冷应激大鼠肝脏中novel-rno-miR-3的功能预测

将12只雄性Wistar大鼠随机分成2组,每组各6只分别放入冷应激气候室(4±0.5)℃和常温气候室中(4±0.5)℃,分别饲养12h后麻醉后采大鼠肝脏,并检测大鼠肝脏中novel-rno-miR-3的相对表达量。结果显示,急性冷应激组大鼠肝脏中的novel-rno-miR-3出现了极显著上调(P0.01)。结果表明,novel-rno-miR-3可能在急性冷应激时发挥调控功能,通过与其靶基因结合达到维持机体生命活动的作用。     

急性冷应激对大鼠肝脏miRNA的影响

将SPF级雄性Wistar大鼠随机分成冷应激组(4±0.05)℃和常温对照组(24±0.05)℃,再对2组大鼠肝脏中的6个miRNA进行qRT-PCR分析。结果显示:大鼠肝脏中6个miRNA的表达量均出现极显著差异(P0.01),说明急性冷刺激对大鼠肝脏中的miRNA表达量有极显著(P0.01)的影响,为今后的分子冷应激相关研究提供理论基础。     

大鼠急性冷应激模型的建立

通过分析冷刺激对大鼠血清中细胞因子、皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)的含量以及外周血淋巴细胞中热休克蛋白70(Hsp70)表达量的影响,构建大鼠急性冷应激模型,旨在为其相关研究提供研究基础。本试验急性冷刺激时间为12h。利用ELISA方法检测各组大鼠血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、CORT、ACTH的含量;采用Western blot和qRT-PCR方法检测各组大鼠外周血淋巴细胞中HSP70及mRNA表达量。结果表明,与对照组相比,急性冷刺激组大鼠血清中IL-2和ACTH的含量显著升高(P0.05),IL-4、IL-6、TNF-α和CORT的含量极显著升高(P0.01),IL-10无显著变化(P0.05);外周血淋巴细胞内HSP70及其mRNA表达量呈显著升高水平(P0.05)。成功构建大鼠急性冷应激模型。     

肉牛肝脏miR-31对运输应激的响应及生物学功能预测

旨在探究运输应激肉牛肝脏中miR-31的表达变化,并对其进行生物学功能预测,从多个方面探讨运输应激与miR-31间的关系。试验将10头体况相似的健康肉牛分为运输0 h组和运输6 h组,以速度为80 km/h进行公路运输应激。运用qRT-PCR方法检测肉牛肝脏组织中miR-31的表达,采用生物信息学分析方法对miR-31进行生物学功能预测。结果表明,与运输0 h组相比,运输6 h组肝脏中miR-31表达量极显著升高(P<0.01)。应用Targetscan、miRWalk、miRDB和miRTarBase 4款软件对miR-31靶基因进行预测,分别预测到427,1 261,122,307个靶基因。通过GO富集分析发现miR-31主要参与细胞过程,生物调节,代谢过程,多细胞生物过程,对刺激的反应等生物过程。其中,RAB27A,PPP2R2A,ARID1A可能是与应激联系密切的靶基因。结果提示,运输应激肉牛肝脏miR-31的上调能够对细胞生长发育、增殖和凋亡等方面产生重要影响。     

基于冷应激条件的下调肝细胞miR-383-5p对能量代谢的影响

使用不同浓度抑制剂对BRL-3A细胞进行不同时间的瞬时转染,利用qRT-PCR检测miR-383-5p相对表达量,筛选出在肝细胞建立miR-383-5p下调表达细胞模型的适宜条件。利用生物能量代谢监测分析仪检测下调miR-383-5p表达对大鼠肝细胞产酸率和氧耗率的影响。结果显示,100 pmol的inhibitor对BRL-3A细胞转染24 h后能够显著降低miR-383-5p的表达量(P0.01),下调miR-383-5p表达可显著提高产酸率和氧耗率(P0.01)。结果表明,miR-383-5p表达下调能够显著促进大鼠肝细胞的氧化磷酸化和糖酵解,可以增强能量代谢。     

鸭miRNA let-7-5p的分子生物学特征及功能预测

let-7通过影响靶基因的表达水平而参与细胞的生长、分化、凋亡等。为了研究let-7-5p在鸭上的序列特征、表达模式及其对鸭骨骼肌发育的可能作用,本文应用本课题组前期mi RNA测序数据,通过生物信息分析技术和分子生物学技术,研究了鸭let-7-5p序列特征、表达模式、其靶基因及靶基因的功能注释。结果如下:1鸭let-7-5p成熟序列是TGAGGTAGTAGGTTGTATAGTT;2鸭let-7-5p在北京鸭孵化第11天(E11)至E27胸肌内的表达量逐渐增加。组织间表达模式显示,在鸭E27心脏内的表达量最高(3.33),在肝脏、皮脂、肌胃、小肠和腹脂的相对表达量较低;3鸭let-7-5p靶基因的GO条目中许多条目与骨骼肌发育密切相关。研究结果能为进一步研究let-7-5p对鸭骨胳肌发育的作用奠定基础。     

急性冷、热应激对肉鸡肝脏和心脏组织中HSPs表达的影响

将45只28日龄罗斯308肉鸡随机均分为三组进行急性应激处理:热应激组在急性热应激下持续饲养6 h(温度为39℃,湿度为90%);冷应激组在急性冷应激刺激下持续饲养6 h(温度为11℃,湿度为90%);对照组鸡群在正常饲养条件下饲养(温度为26℃,湿度为60%)。采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分别对肝脏和心脏组织中的4种热应激蛋白基因(HSP60、HSP70、HSP90、HSP110)的表达量进行对比分析。结果表明:在心脏组织中,HSP60表达量在冷、热应激下均无显著变化(P0.05);HSP90表达在冷应激下显著下降(P0.05);HSP70表达在冷、热应激下均显著上升(P0.05、P0.01);HSP110表达在冷应激下无显著变化,在热应激下极显著上升(P0.01)。在肝脏组织中,HSP60在冷应激下表达量显著下降(P0.05),热应激下表达无显著变化(P0.05);HSP70和HSP110在热应激条件下表达量极显著上升(P0.01);HSP90表达量在冷、热应激下均无显著变化(P0.05)。结果揭示:急性热应激相比于急性冷应激对应激蛋白的表达影响更显著;在急性热应激条件下,心脏和肝脏组织中HSP70和HSP110表达量均极显著上升。     

肉牛肝脏miR-23a的靶基因及生物学功能预测

通过探究运输应激肉牛肝脏中miR-23a的表达变化,探究肉牛肝脏miR-23a与应激可能存在的关系,并对其进行生物学功能预测,深入探析miR-23a生物学功能.将10头肉牛随机分为运输0 h组、和运输6 h组,80 km/h的速度进行公路运输刺激.运用高通量测序技术筛选差异表达的肝脏miRNAs,采用生物信息学分析方法...     

Ssc-miR-133a-5p的靶基因预测及其相关信号通路的生物信息学分析

课题组前期通过高通量测序技术发现,microRNAssc-miR-133a-5p在肥胖猪脂肪组织中表达水平显著下调,推测其可能在脂肪沉积过程中发挥了重要作用。分析ssc-miR-133a-5p序列保守性,利用TargetScan,miRDB和miRWalk在线分析工具预测其候选靶基因,进一步对候选靶基因进行蛋白质互作分析以及KEGG分析,最后将预测的靶基因与课题组前期筛选出的与猪脂肪沉积能力相关的基因取交集。结果表明ssc-miR-133a-5p候选靶基因PPARGC1A与RORA等,参与AMPK,TNF,与胰岛素分泌等信号通路。结果提示ssc-miR-133a-5p的候选靶基因可能通过多种信号通路发挥重要作用。文章的结果可为microRNA参与猪的脂肪生成调节机制提供科学依据。     

hsa-miR-21-5p靶基因预测及生物信息学分析

【目的】试验旨在对hsa-miR-21-5p的序列保守性和靶基因进行生物信息学分析,为进一步探讨其在卵母细胞成熟过程中的功能及调节机制提供思路。【方法】从GEO数据库获取人卵母细胞不同成熟阶段对应的卵丘细胞基因表达谱数据(GSE31681),利用R软件筛选差异表达基因(DEGs),通过FunRich软件预测DEGs的靶向miRNAs,找出hsa-miR-21-5p靶向的DEGs,获得miRNA-mRNA关系对;利用BLAST程序进行相似性比对,通过Mega 11.0软件构建系统进化树,采用ViennaRNA Web Services预测pre-miR-21-5p的二级结构;使用miRTarBase网站预测hsa-miR-21-5p靶基因,并进行GO功能和KEGG通路富集分析;通过STRING数据库建立蛋白质互作网络,并利用Cytoscape软件进行可视化分析。【结果】共筛选出7个卵母细胞成熟过程中GV/MⅡ期对应卵丘细胞中hsa-miR-21-5p靶向的DEGs。对物种间miR-21-5p序列分析发现,人pre-miR-21-5p与小鼠、褐家鼠、黄牛、绵羊、笔尾树鼩、猕猴的相似性均达9...     

冷应激对机体抗氧化功能的影响

抗氧化防御系统是动物机体在进化中形成的完整而复杂的防御系统,包括抗氧化酶[如超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）等],脂溶性的抗氧化剂（如维生素E、辅酶Q等）,水溶性小分子抗氧化剂（维生素C、GSH等）以及蛋白性抗氧化剂（铜蓝蛋白、金属硫蛋白等）等,这些物质在机体清除自     

冷应激引起动物急性死亡的报告

2003年12月上旬，某野生动物园内发现部分马、牛、骆驼、猪、孔雀同时发病和死亡，要求诊治。现将诊治情况报道如下：     

miR-126-5p在沙子岭猪睾丸组织差异表达分析及功能预测

利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测miR-126-5p在沙子岭猪睾丸组织8个不同发育时期(E90、D1、D30、D60、D90、D120、D150、D180)表达量,以了解其在动物睾丸发育及精子生成中的作用。利用miRanda、TargetScan和mirWalk 3个数据库预测miR-126-5p靶基因并取交集,利用David在线软件分析miR-126-5p靶基因的生物功能。结果表明,miR-126-5p在胚胎期(E90-D1)睾丸组织中高表达,而在生长期(D1-D90)表达量下调,但在沙子岭猪性成熟(D120)后表达量又上调,其中D1表达量最高,D90表达量最低,且二者与其他7个时期均差异极显著(P0.01);D30、E90、D180相互之间差异不显著(P0.05),且分别与其余各时期差异极显著(P0.01);D120与D30差异显著(P0.05),与其余各时期差异极显著(P0.01);D150与D60之间差异不显著(P0.05),二者分别与其余各时期差异极显著(P0.01)。miR-126-5p靶基因参与细胞增殖、凋亡、分化、细胞通讯、迁移及蛋白质转运等生物学过程(P0.001);靶基因分子功能包括蛋白二聚体活性、配体依赖性核受体活性(P0.001);KEGG分析显示miR-126-5p靶基因参与TGF-β、MAPK、细胞黏附等信号通路(P0.01)。结合miR-126-5p在睾丸组织不同发育时期表达差异结果及其靶基因功能预测结果,miR-126-5p可能参与沙子岭猪生殖细胞分化及精子生成调控,本研究为miR-126-5p在动物精子生中的作用及其调控机制的研究提供依据。     

布鲁氏菌介导的mmu-miR-671-5p的靶基因预测与功能富集性分析

为进行布鲁氏菌介导的mmu-miR-671-5p的靶基因预测,本试验利用布鲁氏菌(Brucella)感染RAW264.7细胞后,分别运用miRanda和TargetScan软件进行差异表达的mmu-miR-671-5p靶基因的预测,预测的靶基因分别有11 953和9 252个,将预测结果取交集进行韦恩(Venn)分析,重叠部分的靶基因有3 681个;利用GO与KEGG进行功能富集性分析,再利用PicTar软件进一步对mmu-miR-671-5p的靶基因进行预测,将预测结果与Venn分析结果进一步取交集,结果显示,mmu-miR-671-5p的预测靶基因有7个;实时荧光定量PCR分别验证7个预测靶基因的相对表达量发现,Tnfrsf1b与Tnip1基因相对表达量极显著降低(P0.01);在RAW264.7细胞中转染mmu-miR-671-5p inhibitors,分别验证7个预测靶基因的相对表达量发现,Tnfrsf1b与Tnip1基因的相对表达量极显著升高(P0.01);对mmu-miR-671-5p与Tnfrsf1b和Tnip1的3′非翻译区(3′UTR)结合靶位点分别进行预测,结果初步表明,mmu-miR-671-5p的靶基因为Tnfrsf1b与Tnip1,其预测结合靶位点均只有1个,分别位于Tnfrsf1b和Tnip1 3′UTR全长位置的91和305 bp。本研究结果为进一步揭示mmu-miR-671-5p在布鲁氏菌感染RAW264.7细胞过程中的功能提供科学依据。     

布鲁氏菌介导的mmu-miR-671-5p的靶基因预测与功能富集性分析

为进行布鲁氏菌介导的mmu-miR-671-5p的靶基因预测,本试验利用布鲁氏菌（Brucella）感染RAW264.7细胞后,分别运用miRanda和TargetScan软件进行差异表达的mmu-miR-671-5p靶基因的预测,预测的靶基因分别有11 953和9 252个,将预测结果取交集进行韦恩（Venn）分析,重叠部分的靶基因有3 681个;利用GO与KEGG进行功能富集性分析,再利用PicTar软件进一步对mmu-miR-671-5p的靶基因进行预测,将预测结果与Venn分析结果进一步取交集,结果显示,mmu-miR-671-5p的预测靶基因有7个;实时荧光定量PCR分别验证7个预测靶基因的相对表达量发现,Tnfrsf1b与Tnip1基因相对表达量极显著降低（P<0.01）;在RAW264.7细胞中转染mmu-miR-671-5p inhibitors,分别验证7个预测靶基因的相对表达量发现,Tnfrsf1b与Tnip1基因的相对表达量极显著升高（P<0.01）;对mmu-miR-671-5p与Tnfrsf1b和Tnip1的3'非翻译区（3'UTR）结合靶位点分别进行预测,结果初步表明,mmu-miR-671-5p的靶基因为Tnfrsf1b与Tnip1,其预测结合靶位点均只有1个,分别位于Tnfrsf1b和Tnip1 3'UTR全长位置的91和305 bp。本研究结果为进一步揭示mmu-miR-671-5p在布鲁氏菌感染RAW264.7细胞过程中的功能提供科学依据。     

L-精氨酸对冷应激仔猪生长性能、免疫功能及肝脏、肾脏中肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ基因表达量的影响

本试验旨在研究L-精氨酸(L-Arg)对冷应激仔猪生长性能、免疫功能及肝脏、肾脏中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)基因表达量的影响。试验采用双因素有重复完全交叉析因试验设计,选择26日龄断奶、体重[(7.48±0.47) kg]相近的"杜×长×大"三元杂交仔猪72头,按体重和性别完全随机分为6组,每组6个重复,每个重复2头猪,分别接受2个温度(适温23～27℃、低温14～18℃)和3个L-Arg添加量(0、0.8%、1.2%)的交叉处理。试验期21 d。结果显示:1)温度(P=0.006)和L-Arg(P=0.027)对仔猪平均日增重有显著影响,二者交互作用能显著提高仔猪平均日增重(P=0.047);温度和L-Arg及二者交互作用对仔猪平均日采食量均没有显著影响(P0.05);温度(P=0.031)和L-Arg(P=0.037)均对料重比有显著影响,二者交互作用对料重比的影响不显著(P=0.269)。2)温度和L-Arg对仔猪胸腺重量和脾脏重量均有显著影响(P0.05),二者交互作用对胸腺重量的影响不显著(P=0.352),但对脾脏重量有显著影响(P=0.026)。3)温度和L-Arg的交互作用对血清免疫球蛋白(Ig) A (P=0.049)、IgM (P=0.021)和IgG (P=0.015)含量有显著影响。4)温度和L-Arg的交互作用对肝脏中IFN-γ基因表达量有显著影响(P=0.018),对肾脏中TNF-α和IFN-γ基因表达量无显著影响(P0.05)。结果提示,饲粮中添加适量L-Arg可以改善冷应激仔猪的生长性能,提高其机体免疫功能。     

镉及α-硫辛酸对大鼠肝脏GJIC功能的影响

为探讨镉及α-硫辛酸(α-LA)对大鼠肝细胞缝隙通讯功能(GJIC)的影响,将30只100g左右SD雌性大鼠随机均分为3组:对照组(自由饮水及超纯水灌胃)、镉组(50mg/L醋酸镉自由饮水及超纯水灌胃)、镉与α-LA共同处理组(50mg/L醋酸镉自由饮水及α-LA灌胃50mg/kg)。12周后,采用荧光染料标记传输示踪法(IL/DT)测定GJIC功能,免疫印迹检测大鼠肝脏中Cx43、p-Cx43、Cx32蛋白表达变化,荧光定量PCR法检测大鼠肝脏中Cx32、Cx26、Cx43mRNA表达量的变化。IL/DT结果显示,大鼠长时间饮用醋酸镉后,肝脏细胞间荧光黄两侧扩散距离极显著减少(P<0.01),α-LA处理后极显著提高(P<0.01)。肝脏中Cx43、p-Cx43、Cx32蛋白表达量呈显著或极显著的降低,Cx43、Cx32、Cx26mRNA转录基因表达也呈显著或极显著的降低(P<0.05或P<0.01),α-LA处理后都有显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。结果表明:长期饮用醋酸镉可以抑制大鼠肝细胞GJIC,可能是连接蛋白或基因表达减少,α-LA能缓解镉对GJIC的影响。     

冷应激大鼠肾上腺组织形态结构变化的研究

以大鼠为试验对象，研究冷应激情况下肾上腺组织结构的变化。结果表明：应激后大鼠肾上腺皮质束状带和网状带宽度显著增高．且分界明显。应激后束状带和髓质细胞数目显著高于常温对照组。球状带细胞数目增多．出现分裂情况；束状带细胞有脱颗粒现象，使细胞呈空泡状；网状带细胞胞质内脂质颗粒少，细胞小；髓质细胞体积增大，胞核大且密集，胞浆染色深。     

L-精氨酸和α-酮戊二酸对热应激肉鸡肝脏功能的影响

试验旨在研究L-精氨酸(Arg)和α-酮戊二酸(AKG)对热应激肉鸡肝脏功能的影响。选用200只1日龄科宝肉鸡,随机分为4个处理组:对照组(基础日粮)、热应激组(基础日粮)、Arg组(基础日粮+0.5%Arg)、AKG组(基础日粮+0.5%AKG),每组5个重复,每个重复10只鸡。试验期5周。结果表明:1与对照组相比,热应激处理降低了肉鸡肝脏相对重量、血液三碘甲状腺原氨酸(T3)和四碘甲状腺原氨酸(T4)含量、肝脏三磷酸腺苷(ATP)、腺苷酸池(TAN)含量及能荷(EC)值(P0.05),同时也降低了肝脏过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)、血红素加氧酶-1(HMOX-1)和黄嘌呤氧化还原酶(XOR)的m RNA水平(P0.05),但提高了血液肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性、皮质酮含量、肝脏丙二醛(MDA)和过氧化氢(H2O2)含量(P0.05);2与热应激组相比,日粮中添加0.5%Arg可提高热应激肉鸡血液T3和T4含量、肝脏ATP含量、肝脏PGC-1α、HMOX-1和XOR的m RNA水平(P0.05),但降低了血液CK活性、皮质酮含量、肝脏H2O2含量及低氧诱导因子1α(HIF-1α)的m RNA水平(P0.05);3与热应激组相比,日粮中添加0.5%的AKG可提高血液T3含量,肝脏相对重量、二磷酸腺苷(ADP)和TAN含量及EC值(P0.05),但降低了血液皮质酮含量、肝脏H2O2含量、一磷酸腺苷(AMP)依赖的蛋白激酶α1(AMPK-α1)和PGC-1α的m RNA水平(P0.05)。因此,日粮中添加0.5%Arg可改善热应激肉鸡肝脏能量代谢状况和抗氧化能力,提高肉鸡抗热应激能力,而0.5%AKG能改善热应激肉鸡肝脏的能量代谢状况和提高肝脏相对重量。     

冷应激对雏鹌鹑法氏囊抗氧化功能的影响

正寒冷是北方地区畜牧生产普遍面临的应激源。冷应激可以引起畜禽尤其是幼畜或仔畜的神经内分泌系统紊乱、免疫机能下降、抗氧化功能受损、生产性能下降,甚至死亡~([1])。鹌鹑是一种高产高效的特禽,根据其生物学特性,鹌鹑在饲养过程中对环境温度的要求相对严格,尤其是育雏期的温度比较高,更容易