首例兽用活疫苗中污染副流感病毒5型的检测

从某企业送检的猪伪狂犬活疫苗中检出疑似血凝性外源病毒污染,经病原学和分子生物学鉴定,证实该疫苗污染了PIV5,并对我国主要猪用活疫苗中污染PIV5情况进行了摸底检测。将样品经伪狂犬病毒特异性阳性血清中和后,接种Vero细胞连传5代,可出现细胞圆缩、聚集、颗粒增多等细胞病变。纯净性检测显示该分离株无细菌污染、支原体污染和外源病毒检验。将该分离毒株F10代培养物进行病毒含量和HA效价测定,分别为107.0TCID50/ml和1：256。以PIV5单克隆抗体作为一抗进行IFA染色,可在感染细胞的胞浆中观察到典型的绿色荧光;采用针对PIV5的L基因设计特异性引物,经RT-PCR可扩增出277bp特异性片段,经测序后与Genbank中已发表的8株PIV5序列进行同源性比较,同源性为93.1%～97.4%,其中与我国分离的来自小熊猫的PIV5 ZJQ-221株（登陆号：KF100034.1）同源关系最近,为97.4%;其次与犬源、猴源、牛源的PIV5同源性均在95.5%以上,与猪源的PIV5同源性为93.3～95.9%,同源性均较高。基因序列系统进化树分析结果显示同样的结果。以上试验证明疫苗中污染的病毒为PIV5,并命名为PIV5/01株。针对国内猪用活疫苗中污染PIV5情况的初步摸底检测显示,PIV5污染率约为16.7%,提醒应加强疫苗中污染PIV5的预防和控制。     

貉源犬瘟热病毒的分离鉴定

采集大庆某貉养殖场病貉的病料,处理后接种于非洲绿猴肾细胞(Vero)进行病毒分离。对分离毒株进行了中和试验、血凝试验、理化性质的鉴定,并用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测感染细胞中的病毒核酸。病料接种 Vero 细胞 72 h 后产生明显的细胞病变(CPE);病毒分离株可以被犬瘟热病毒阳性血清中和,中和效价为 1∶25;分离株对氯仿、乙醚敏感,对酸和热抵抗力弱,可以凝集鸡红细胞,其凝集作用可被犬瘟热病毒阳性血清所抑制; RT-PCR检测病毒细胞培养液,扩增出的片段长287 bp,与预期设计的长度相同,经测序发现与MS01株的同源性为99%。结果表明,分离的病毒株为犬瘟热病毒,命名为CDV-DQ株。     

猪流行性腹泻病毒HeB10/2014株的分离与鉴定

为确定2014年河北某猪场哺乳仔猪群腹泻的病原,本研究从该发病猪场采集了22份临床样品,采用PCR方法进行腹泻病原的检测。结果显示其中17份样品为猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性,而猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)均为阴性。选取其中5份PEDV阳性样品在Vero细胞中进行病毒的分离,结果显示,仅一份样品在接种细胞24 h后即可观察到细胞病变。对病变细胞进行RT-PCR及间接免疫荧光鉴定均为PEDV阳性。将分离的病毒株命名为He B10/2014。将其在Vero细胞中传至F5代次后病毒增殖明显增快,病毒滴度于感染细胞24 h达到峰值。对分离株的S基因进行克隆和测序分析,结果显示该病毒分离株符合国内近年来流行病毒株S蛋白的变异特征,即在S蛋白中存在4个连续氨基酸的插入(~(59)QGVN~(62))和3个氨基酸的缺失(~(14)0N和~(163)NI~(164))。本研究结果表明分离获得的HeB10/2014株为国内近年来新的PEDV流行株。     

3株猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定及增值特性

2012年从四川省多个地区的猪场采集流产死胎10份,采用BHK-21细胞培养方法分离出3株乙型脑炎病毒,分别命名为JEV-SC-1、JEV-SC-2与JEV-SC-3株,E基因与现用疫苗株SA-14-14-2的核苷酸相似性分别为99.24%、99.05%及98.76%,基因分型研究显示3株病毒株均为基因Ⅲ型,分离株在BHK-21细胞中均能产生明显的细胞病变,其TCID50分别为10-5.81/0.025、10-5.12/0.025及10-4.42/0.025mL。以JEV-SC-1株分别感染BHK-21细胞和Vero细胞,观察病变情况并利用荧光定量PCR法绘制其在这2种细胞中的生长曲线,检测该毒株在BHK-21细胞上连续传代后不同代次的病毒含量。结果显示,JEV-SC-1株在这2种细胞中均能增殖,但CPE及病毒滴度有所差异:JEV-SC-1株感染Vero细胞的病毒滴度较BHK-21细胞高,但出现细胞病变时间较晚;JEV-SC-1株在BHK-21细胞上连续传代至20代,第1代至第10代病毒含量呈上升趋势,10代以后病毒含量趋于稳定,波动幅度较小。本试验为大规模生产疫苗提供理论支持,同时也为进一步研究JEV-SC-1株的生物特性奠定了基础。     

牛细小病毒的分离鉴定及在不同细胞中的复制动力学研究

本研究旨在获得牛细小病毒分离株,并对牛细小病毒(BPV)在不同细胞中的复制动力学进行探讨,为牛细小病毒疫苗的开发筛选出合适的病毒株及适宜病毒扩增的细胞株。将96批次牛血清样品分别接种于BT细胞中,盲传3代,逐日观察细胞病变(CPE),对出现典型细胞病变的样品采用直接免疫荧光法检测;分离得到1株牛细小病毒,并且对这株病毒的红细胞凝集特性进行分析。通过将牛细小病毒接种在Vero、BT和MDBK 3种细胞中,筛选出适合牛细小病毒培养用的细胞株。结果,通过对96批次牛血清样品接种于BT细胞进行病毒分离培养,获得4株病毒阳性株,使用直接免疫荧光法检测,获得1株牛细小病毒,进行红细胞凝集试验,这株牛细小病毒能凝集豚鼠、马、人的红细胞,但不能凝集家兔、山羊和鸡的红细胞。这株牛细小病毒在BT细胞中可稳定传代,在MDBK和Vero细胞中盲传3代仍未检测到牛细小病毒。结果表明,通过细胞体外培养法分离得到1株牛细小病毒,可以作为牛细小病毒疫苗制备的病毒株,对这株牛细小病毒在不同细胞中的复制动力学的研究结果表明,BT细胞是最适合培养这株牛细小病毒的细胞,候选细胞株MDBK和Vero细胞不适合这株牛细小病毒的扩大培养。本研究为牛细小病毒疫苗的开发奠定了基础。     

1株B亚型禽偏肺病毒的分离与鉴定

从山东省多个地区的商品肉鸡养殖场采集64份疑似病料,通过RT—PCR方法检测出37份禽偏肺病毒阳性病料,以此作为病毒分离材料接种SPF鸡胚,盲传至第7代时鸡胚生长明显迟滞。取阳性尿囊液在CEF中培养,呈现禽偏肺病毒典型细胞病变（CPE）：细胞变圆、悬浮,有合胞体形成。将分离株接种于Veto细胞及DF-1细胞均出现类似病变。对分离株F基因进行测序,并与GenBank中发表的部分代表序列比较。结果显示,与B亚型禽偏肺病毒的核苷酸同源性最高,为97．4％～99．3％;与A亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性较低,为77．4％～78．1％;而与C亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性最低,为69．5％～69．7％。基因分型显示分离株为B亚型禽偏肺病毒,将该毒株命名为禽偏肺病毒SDWF株。     

猪流行性腹泻病毒SD株的分离与鉴定

利用Vero细胞自安徽合肥腹泻仔猪小肠内容物中分离到一株病毒,经胶体金、PCR方法和攻毒试验,确定为猪流行性腹泻病毒,命名为SD株。SD株在Vero细胞上传代,第8代(F8)开始出现稳定的细胞病变(CPE),F8代的毒价(TCID50)为10-6.25/0.1 m L,F8代细胞培养物接种未吃初乳仔猪,接种仔猪均出现典型腹泻症状,死亡仔猪3头(50%),未死亡猪生长严重发育不良,说明SD株具有较强的致病性。     

猪流行性腹泻病毒SD201604株的分离鉴定及致病性研究

本研究旨在获得猪流行性腹泻病毒(PEDV)分离株,并对其致病性进行研究。应用Vero细胞从山东某猪场腹泻病料中进行病毒分离,通过细胞病变、免疫荧光试验、电镜观察和RT-RCR进行鉴定,并对分离株的S基因序列进行分析;应用10~(3.5) TCID_(50)/mL分离株口服接种3日龄仔猪并观察临床症状和病理变化;用不同滴度的分离株分别口服接种3日龄仔猪(3mL/只),统计各组仔猪的死亡率,确定最小致死量。结果显示,成功分离到1株PEDV,命名为PEDV SD201604株。该分离毒株能在Vero细胞上增殖,产生细胞病变,传代至F6代时病毒滴度可达10~(3.5) TCID_(50)/mL,免疫荧光试验和RT-RCR检测均为PEDV阳性。电镜观察可见直径大小约为100nm的病毒粒子,有明显的囊膜和纤突,具有PEDV病毒粒子典型的形态特征,确定分离株为PEDV。S基因序列分析显示,分离株为国内流行的PEDV变异株。动物回归试验结果显示,口服感染该分离株的5头3日龄仔猪全部出现典型的PED临床症状和病理变化,其中3头死亡。最小致死量试验结果表明,口服感染3 mL病毒含量为10~(4.5) TCID_(50)/mL的分离株可使仔猪全部死亡。本试验结果可为PEDV的分离鉴定及生物学研究提供参考与借鉴。     

东北虎源犬瘟热病毒H基因生物信息学分析

从GenBank数据库下载犬瘟热病毒14种基因型H基因237株序列,与3株东北虎源犬瘟热病毒序列比对之后进行同源性和位点变异分析,最后构建系统发育树。研究发现:3株东北虎源犬瘟热病毒(KC579362、KC579363和KM386683)分别属于Arctic-like和Asia-1基因型,与其他基因型毒株的同源性为89.94%~100%之间,H基因序列1 632(G→A)、1 664(C→T)、1 729(G→A)和1 795(G→A)位点的突变可能是CDV跨宿主传播给东北虎的关键突变位点。Arctic-like和Asia-1型毒株对东北虎威胁最大,H基因变异位点可为研究东北虎源序列遗传变异特征提供分子生物学依据。     

一株猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及其致病性研究

应用Vero细胞对江苏省某猪场腹泻病料进行病毒分离,通过细胞病变观察、RT-PCR扩增、动物回归试验对病毒进行鉴定,通过半数致死量测定病毒的致病性。结果显示,成功分离到1株猪流行性腹泻病毒(PEDV),命名为PEDV JS14株。该毒株在Vero细胞上盲传至4代出现细胞病变,主要表现为细胞面粗糙、颗粒增多,细胞多核呈空斑样,细胞脱落等病变特征;分离株口服感染5头7日龄仔猪全部出现典型的临床症状,其中4头死亡。F6代培养物以不同滴度口服接种15头7日龄的仔猪,其半数致死量为10~(5.0)TCID_(50)/mL。结果表明,本次分离的PEDV为强毒株,为进一步的生物学特性研究奠定了基础。     

青裸褐穗病菌的生物学特性

对青稞(Hordeum vulgare)褐穗病菌(Corticium rolfsii)的生物学特性及营养利用能力进行了研究。结果表明,青稞褐穗病菌担孢子萌发的温度范围为5～30 ℃,最适温度为20 ℃;在自由水中可以萌发,但在100％相对湿度中不萌发;pH为4.53～9.18时均可萌发,最适pH为5.59;48 h萌发率为76.5％;蔗糖、土壤浸渍液、青稞叶浸渍液和牛羊粪浸渍液4种营养液及光照处理对孢子萌发没有明显的促进作用。担孢子在温度15.5～21.0 ℃、相对湿度31％～71％下,最少能存活69 d。果糖培养基褐穗病菌菌丝生长显著高于对照(P<0.05),山梨糖、淀粉和乳糖有显著的抑制作用,硝酸铵和硫酸铵对褐穗病菌菌丝生长略有促进作用,但差异不显著(P＞0.05),而谷氨酸、酪氨酸、尿素和碳酸氨对菌丝生长有显著抑制作用。     

合力创建桑树药源基地

2006年初,广东省提出建设中医药强省的目标。省政府及业界一致高调力挺中医药并为实现中医药现代化而奋斗。中药材的种植、加工与药效是十分重要的环     

硒源对猪生长的重要性

现代畜牧业生产过程伴随着应激因子和高代谢,这种过程可增加畜产动物的氧化应激,进而导致猪群生产性能低下、繁殖力下降和健康问题,以及猪肉品质的下降（氧化作用）。     

An unusual source of lead causing poisoning

Extract

Sir,—I recently added two nine-month-old heifers showing typical symptoms of lead poisoning, but when the usual search for the source was found. On my third visit the owner produced a half-chewed tape measure which he remembered having mislaid the day before the oneset of the illness of the heifers. Although not expecting it to be the source of the lead, I examined it and found a residue of silvery threads after the organic matter had been calcined. These threads, when dissolved in nitric acid and tested with a solution of potassium iodide, gave a heavy precipitate of “golden spangles” of lead iodide. The heifers had chewed about two feet of tape, which apparently contained enough lead cause the very severe symptoms. After three weeks, they are now recovering.