株与Theileria luwenshunli(GQ281044)同源性为100%,亲缘关系较近,分离的羊泰勒虫为吕氏泰勒虫。由该试验结果可以得出,吉林省延边地区流行的羊泰勒虫为吕氏泰勒虫。     

山东省媒介蜱类种类鉴定及羊泰勒虫病流行病学调查

为了阐明山东省蜱类种类及羊泰勒虫病流行概况,于2012年3月-2013年11月采用形态学鉴定法鉴定收集的14 878只蜱类标本;采用梨形虫、泰勒科通用引物及种属特异性引物对617份羊血液样品进行PCR检测,并对阳性样品18SrRNA基因进行遗传进化分析;分析不同月份蜱类活动频率及羊泰勒虫感染率。结果显示山东省长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)和草原革蜱(Dermacentor nuttalli)所占比例分别为75.3%和24.7%,统计学分析显示长角血蜱显著多于草原革蜱(P0.05),为山东省优势蜱种。PCR检测结果显示山东省羊泰勒虫感染率为24.8%;其中吕氏泰勒虫感染率为12.0%、尤氏泰勒虫感染率为11.8%,混和感染率为5.3%,没有检测到绵阳泰勒虫感染,统计学分析显示吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫在羊群的感染率无统计学差异(P0.05),吕氏泰勒虫与尤氏泰勒虫单虫种感染率显著高于混合感染率(P0.05)。遗传进化分析显示山东省吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫与北京分离株分布于同一分支,而区别于西北地区和南方地区分离株,呈现区域聚集性;不同月份蜱类活动频率与羊泰勒虫感染率呈现季节相关性。上述结果表明山东省优势媒介蜱种为长角血蜱,羊泰勒虫感染虫种为吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫,感染率较高,且与媒介蜱类存在相关性,为山东省羊泰勒虫病防控提供科学实验依据。     

羊口疮病毒青海株的分子鉴定及其遗传进化分析

青海祁连地区某规模化养殖场羊群疑似感染羊口疮,为准确鉴定此地羊口疮病原并对流行毒株进行遗传变异研究,采集疑似羊口疮病毒感染的羊唇部结痂组织并进行PCR鉴定,对鉴定的3株ORFV毒株的抗原基因B2L和F1L及毒力基因VIR和GIF分别进行克隆、测序及遗传进化分析。从病料中鉴定出3株ORFV,并分别命名为ORFV1/Ovis/QL/Qinghai/2021/China、ORFV2/Ovis/QL/Qinghai/2021/China和ORFV3/Ovis/QL/Qinghai/2021/China。经分析显示,ORFV1、ORFV2和ORFV3的B2L、F1L、VIR和GIF与数据库中ORFV参考株的相应的基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为99.21%～97.27%和99.74%～97.35%、99.12%～95.41%和99.12%～92.69%、98.19%～95.29%和96.72%～91.26%、99.62%～95.21%和100.00%～93.96%。基于ORFV的4个基因遗传进化树分析表明,中国青海祁连ORFV毒株分别聚在中国株的进化分支上(B2L基因),印度毒株和中国毒株...     

羊泰勒虫病的诊治

羊泰勒梨形虫病有两种病原体 :一是山羊泰勒梨形虫 ,其引起的疾病一般呈恶性经过 ,死亡率高 ;另一种是绵羊泰勒梨形虫 ,其引起的疾病呈良性经过 ,死亡率低。两种病原体均能感染绵羊和山羊 ,且两者的病原体形态、大小相似。笔者曾遇见过两起羊泰勒梨形虫病 ,报告如下。1　发病情况　我市东旧寨温某饲养 6 5只绵羊 ,2 0 0 0年 4月 1 0日开始发病 ,畜主曾用青霉素治疗无效 ,到 5月 6日发病 2 3只 ,死亡 7只 ,发病率为3 4 % ,死亡率为 2 .3 %。后经我化验室确诊为羊泰勒梨形虫病 ,即用贝尼尔、速灭沙星及樟脑溶液等药物治疗 ,控制了病情2　临床…     

羊泰勒虫病的诊治

对一例羊泰勒虫病的发病情况、临床症状、剖检病变、实验室诊断及治疗情况进行了介绍,供养殖户参考。     

甘南地区羊泰勒虫的分离与形态学观察

羊泰勒虫病 ( sheep theileriasis)是由媒介蜱传播的绵羊、山羊的一种血液原虫病。羊泰勒虫分布很广。原苏联、印度、斯里兰卡 ,以及非洲等地就报道此病的流行。我国的四川、青海、甘肃、辽宁等地均有本病的发生。罗建勋等人的调查研究发现 ,甘肃 1 2个地区的 35个县都有此病。其中临潭县的羊感染率达到 40 .0 % ,且羔羊病死率在 5 5 .0 %左右。同时 ,研究还发现不同地区的羊泰勒虫致病力不同。笔者为了更进一步证明临潭县羊泰勒虫及媒介蜱的存在 ,特进行了动物感染试验和病原形态学观察。1　材料与方法1 .1　动物　 2 0 0 4号到 2 0 1 7号…     

牛泰勒虫的分离鉴定及进化分析

牛泰勒虫病是严重危害养牛业可持续发展的血液原虫病,本试验采用血涂片镜检和特异性PCR检测技术,对中国某种牛场的18份血样进行了泰勒虫检测,然后分别用ITS基因通用引物和4种MPSP等位基因特异性引物自阳性样品中扩增出对应的基因,克隆测序后,进行序列比对和进化分析,确定泰勒虫基因型。结果显示,自18份牛血样中检出3份阳性样品,且全为瑟氏泰勒虫感染;3个阳性样品的瑟氏泰勒虫MPSP等位基因扩增结果显示,1个阳性样品为I (Ikeda) 和C (Chitose)型的混合感染,另2个样品为I型单一感染,而均无B (Buffeli)和Thai型;用扩增的MPSP基因测序,构建进化树,确认其感染的瑟氏泰勒虫存在MPSP 1型和2型。这些结果表明,该种牛场存在瑟氏泰勒虫感染,且同时存在2种MPSP等位基因型;MPSP等位基因的复杂性可能使该病的免疫防控更加困难。本试验结果为深入研究瑟氏泰勒虫感染情况及免疫防控提供了数据支持,并为养防一体做好监控。     

陕北黑山羊隐孢子虫种类鉴定及遗传进化分析

为了阐明陕北黑山羊隐孢子虫(Cryptosporidium)的感染情况、种类及其遗传进化关系,本研究利用形态学和分子生物学方法,分析了107份不同年龄段黑山羊粪便样品中的隐孢子虫的感染状况、种类以及遗传进化关系。结果发现,黑山羊存在隐孢子虫感染,感染率为14%(15/107)。序列比对分析表明,7份阳性样品为牛隐孢子虫(C.bovis)感染,6份为肖氏隐孢子虫(C.xiaoi)感染,2份为C.bovis和C.xiaoi混合感染。系统进化树显示9个分离株与C.bovis位于同一分支,而与C.xiao位于同1个分支的有8个分离株。结果为陕北黑山羊乃至其他山羊的隐孢子虫病分子流行病学研究及防控提供了理论基础。     

山羊化脓隐秘杆菌分离鉴定及其神经氨酸酶遗传进化分析

为确诊重庆涪陵地区一山羊养殖场发生山羊皮下脓肿的病原,采集病料分离病原、进行药敏试验。通过生化试验和16S rRNA分子方法鉴定病原菌;PCR扩增分离株的神经氨酸酶基因(neuraminidase,NA),并利用细菌神经氨酸酶的隐马尔科夫模型(Pfam编号为PF13088)搜索自建的本地蛋白质组数据库,通过MEGA7.0构建系统进化树,从而分析神经氨酸酶基因在脊椎动物、寄生虫、真菌、细菌和病毒中的遗传进化特征,并利用PredictProtein进行分离株神经氨酸酶的点突变分析。结果表明,分离株的16S rRNA基因与JQ975932.1(中国新疆)株化脓隐秘杆菌序列同源性高达99.7%,结合生化特性确诊分离株为化脓隐秘杆菌;利用模型进行检索,共检索到214条神经氨酸酶氨基酸序列。神经氨酸酶遗传系统进化树显示,细菌神经氨酸酶主要集中在放线菌门中,脊椎动物的神经氨酸酶主要聚集在GroupⅠ和GroupⅡ,寄生虫的神经氨酸酶主要集中于GroupⅠ,真菌神经氨酸酶分布较广,存在GroupⅠ、GroupⅡ以及GroupⅣ中,而病毒神经氨酸酶主要分布于GroupⅠ和GroupⅡ。点突变分析表明,细菌神经氨酸酶不同位点的氨基酸突变对神经氨酸酶功能的影响不同。     

陕西绵羊源蛔虫的鉴定

为了鉴定分离自陕西咸阳地区绵羊小肠内的蛔虫,本试验对其雌雄虫的形态学指标进行了观察和测定,并提取其基因组DNA,对其内转录间隔区(internal transcribedspacer,ITS)进行了分析。结果显示,形态学符合羊蛔虫的基本特征;雌雄虫的ITS序列长度分别为881,883bp,陕西绵羊源蛔虫与猪蛔虫(GenBank登录号:AB571302)的ITS1序列差异(0.4%)小于绵羊源蛔虫种内差异(0.9%),ITS2在种内和种间均无差异;基于ITS1和ITS2序列构建的遗传进化树显示,绵羊源蛔虫与猪蛔虫、人蛔虫聚于一支。结果表明,绵羊源蛔虫与猪蛔虫可能是同一个种。     

蜱传斑点热群立克次体青海分离株分离与遗传进化分析

根据已发表斑点热群立克次体外膜蛋白OmpA基因序列设计特异性引物,对青海省采集的蜱标本进行PCR检测,并对阳性样本进行测序和序列分析,建立分子系统进化树。结果显示在454个蜱样本池中检测到14个SFGR阳性样本,其中9个西伯利亚立克次体阳性样本和5个黑龙江立克次体阳性样本,总感染率3.08%。序列分析结果显示,西伯利亚立克次体青海株HUN与与黑龙江立克次体虎林株HL-93(AF179364)、绥芬株HLJ-054(AF179362)共处一个分支,一致性分别为99.18%和99.51%;黑龙江立克次体青海株GL-1与西伯利亚立克次体前苏联株246(U43807)和北京株BJ-90(AF179365)同处一个分支,序列一致性分别为99.49%和99.67%。说明青海省存在SFGR感染,应尽快制定防控措施,以免危害动物及人类健康。     

牛瑟氏泰勒虫HSP70 cDNA片段的克隆与系统发育分析

从血液涂片检查为牛瑟氏泰勒虫阳性的病牛血液中提取总RNA,通过RT-PCR技术扩增出牛瑟氏泰勒虫HSP70基因,将其重组到pMD-18TSimple载体后进行克隆、序列测定及分析。结果表明该片段长1 966 bp,编码620个氨基酸残基,将该基因片段序列与GenBank中13种已知梨形虫的相应序列进行比较分析,牛瑟氏泰勒虫吉林分离株与已报道的牛瑟氏泰勒虫亲缘关系最近,其次是环形泰勒虫,与马巴贝斯虫亲缘关系较远。     

牛瑟氏泰勒虫吉林株ITS基因的克隆与系统进化分析

本研究根据GenBank上的牛瑟氏泰勒虫内转录间隔区基因(ITS基因)设计合成1对特异性引物,以采自吉林省珲春市某养牛场的血液样本为试验材料,PCR扩增牛瑟氏泰勒虫ITS基因,克隆至pMD-18T Simple载体,进行序列测定,将该基因序列与GenBank上9种已知的泰勒虫相应序列进行比较分析,建立系统进化树。结果表明:牛瑟氏泰勒虫吉林株与美国株亲缘关系较近,其次是水牛泰勒虫,与其他泰勒虫亲缘关系较远。     

吕氏泰勒虫主要表面蛋白P32基因的克隆与序列分析

从吕氏泰勒虫宁县株中提取RNA,用RT-PCR方法扩增主要表面蛋白P32基因的cDNA片段,克隆后测定其核苷酸序列,并推导了相应的氨基酸序列。结果表明,扩增的P32基因长度为875个核苷酸,共编码284个氨基酸。核苷酸序列与已发表的牛的4种泰勒虫的主要表面蛋白基因相比较,其与瑟氏泰勒虫俄罗斯株、日本株、中国辽阳株的核苷酸和氨基酸序列相似性均在98.9%以上。其推导的氨基酸序列中有3个糖基化位点。     

套式PCR扩增山羊吕氏泰勒虫18S rRNA基因

泰勒虫是一种危害动物的重要血液寄生性原虫,常寄生于牛、羊、骆驼和其他野生动物,在中国的东北、西北等地较为流行。采集安徽定远县某山羊场疑似焦虫病的山羊血样,首先采用血涂片法检查,再用Blood DNA&Tissue kit提取血液基因组,参照Kim和Wei的方法设计2对引物用于泰勒虫18S rRNA基因的扩增,并对该方法进行敏感性和特异性分析。结果显示:血涂片检查明显可见红细胞内有典型的虫体,大小为0.6~2μm,初步怀疑为泰勒虫(Theileria);PCR扩增可扩增出359 bp大小目的片段,与预期结果相一致;基因序列同源性表明,该泰勒虫分离株基因与已报道泰勒虫毒株(JQ926740.1)核苷酸同源性最高,可达99.72%;在遗传进化方面,所分离的泰勒虫和吕氏泰勒虫(Theileria luwenshuni)Nanjingdong(JQ926740.1)最接近,而且在一个分支上。本试验所建立的套式PCR具有良好的特异性,且敏感性较高,最低测出量是3.8 fg/μL。本次分离的羊血液原虫为吕氏泰勒虫。     

羊口疮病毒广东大浦株的分离鉴定及其遗传进化分析

对广东大浦发生的羊口疮病例进行了病毒的分离、鉴定及011基因和059基因的遗传演化分析。结果表明,利用胚胎羊鼻甲细胞成功的分离到了羊口疮病毒GDDP株,扩增了GDDP株ORFV的011基因和059基因,该毒株的011基因和059基因与福建和新疆流行的毒株具有密切的亲缘关系,可能为这些流行毒株的重组毒株,这也进一步证明了广东省羊口疮流行的复杂性。鉴于广东养羊业发展迅速,因此有必要开展更为深入的流行病学调查,为防控广东省的羊口疮奠定基础。