黄芪提取物对NIH-3T3细胞增殖及胶原合成的影响

通过中药黄芪提取物对小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3增殖,细胞周期及胶原合成的影响,为黄芪在创伤愈合中的作用提供依据。试验以体外培养小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3,细胞传代,随机分为两组,对照组和药物干预组,加入不同浓度的黄芪提取物干预细胞24 h,分别采用CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期比例,羟脯氨酸试剂盒检测细胞胶原分泌含量。试验结果表明,黄芪提取物浓度为6.5X10^(-5)g/L时,吸光度与对照组相比,差异显著(P<0.05),当黄芪提取物浓度为8×10(-5)g/L时,吸光度与对照组相比,差异显著(P<0.05),当黄芪提取物浓度为8×10^(-3)g/L,1.6×10(-3)g/L,1.6×10^(-3)g/L,3.2×10(-3)g/L,3.2×10^(-4)g/L时,干预细胞24 h,吸光度较对照组差异极显著(P<0.01)。采用流式细胞术检测细胞周期同样证明了在浓度8×10(-4)g/L时,干预细胞24 h,吸光度较对照组差异极显著(P<0.01)。采用流式细胞术检测细胞周期同样证明了在浓度8×10^(-3)g/L,1.6×10(-3)g/L,1.6×10^(-3)g/L,3.2×10(-3)g/L,3.2×10^(-4)g/L时干预细胞,S期比例较对照组差异极显著(P<0.01),羟脯氨酸试剂盒检测黄芪提取物干预细胞合成胶原含量均有增加,且8×10(-4)g/L时干预细胞,S期比例较对照组差异极显著(P<0.01),羟脯氨酸试剂盒检测黄芪提取物干预细胞合成胶原含量均有增加,且8×10^(-3)g/L,1.6×10(-3)g/L,1.6×10^(-3)g/L浓度时,差异极显著(P<0.01)。从而表明,黄芪提取物能促进NIH-3T3细胞增殖,促进胶原合成。     

玉米赤霉烯酮对体外培养猪卵巢颗粒细胞的影响

以原代培养的猪卵巢颗粒细胞为模型,设立玉米赤霉烯酮(ZEA)对照组(0.0 mg/L)及高(80.0 mg/L)、中(20.0,40.0mg/L)、低(0.2,2.0mg/L)剂量组,比较不同质量浓度ZEA对体外培养猪卵巢颗粒细胞的影响。形态学观察发现,随着ZEA质量浓度的增加,颗粒细胞呈散在生长,体积缩小变圆,数量减少;高剂量组(80.0mg/L)中,76.96%细胞均已脱壁死亡。MTT法表明,ZEA对卵巢颗粒细胞具有生长抑制作用;免疫荧光结果显示随ZEA质量浓度的增加,细胞凋亡率逐渐升高,高质量浓度组细胞增殖率仅为1.01%;Western blot检测结果显示经ZEA处理,Fas、FasL、FADD、Caspase-10的表达量均明显上调,且存在质量浓度-效应关系。结果表明,ZEA能诱导卵巢颗粒细胞凋亡,并显著上调Fas、FasL、FADD、Caspase-10的表达,可通过死亡受体通路介导卵巢颗粒细胞发生凋亡。     

12种藏药对鸡胚成纤维细胞的安全浓度和生长的影响

用MTT法测定了藏菖蒲、红景天、决明子、灵芝盖、灵芝柄、龙胆、天冬、降香、乳香、仁青芒觉、二十五味珍珠丸、二十五味松石丸等12种藏药对体外培养的鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度和生长的影响.结果显示,各藏药的最大安全质量浓度红景天为31.25 mg/L,天冬、降香、决明子和二十五味松石丸为62.5 mg/L,乳香为125mg/L,二十五味珍珠丸为250 mg/L,藏菖蒲和灵芝柄为1 000 mg/L,龙胆和仁青芒觉为2 500 mg/L,灵芝盖为5 000 mg/L,藏菖蒲为1.954～500 mg/L,天冬为1.954～15.625 mg/L,决明子为1.954～3.907 mg/L,灵芝柄为1.954～7.813 mg/L,仁青芒觉为19.54～1 250 mg/L,龙胆为312.5～625 mg/L,可显著促进细胞生长.     

酿酒酵母培养物和提取物对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1表达的影响

建立绵羊瘤胃上皮细胞(ovine ruminal epithelial cells,ORECs)培养体系为体外试验模型,旨在探索酿酒酵母培养物和提取物对ORECs中绵羊β-防御素-1(sheepβ-defesin-1,SBD-1)表达效果的影响。首先,分别用200 mg/L酿酒酵母培养物和提取物诱导ORECs不同时间段(0,6,12,18,24,30 h)后,经qPCR扩增反应检测SBD-1 mRNA表达量,以分别确定酿酒酵母培养物和提取物诱导SBD-1 mRNA表达最高的刺激时间;然后用不同质量浓度梯度(0,100,200,300,400 mg/L)酿酒酵母培养物和提取物分别诱导ORECs最佳时间段后,同样地采用qPCR扩增技术检测SBD-1 mRNA表达量,从而筛选出诱导SBD-1 mRNA表达最高的酿酒酵母培养物浓度和酿酒酵母提取物浓度。结果显示,酿酒酵母培养物和提取物均可诱导SBD-1 mRNA表达。当酿酒酵母培养物质量浓度为400 mg/L、酿酒酵母提取物质量浓度为200 mg/L分别刺激ORECs 6 h时,ORECs SBD-1 mRNA表达量分别达到最高,且均极显著高于对照组(P0.01)。最后在相同试验条件下,分别使用最佳诱导质量浓度的酿酒酵母培养物(即400 mg/L)和酿酒酵母提取物(即200 mg/L)诱导ORECs最佳时间(即6 h),比较两者诱导ORECs SBD-1 mRNA表达效果,qPCR结果显示酿酒酵母提取物诱导SBD-1 mRNA表达显著高于酿酒酵母培养物(P0.05)。结果表明,酿酒酵母培养物和提取物均能够诱导ORECs SBD-1表达,400 mg/L酿酒酵母培养物和200 mg/L酿酒酵母提取物分别刺激ORECs 6 h后SBD-1表达量最高,且酿酒酵母提取物诱导效果优于酿酒酵母培养物。     

不同浓度的葡萄糖对大鼠脂肪细胞增殖分化的研究

研究葡萄糖在脂肪细胞的增值与分化过程中对其细胞形态、增殖分化的规律。用消化法培养大鼠脂肪细胞,以MTT法检测增殖程度。实验证明,葡萄糖对大鼠脂肪细胞增殖有促进作用,葡萄糖的浓度为20 mm L/L时细胞增殖分化的作用最大(P0.05),到25 mmo L/L时葡萄糖对原代大鼠脂肪细胞的增殖分化的能力减少,可能是由"高糖毒性"造成。     

维生素E对蛋种鸡卵巢等级前颗粒细胞增殖的影响

通过对蛋种鸡颗粒细胞进行原代培养,研究维生素E(VE)对颗粒细胞增殖的影响.取海兰褐蛋种鸡颗粒细胞,培养7d,观察细胞的生长趋势,确定VE干预方案.细胞培养24 h后,开始VF的干预,试验分为6组,每组分别以含VE 0、10、50、150、200和250 mg/L培养液培养,每组3个重复,连续培养24、48、72 h后,用MTT法进行细胞增殖检测.结果显示:颗粒细胞体外培养的适应期为1d,3d细胞数量达到高峰,之后细胞进入停滞衰退期.VE干预后48 h内,各组细胞增殖率随VE浓度的增加而升高,72 h时,与对照组相比,10 mg/L组细胞增值率基本不变,其他各组随着剂量的升高有降低趋势.结果表明,维生素E能够促进体外培养颗粒细胞增殖,降低细胞凋亡率.     

常山提取物和常山乙素对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

为了明确常山提取物和常山乙素的免疫学活性,应用MTT法测定2种药物体外对小鼠脾T、B淋巴细胞增殖的影响。结果显示,常山碱提取物质量浓度达到200mg／L时显著抑制了小鼠脾淋巴细胞的增殖（P〈0．05）;质量浓度在10mg／L时对ConA诱导T淋巴细胞增殖有显著的促进作用（P〈0．05）;质量浓度在10～200mg／L对LPS诱导B淋巴细胞增殖有一定的促进作用（P〉0．05）。常山乙素质量浓度达到0．1mg／L时显著抑制了小鼠脾淋巴细胞的增殖（P〈0．05）;质量浓度在0．001～0．01mg／L时对ConA诱导T淋巴细胞增殖有一定的促进作用（P〉0．05）,质量浓度在0．0001mg／L时具有显著的促进作用（P〈0．05）;质量浓度在0．0001～0．005mg／L对LPS诱导B淋巴细胞增殖有一定的促进作用（P〉0．05）。结果表明,常山提取物和常山乙素具有良好的免疫增强活性,为今后相关研究提供了免疫学参考。     

甘草提取物(GC-X)体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用的研究

为了探讨甘草提取物(GC-X)体外对HeLa细胞的促凋亡作用,试验采用MTT比色法观察了GC-X对HeLa细胞增殖的抑制情况,AO/EB双荧光染色法和透射电镜观察了细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪测定了各组细胞的凋亡率。结果表明:GC-X体外对HeLa细胞的生长、增殖的抑制作用具有剂量和时间依赖性,其48 h的IC50仅为11.24μg/m L;AO/EB双荧光染色和透射电镜观察可见,GC-X作用后He La细胞均出现典型的凋亡细胞形态;流式细胞仪检测GC-X对HeLa细胞的诱导凋亡作用呈现明显的浓度依赖性。说明GC-X可抑制HeLa细胞的增殖并具有诱导细胞凋亡的作用。     

ERK1/2通路在VEGF促进绵羊卵泡颗粒细胞增殖中的作用

选取10只1.5岁成年小尾寒羊母羊,分别取卵泡颗粒细胞并进行培养。设置5个试验组和1个空白对照组,试验组采用不同质量浓度血管内皮生长因子（VEGF）刺激,空白组不添加VEGF。并用MTT检测细胞增殖情况,Western-blotting检测细胞中P-ERK1/2表达水平。MTT比色结果表明,当VEGF质量浓度为5μg/L时对细胞增殖的促进作用最大,且试验组均高于对照组;Western-blotting结果显示,P-ERK1/2表达水平随VEGF的添加而显著增加,并在5μg/L时达到最大值（P〈0.05）。但在10、15、20μg/L质量浓度下其表达量差异不显著（P〉0.05）。这说明不同质量浓度VEGF对颗粒细胞增殖的促进作用各不相同,其中以5μg/L的VEGF效果最好。当颗粒细胞培养至48h时,P-ERK1/2表达水平较24h时略有提高,并在5μg/L VEGF刺激时达到最大值。VEGF可能是通过促进P-ERK1/2的表达进而促进颗粒细胞的增殖。     

无机盐对甘草愈伤组织生长及总黄酮含量的影响

本研究以甘草无菌苗的下胚轴为供试材料,以MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+KT 0.4 mg/L+agar 8 g/L+sugar 30 g/L为基本培养基,利用组织培养技术并结合紫外分光光度法探究了MS培养基中5种不同无机盐浓度及各种成分之间的交互作用对甘草愈伤组织增长量、生理指标及次生代谢产物的影响。结果表明,适量增加KNO₃和MnSO₄·4H₂O的含量有利于甘草愈伤组织生物量的积累;随着MS培养基中CaCl₂·2H₂O浓度的增加,有利于可溶性糖和总黄酮含量的积累;浓度为2533 mg/L KNO₃最有利于提高POD活性;KH₂PO₄浓度在170~226 mg/L范围内,愈伤组织生长量和总黄酮含量显著提高;MS培养基中MgSO₄·7H₂O有利于甘草愈伤组织的生长及总黄酮的合成。而愈伤组织的生长状况与总黄酮的合成是多种无机盐离子之间交互作用的结果,通过正交试验及极差分析得出最优营养元素组合为MgSO₄·7H₂O 493 mg/L+MnSO₄·4H₂O 7 mg/L+KNO₃ 2533 mg/L+KH₂PO₄ 170 mg/L+CaCl₂·2H₂O 733 mg/L。     

不同浓度胰岛素对原代大鼠脂肪细胞增殖分化的研究

目的:探讨不同浓度胰岛素对大鼠脂肪细胞增殖分化的影响。方法:本文以20日龄雄性SD大鼠为实验材料,采用离体培养技术对大鼠脂肪细胞进行培养,以不同浓度胰岛素处理大鼠脂肪细胞的增殖分化。结果:在脂肪细胞增殖方面,胰岛素浓度在100～400 nmol/L范围内对促进大鼠脂肪细胞增殖差异显著,随着胰岛素浓度升高到500 nmol/L时,脂肪细胞增殖能力减弱。在脂肪细胞分化方面,胰岛素浓度在200～400 nmol/L时能显著地促进大鼠脂肪细胞的分化;当胰岛素浓度达到500 nmol/L时脂肪细胞分化能力最强。结论:通过实验研究发现中低浓度的胰岛素能够促进大鼠脂肪细胞的增殖,高浓度的胰岛素能诱发大鼠脂肪细胞的分化。     

葎草黄酮对牛乳腺上皮细胞相关基因表达的影响

以奶牛乳腺上皮细胞为细胞模型,用MTT法检测细胞的存活和生长情况,用不同浓度的黄酮溶液(0、100、200、400、600、800mg/L)刺激奶牛乳腺上皮细胞12h,再用相同浓度的黄酮溶液(400mg/L)作用于奶牛乳腺上皮细胞不同时间(1、4、9、12、16、24h),分别提取细胞总RNA,用荧光定量PCR法测定GHR、β-CN、IL-6、IL-8、TNF-α和IFN-γ泌乳相关基因的表达,研究葎草提取物总黄酮对乳腺上皮泌乳及炎性相关因子表达的影响。结果表明,试验组与空白组相比,奶牛乳腺上皮细胞中IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-8的表达水平降低(P0.05);生长激素受体(GHR)、β-酪蛋白(β-CN)的表达量高于对照组(P0.05)。说明葎草黄酮能上调奶牛乳腺上皮细胞β-CN和GHR的表达量,以浓度为400mg/L培养4h~12h的效果最佳。     

黄芪多糖对体外培养大鼠肠黏膜微血管内皮细胞增殖的影响

研究黄芪多糖对体外培养的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞（rat intestinal mucosa microvascular endothelial cells,RIMMVECs）增殖的影响。应用不同浓度的黄芪多糖作用于体外培养的RIMMVECs。通过MTT法检测黄芪多糖对RIMMVECs增殖的影响。不同浓度的黄芪多糖对细胞增殖的影响不同:黄芪多糖浓度在25～800 mg/L时可明显促进细胞的增殖（P<0.05或0.01）;浓度为1.6×10³ mg/L时对细胞的增殖无影响;浓度在3.2×10³～25.6×10³ mg/L时对细胞生长具有抑制作用（P<0.05或0.01）。黄芪多糖有促进体外培养RIMMVECs的增殖作用,此作用对保护内皮损伤、加速内皮修复有重要作用。     

脂多糖对体外培养山羊瘤胃上皮细胞的影响

为了鉴定脂多糖(LPS)对体外培养的山羊瘤胃上皮细胞炎性因子表达及浓度的影响,试验采用体外培养细胞法培养山羊瘤胃上皮细胞,添加不同浓度的LPS(1,5,10,50,100 mg/L)刺激山羊瘤胃上皮细胞,用MTT法筛选最佳刺激浓度,收集细胞;经qRT-PCR法分析核因子κb(p65)[NF-κb(p65)]、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)基因mRNA相对表达量。结果表明:50 mg/L组细胞抑制率(IR)接近10%,初步确定LPS抑制细胞生长最佳浓度为50 mg/L; 50 mg/L组NF-κb(p65)的mRNA相对表达量极显著高于其他浓度组(P0. 01); 10 mg/L组TNFα的mRNA相对表达量极显著高于1,5,100 mg/L组(P0. 01),50 mg/L组次之; 10 mg/L组IL-1β的mRNA相对表达量极显著高于其他浓度组(P 0. 01),50 mg/L次之; 50 mg/L组IL-6的mRNA相对表达量最高,极显著高于1 mg/L组和100 mg/L组(P0. 01),与5,10 mg/L组相比差异不显著(P0. 05)。说明LPS体外诱导山羊瘤胃上皮细胞炎性反应的最佳浓度为50 mg/L。     

五羟色胺对体外培养山羊黄体细胞增殖的影响

为了探讨5-羟色胺(5-HT)与山羊黄体细胞的生长是否存在密切的关联性,揭示其在黄体发育中的生物学作用,采用胶原酶Ⅱ消化法获得原代山羊黄体细胞并用催产素(OT)染色对细胞进行鉴定,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度5-HT对山羊黄体细胞的影响,免疫组织化学染色法(SP法)检测山羊黄体细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达。MTT法结果显示,5-HT对山羊黄体细胞的增殖起到促进作用,促增殖的浓度范围在10~(-8) mol/L~10~(-4) mol/L,浓度越高,促增殖作用越明显。免疫组织化学染色法证实,5-HT能够使山羊黄体细胞中PCNA蛋白的表达增多。结果提示,5-HT可能是通过促进PCNA蛋白的表达来实现对山羊黄体细胞的促增殖作用。5-HT在黄体发生、发展过程中发挥的重要作用及相关分子机制的初步揭示都为生殖内分泌系统的研究奠定了理论基础。     

紫锥菊提取物对SD大鼠心肌组织氧化应激的保护作用

为探究紫锥菊提取物对SD大鼠心肌组织氧化应激的保护作用及相关蛋白表达的影响。选择60只SD大鼠按照随机分组方法分成对照组、不同质量浓度组(10、20、40 mg/kg),每组15只,进行饲养试验。饲养结束后,麻醉并取出心脏,检测心肌组织各生化指标及免疫组织化学染色对心肌组织做病理检测。SD大鼠随着添加紫锥菊提取物浓度增加,SD大鼠氧化应激指标ROS含量和MDA含量呈现逐渐降低的趋势,添加10、20、40 mg/kg紫锥菊提取物组SD大鼠ROS和MDA显著低于对照组(P<0.05);SD大鼠抗氧化指标SOD、GSH-Px和CAT活性呈现逐渐升高的趋势,添加10、20、40 mg/kg紫锥菊提取物组SD大鼠SOD、GSH-Px和CAT显著高于对照组(P<0.05);SD大鼠呼吸链复合体Ⅰ和呼吸链复合体Ⅲ活性呈现逐渐升高的趋势,显著上调线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ活性(P<0.05);SD大鼠Ca²⁺-ATP酶呈现逐渐升高的趋势,添加20、40 mg/kg紫锥菊提取物组SD大鼠Ca²⁺-ATP酶显著高于对照组(P<0.05)。不...     

过氧化氢诱导BRL细胞凋亡损伤模型的建立

动物冷应激过程中肝脏因发生氧化应激而受损。本试验采用过氧化氢(H2O2)诱导buffalo大鼠肝细胞(BRL)凋亡,建立体外氧化应激的凋亡损伤模型,为深入研究冷应激对肝脏损伤的机理奠定基础。试验采用不同浓度H2O2刺激BRL细胞2h,运用WST-1法检测细胞生长活力、Annexin-V/FITC-PI双染技术检测细胞凋亡率及Western blot方法检测Caspase-3的表达量来筛选BRL细胞凋亡的H2O2作用浓度。结果显示,与空白对照组相比,150μmol/L H2O2作用后,细胞增殖率明显下降,Caspase-3的蛋白表达量增加,流式细胞仪检测的凋亡率升高,同时细胞坏死较其他H2O2处理组低。结果表明,150μmol/L H2O2作用BRL细胞2h可模拟氧化应激造成的凋亡损伤。     

1,25(OH)2D3以双向方式影响猪前体脂肪细胞增殖分化的研究

1,25（OH）₂D₃是维生素D的主要活性形式,影响人和动物脂肪形成,为探究其在猪脂肪细胞增殖分化中的作用,试验从3~5日龄仔猪皮下脂肪组织分离培养前体脂肪细胞,并以浓度为0、0.1、1、10、100和1 000 nmol/L的1,25（OH）₂D₃分别处理,在培养的0、1、2、4、6、8和10 d采用MTT比色法检测细胞增殖活性;在诱导分化后0、1、2、4、6、8和10 d,以油红O染色提取法和实时荧光定量PCR检测细胞成脂分化及分化标志基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）和脂肪酸合成酶（FAS）表达。结果显示,0.1和1 nmol/L 1,25（OH）₂D₃显著促进猪前体脂肪细胞增殖（P<0.05）,而浓度为10~100 nmol/L时则抑制细胞增殖（P<0.05）;0.1和1 nmol/L 1,25（OH）₂D₃显著抑制猪前体脂肪细胞分化（P<0.05）,降低PPARγ和FAS mRNA表达水平（P<0.05）,但在浓度为10和100 nmol/L时,显著促进猪前体脂肪细胞分化（P<0.05）,上调PPARγ和FAS mRNA表达（P<0.05）;浓度达1 000 nmol/L时,可能对细胞有毒性作用。综合以上结果,低浓度1,25（OH）₂D₃促进猪前体脂肪细胞增殖,而通过下调PPARγ表达抑制分化;高浓度1,25（OH）₂D₃抑制猪前体脂肪细胞增殖,通过上调PPARγ表达促进分化。1,25（OH）₂D₃对猪前体脂肪细胞增殖和分化具有双向作用。     

蚓激酶对正常与软脂酸诱导的人肝细胞增殖的影响

目的:探讨不同浓度蚓激酶(EFE)在体外对LO2细胞株(人正常肝细胞)及软脂酸(PA)诱导的LO2细胞增殖的影响及EFE的最佳作用浓度。方法:用不同浓度(100 u/m L、200 u/m L、400 u/m L、600 u/m L、800 u/m L、1 000 u/m L)EFE作用于LO2细胞,分别在作用6 h、12 h、24 h,通过MTT法检测各组细胞的OD值;用20μg/m L的PA作用LO2细胞24 h,然后用不同浓度(100 u/m L、200 u/m L、400 u/m L、600 u/m L、800 u/m L、1 000 u/m L)的EFE进行干预,并于6 h、12 h、24 h检测细胞增殖情况。结果:200 u/m L、400 u/m L的EFE可促进LO2细胞的增殖,但无统计学意义,高浓度(800 u/m L、1 000 u/m L)的EFE能明显抑制LO2细胞的增殖(P0.05),且其抑制作用随着时间的延长而增强;低浓度(100 u/m L)的EFE可促进经PA诱导的LO2细胞的增殖,其作用效果显著(P0.05);200 u/m L、400U/m L的EFE对经PA诱导的LO2细胞的促进作用极显著(P0.01)。结论:EFE能缓解PA诱导的细胞损伤,对PA诱导的LO2细胞具有保护作用,且其最佳作用浓度为400 u/m L。