核桃枝枯病小新壳梭孢巢式PCR检测方法的建立

近年来,小新壳梭孢Neofusicoccum parvum导致的核桃枝枯病屡有报道,该病防治困难,发病率高,是核桃的一种灾难性病害。为建立N.parvum的快速、灵敏的分子检测体系,根据N.parvum的几丁质合酶1基因(CHS1)及其前后100bp序列,分别设计了两对特异性引物CT-WK3-S/CT-WK3-A和CT-N-S/CT-N-A,建立了N.parvum的巢式PCR检测方法。结果表明,建立的体系可以从不同来源的5个N.parvum菌株中特异性地扩增出97bp的目的条带,灵敏度达30fg/μL,是常规PCR的10倍,而从其近缘种葡萄座腔菌属Botryosphaeriasp.的病原菌及其他供试菌株均未扩增出任何条带。以感染N.parvum的核桃组织总DNA为模板进行检测,可以在发病早期检测出N.parvum的存在。本研究建立的巢式PCR体系可以为核桃枝枯病的田间检测提供思路。     

厚皮香枯梢病病原菌鉴定

厚皮香枯梢病在上海地区发生严重。本研究对上海地区的厚皮香枯梢病进行了病原菌的分离与致病性鉴定,得到其病原菌菌株2017SHTg。根据病原菌的形态特征将其鉴定为小新壳梭孢Neofusicoccum parvum。扩增病原菌2017SHTg的rDNA-ITS序列和翻译延伸因子EF-1α基因序列,进行BLAST序列比对与小新壳梭孢相似性分别为99%和100%;基于rDNA-ITS序列构建系统发育进化树,其在系统发育树上与小新壳梭孢的类群处于同一分支,此结果与形态学鉴定结果一致。     

湖北‘天仙红’桃树流胶病病原菌鉴定

流胶病在湖北‘天仙红’桃树上发生严重。为明确引起‘天仙红’桃流胶病的病原,通过形态学、分子生物学及柯赫氏法则对采集的病害样品进行了病原菌鉴定。结果表明,获得的分离菌株JSZ01的形态学特征与小新壳梭孢Neofusicoccum parvum基本一致。BLAST比对结果显示,分离菌株JSZ01的ITS、TEF1-α和β-tubulin基因序列与N.parvum的相似性在99.2%～100%,在系统发育进化树中JSZ01与小新壳梭孢的类群处于同一分支。JSZ01接种健康桃树枝条5 d后接种部位出现溃疡流胶症状,与田间症状一致。结合形态学观察、序列分析以及致病性测定结果,将‘天仙红’桃树流胶病的病原菌鉴定为N.parvum。     

不同时期的柑橘果实中真菌种类分析

柑橘采后真菌病害发生普遍,对柑橘产业造成了极大的威胁。柑橘体内存在丰富的真菌类群,为了了解柑橘成熟和衰老过程中果实内生真菌的多样性和变化动态,本论文通过MiSeq技术解读真菌ITS区域序列,分别对生长期、成熟期和贮藏期的晚蜜一号果实的果皮和果肉的内生真菌种类进行了分析。发现相比于果肉,果皮中真菌在目和属水平的多样性更为丰富,而成熟期果肉中真菌种类多于果皮。不同生长阶段的两种组织中优势的真菌属也不同,果皮在生长期以Medicopsis和刺盘孢属(Colletotrichum)占绝对优势,成熟期为刺盘孢属,贮藏期以葡萄孢属(Botrytis)、Erythrobasidium和Strelitziana较为常见;而果肉中生长期主要为青霉属(Penicillium)和枝孢菌属(Cladosporium),约占1/4,成熟期半数以上为葡萄孢属,及至贮藏期约90%为链格孢属(Alternaria)和青霉属,其中链格孢属约占2/3。常见植物病原真菌如枝孢菌属(Cladosporium)、巨座壳属(Magnaporthe)、核盘菌属(Sclerotinia)、葡萄孢属(Botrytis)、白粉菌属(Erysiphe)、青霉属(Penicillium)、链格孢属(Alternaria)和镰孢霉属(Fusarium)等在果肉中的数量高于果皮。果肉中存在较大数量的常见植物病原真菌,不同属真菌在不同样品中呈不同的变化动态,暗示采后病变是多种真菌交互作用的结果,采后病害的防治可以提前至开花期。     

应用实时荧光PCR检测苹果果实球壳孢腐烂病菌

根据苹果果实球壳孢腐烂病菌(Sphaeropsis pyriputrescens Xiao&J.D.Rogers)ITS区序列设计特异性引物和TaqMan荧光探针,建立了苹果果实球壳孢腐烂病菌的实时荧光PCR检测方法。该方法能够特异性检测苹果果实球壳孢腐烂病菌,供试的目标菌株检测结果为阳性,而苹果轮纹病菌、苹果炭疽病菌、苹果干腐病菌和苹果褐腐病菌、苹果腐烂病菌等5种对照菌株检测结果为阴性。该方法具有快速、简便、准确的优点,适合于该病害的快速诊断和口岸检验检疫运用。     

葡萄座腔菌侵染柑橘果实的报道

 柑橘生长中后期、运输和贮藏期间由真菌危害造成的烂果现象十分普遍。2016年对采集自江西赣州果园的柑橘病果进行了组织分离、柯赫氏法则验证和病原菌鉴定,明确病原菌为葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)。进一步发现该病菌可以侵染苹果枝干和果实,引起腐烂。这是首次关于B. dothidea侵染柑橘果实的报道。     

柑橘采后蒂腐病生防酵母菌的筛选及鉴定

通过离体及混菌试验,筛选出了对柑橘黑色蒂腐病具有较强拮抗作用的9株酵母菌。其中X-1、MA-2在离体条件下效果最好,在混菌5d后仍不见病原菌的生长。通过果实抑菌试验得到活体条件下效果最好的菌株Pg2-5,处理后果实的发病率在20.00%,比对照76.67%降低了56.67个百分点。防治效果与酵母菌的浓度呈正相关,与培养时间呈负相关。经形态和生理生化指标鉴定Pg2-5为假丝酵母属欧诺比假丝酵母。     

应引起检疫重视的苹果和梨球壳孢腐烂病

2004年肖长林(C.L.Xiao)报道了华盛顿州苹果和梨上发生的一种病原菌Sphaeropsispyriputres-cens,该病原菌主要引起储藏期苹果和梨的果实腐烂。本文对该病的发现、危害和症状以及病原菌形态、生物学特性、分离和鉴定方法等几个方面进行了综合概述,旨在为我国的进口美国水果检验检疫工作提供理论参考。     

柑橘根霉软腐病的病原菌分离与鉴定

采后腐烂给柑橘产业带来巨大的经济损失。本研究对2018年从陕西城固采集的温州蜜柑发病果实样品进行了病原菌的分离、柯赫氏法则验证和病原菌鉴定,证实获得的菌株CBS1可以通过伤口侵染温州蜜柑、椪柑、沃柑和伦晚脐橙果实,引起果实腐烂。基于形态学鉴定和ITS序列分析,将菌株CBS1鉴定为Rhizopus stolonifer,并对其生物学特性进行了初步研究。这是我国R.stolonifer侵染柑橘果实的首次报道。     

淡紫紫孢菌防治采后番茄果实灰霉病

本文通过孢子萌发检测、平板生长抑制法和果实病害防治试验,测定了淡紫紫孢菌Purpureocillium lilacinus PL36-1防治储藏期番茄果实灰霉病的效果。结果表明,菌株PL36-1发酵滤液不仅能够抑制灰葡萄孢分生孢子萌发和芽管伸长,而且可以抑制灰葡萄孢菌丝生长。对峙培养的菌株PL36-1显著抑制灰葡萄孢的菌丝生长,菌丝生长抑制率可达到74.45%,菌株PL36-1产生的挥发性物质也对灰葡萄孢菌丝生长有一定的抑制作用。菌株PL36-1发酵液处理樱桃番茄果实后,能有效控制番茄果实灰霉病的发生,含有2×10~8孢子/m L的发酵液10 d的防治效果达70.64%。     

柑橘黑色蒂腐病菌的分离鉴定及生物学特性

从自然发病的柑橘果实表面分离出柑橘黑色蒂腐病菌(Diplodia natalensis Evans),对其生物学特性研究的结果表明:不同培养基对菌落形态、菌丝生长速率及产孢量都有很大影响,其中以马铃薯蔗糖培养基菌丝生长旺盛,生长速度最快,产孢量最大。病原菌适宜的生长及产孢温度为25~30℃,最适温度为30℃;光照条件对病菌的生长及产孢没有显著的影响;病菌的致死温度在75℃左右,在测试的常用化学药剂中,以咪鲜胺对其抑制效果最好。     

广西百香果采后果腐病病原的鉴定

0 引言 百香果(Passiflora edulis),学名西番莲,为西番莲科(Passifloraceae)西番莲属(Passiflora Linn.)草质藤本植物,原产于南美洲的巴西,在我国主要种植于热带、亚热带地区,具有极高的营养、保健和商品价值[1-2].目前,我国百香果的主栽品种为紫果百香果(Passiflo...     

草莓丝核菌根腐病的病原菌鉴定

 由丝核菌引起的根腐病是草莓生产上的重要病害之一。本研究基于形态学、菌丝细胞核荧光染色、菌丝融合群测定、rDNA-ITS序列分析和柯赫氏法则验证,对北京地区引起草莓根腐病的丝核菌进行了鉴定。2014年从北京市昌平区温室草莓根腐病病样中分离纯化获得的3个代表菌株,经形态学和细胞核荧光染色,确定均为双核丝核菌(binucleate Rhizoctonia, BNR),且与双核丝核菌AG-A融合群菌株发生菌丝融合,菌株CP-Z的rDNA-ITS序列与GenBank中丝核菌属的有性型角担菌属(Ceratobasidium)AG-A融合群 4个菌株的相似性达100%。菌株CP-Z接种草莓根部,引起根系变黑、腐烂,植株死亡,从接种发病的根部可重新分离到双核丝核菌。双核丝核菌AG-A融合群引起草莓根腐病为国内首次报道。该病原菌菌丝生长适温为25℃~28℃。     

猕猴桃软腐病的病原菌鉴定

<正>猕猴桃果实软腐病是我国猕猴桃贮藏期的主要病害,在四川、陕西、江西等猕猴桃主产区发生普遍,平均发病率达20%~50%,造成了严重的经济损失。中国、意大利、智利等国家认为葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea是该病的主要病原菌(Zhou et al.,2015),拟茎点霉菌Phomopsis sp.也可造成危害(Luongo et al.,2011)。我国关于该病病原菌的报     

两种葡萄溃疡病菌双重PCR检测方法的建立与应用

为快速准确地鉴定出2种不同的葡萄溃疡病菌——葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea和小新壳梭孢Neofusicoccum parvum,根据Gen Bank中已报道的引起我国葡萄溃疡病的6个主要种的延伸因子-1序列及β-微管蛋白序列分别设计了葡萄座腔菌和小新壳梭孢的特异性引物B.d-F/B.d-R及N.p-F/N.p-R,建立了双重PCR检测方法,并对田间病样进行检测。结果表明,引物B.d-F/B.d-R和N.p-F/N.p-R可以分别在葡萄座腔菌和小新壳梭孢中扩增到324 bp和212 bp的特异性条带,检测灵敏度均为10 pg。双重PCR检测体系中Taq DNA聚合酶的最佳用量为0.05 U/μL,引物B.d-F/B.d-R和N.p-F/N.p-R的最佳终浓度均为0.2μmol/L,最适退火温度和退火时间分别为58℃和30 s。对田间葡萄病样的检测结果与室内病样常规病原菌分离结果一致。表明该双重PCR检测方法能够同时检测葡萄座腔菌和小新壳梭孢,有助于快速、灵敏地检测葡萄苗木的带菌情况。     

欧文氏杆菌引起梨果腐的一种新病害研究初报

近年来,在山东泰安发现梨果实软腐的新病害。从病部分离到一种细菌。根据个体形态,培养性状,生理化反应,致病性郑州 研究结果,确认致病菌为大黄颈腐欧文氏杆菌Ｅｒｗｉｎｉａｒｈａｐｏｎｔｉｃｉ（Ｍｉｌｌａｒｄ）Ｂｒｕｋｈｏｌｄｅｒ,非梨火疫菌Ｅ．ａｍｙｌｏｖｏｒａ。     

云南滇黄精根茎腐病病原鉴定

Polygonati rhizoma is used as traditional Chinese medicine and nutritional food. Polygonatum kingianum is one of the three source species of polygonati rhizoma. Rhizome rot disease is a serious constraint to the production of P. kingianum in Yunnan Province. Two kinds of purified fungal isolates, named PkF01 and PkF02, were obtained from the rhizome rot samples. Based on morphology, analysis of tef1α and rpb2 gene sequences, two fungal strains PkF01 and PkF02 were designated as Fusarium oxysporum and F. solani, respectively. According to pathogenetic tests fufilling Koch's postulates, F. oxysporum and F. solani were identified as causal agents of rhizome rot of P. kingianum. The former showed a stronger pathogenicity on the rhizomes of P. kingianum than that of the latter one. This result is helpful to control rhizome rot on P. kingianum.     

江西番茄烂果病病原菌鉴定

In recent years since 2018, the disease of tomato fruit rot has been often noted in Jiangxi province. In order to ascertain the causal agent, common tissue isolation method was used to isolate the pathogen collected from 8 counties and cities of Jiangxi province. A total of 17 isolates was obtained, which exhibited similar phenotype on V8 agar plates with production of antheridia, oogonia and oospore indicating the characteristics of Phytophthora spp.. The pathogenicity test for the isolates showed the similar disease symptoms with that in the field and the pathogen was reisolated from the infected tomato tissues, which fulfilled the Koch’s postulate. BLAST search with rDNA-ITS, partial Ypt1 and β-tubulin gene sequences for 17 isolates showed 99%-100% of identities to Phytophthora capsici that in correspond with the clustering result of phylogenetic analysis for two represented strains. Combined with morphologic characteristic observation, pathogenicity test and sequence ana-lysis, the pathogen causing tomato fruit rot was identified as Phytophthora capsici. This is the first report of P. capsici causing fruit rot on tomato in Jiangxi province, China.     

北京市生菜链格孢根腐病病原菌鉴定

为明确北京市生菜链格孢根腐病的病原菌种类,采用常规组织分离法分离获得病原菌,依据柯赫氏法则对病原菌进行致病力检测,并利用分子生物学技术结合形态学鉴定确定病原菌分类地位。结果显示,从生菜病样组织中分离到2种病原菌共18株,形态学鉴定结果为芸薹链格孢Alternaria brassicae和万寿菊链格孢A. tagetica,分离比例分别为55.6%和44.4%,且二者均能单独侵染生菜根部,前者致病力较后者强,亦能复合侵染。对致病菌株进行GAPDH基因的PCR扩增和测序,并建立了基于GAPDH基因序列的系统发育树,聚类分析结果与形态学鉴定结果一致,因此证实北京市生菜链格孢根腐病是由芸薹链格孢和万寿菊链格孢复合侵染所致。