Ghrelin和SHU9119通过促进CART神经元调节小鼠采食

为研究Ghrelin和SHU9119如何作用于小鼠下丘脑可卡因和苯丙胺转录调节因子(CART)神经元参与小鼠采食调控,本试验以免疫荧光技术为主,利用代谢笼和冰冻切片的方式获取试验材料,综合小鼠采食量测定,CART神经元表达数目的统计学分析,及CART神经元、刺鼠相关蛋白(AgRP)神经元同黑皮质素4型受体(MC4R)神经元间共定位信息,对Ghrelin和SHU9119通过不同方式介导CART神经元以参与小鼠采食调控这一作用机理进行初步阐述。结果显示:健康4周龄C57BL/6雄性小鼠,腹腔注射Ghrelin(50μg/kg,n=3)后,其下丘脑背内侧核(DMH)区域CART神经元表达数目显著上升(P0.05);而SHU9119(50μg/kg,n=5)则显著促进弓状核(ARC)区域的CART神经元的表达(P0.01),2种药物促进CART神经元表达的部位并不相同。同时,2种药物的单独注射均可对小鼠采食活动产生一定的促进作用(Ghrelin组n=7;SHU9119组n=7)。有趣的是,CART神经元在DMH区域同AgRP神经元之间具有突触联系,而CART神经元与表达MC4R的神经元之间的共表达关系则发生在ARC区域。结合已有的研究证据,我们推测Ghrelin和SHU9119可能通过不同方式参与对CART神经元表达的调节,并最终影响小鼠采食活动。期望通过本研究为今后进一步探明外周信号分子如何参与促厌食神经元对机体能量代谢调控提供新的思路和证据。     

绵羊下丘脑神经元细胞培养与鉴定

通过改良神经元细胞体外培养体系,建立一种高效、可行的绵羊下丘脑神经元体外培养方法,为研究绵羊神经内分泌调节体系及季节性发情机理奠定基础。通过Ⅳ型胶原酶将90 d左右的胎羊下丘脑组织消化成单细胞悬液,接种到预先用多聚赖氨酸包被的培养皿中,2 d后更换为无血清培养基进行培养,并采用两种方法对神经元细胞进行鉴定。结果显示:培养2 d的下丘脑神经细胞,胞体较小且单个独立分布。培养4~6 d神经元的突起明显增多增长,神经元胞体变大。培养8 d的神经元细胞更加成熟,突起联系更加紧密,形成密集的神经细胞网络。培养12 d后,下丘脑神经元细胞活性减弱,部分细胞开始凋亡。通过RT-PCR检测发现,培养的下丘脑细胞能够表达神经元特异基因Noggin、TUBA4A,经免疫荧光鉴定下丘脑神经元细胞纯度为95.6%。这些结果表明,通过此细胞培养方法能够获得纯度较高的绵羊下丘脑神经元细胞,为进一步研究绵羊神经内分泌调节体系及季节性发情机理提供目标细胞。     

营养状况对樱桃谷鸭下丘脑神经肽Y的影响

为了探讨营养状况对家禽下丘脑神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)的影响,选用来自同一父母代的樱桃谷鸭为研究对象,按营养状况分成4组对照组(Ⅰ组)、低蛋白组(Ⅲ组)、低能量组(Ⅳ组)和禁食组(Ⅱ组),测定了各组血清总蛋白、甘油三酯的含量,从生化指标上进一步确定了其营养状况的差别;并采用免疫细胞化学ABC法结合计数法,定性定量地观察和比较了在不同营养状况下下丘脑NPY阳性神经元胞体的变化.结果显示(1)Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组视上核与下丘脑外侧核内NPY样免疫反应比Ⅰ组显著增强,表现为NPY阳性神经元胞体数目增多,密度增高;(2)Ⅱ组螺旋外侧核和顶盖前核内有少量的NPY阳性神经元胞体,而其他组未观察到此现象.计数法分析进一步从量的角度证实了上述差异的显著性下丘脑外侧核和视上核NPY阳性神经元胞体数,Ⅱ组平均为(48.10±2.17)个/片,Ⅲ组平均为(39.70±1.68)个/片,Ⅳ组平均为(40.45±1.57)个/片,Ⅰ组平均为(18.05±1.37)个/片.经方差分析发现,除Ⅲ组与Ⅳ组差异不显著(P＞0.05)外,其他组间差异极显著(P＜0.01).上述结果表明,营养状况对樱桃谷鸭下丘脑神经肽Y有显著影响,且影响的主要部位在视上核和下丘脑外侧核,禁食、低蛋白和低能量均能使樱桃谷鸭下丘脑NPY神经元胞体数显著增加,其中能量与蛋白质对樱桃谷鸭NPY合成与释放的影响无显著差异.     

Orexin B在猪中枢神经系统的分布定位

本试验采用免疫组织化学方法对10头苏钟猪中枢神经系统Orexin B的分布定位进行了研究。结果表明,Orexin B免疫阳性神经元和纤维在猪下丘脑、脑干和脊髓均有分布。在下丘脑,阳性神经元和纤维分布于视前区、视交叉上核、室旁核、室周核、背内侧核、穹隆周核、乳头体核、外侧区和后区,其中以穹隆周区、背内侧核、未定带和下丘脑后区分布较密集,以视前区、视交叉上核、下丘脑外侧区和乳头体核分布较稀少。在脑干,阳性神经元分布于蓝斑、前庭神经核、下橄榄核、孤束核和疑核。在脊髓,阳性神经元较少,主要分布于颈部脊髓背角第Ⅳ层。此外,在斜角带、隔区、终纹床核等部位观察到密集的阳性纤维分布。本试验为进一步研究Orexin B的生理功能奠定了基础。     

褪黑素受体基因MTR1在绵羊生殖轴系的表达定位

褪黑素(Melatonion,MT)通过分布于生殖系统不同部位的褪黑素受体(Melatonin receptor,MTR)来调节动物的生殖活动。研究褪黑素受体1型(MTR1)在繁殖期与非繁殖期动物生殖系统不同组织的分布和表达对于了解动物的生殖活动规律以及褪黑素对动物生殖活动的调节机制具有重要意义。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blotting,WB)和免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)等方法研究了MT1在绵羊繁殖期与非繁殖期生殖轴系不同部位分布和表达情况。HE染色结果表明,各组织都呈现了正常的细胞形态;IHC结果表明,MTR1在绵羊繁殖期与非繁殖期卵巢和睾丸组织中均有表达,其中繁殖期绵羊卵巢组织中颗粒细胞表达信号较强;qRT-PCR和WB法结果均表明,绵羊在繁殖期附睾组织中MTR1的相对表达量极显著高于其他组织(P0.01),在非繁殖期下丘脑组织中MT1的相对表达量极显著高于其他组织(P0.01)。综上,MT在绵羊繁殖期与非繁殖期生殖轴系不同部位均有表达并存在显著差异,为进一步探讨MTR在绵羊生殖轴系中的作用机制提供了科学的数据参考。     

青年期广西本地水牛下丘脑催产素的免疫组化定位

为研究青年期广西本地水牛催产素能神经元的表达特点,试验采用免疫组织化学技术中的PicTureTM二步法对广西本地水牛催产素神经元的定位及分布进行了研究.结果表明:下丘脑分泌催产素的神经元主要分布在室旁核、视上核和弓状核,在视前内侧核、视交叉上核、下丘脑前核、下丘脑后核、背内侧核、腹内侧核和乳头体核等核团也有一定数量的阳性神经元;阳性神经纤维仅见于室旁核、弓状核、乳头体核,在正中隆起第三脑室室管膜附近有较多数量的阳性神经纤维.观察结果提示:下丘脑催产素经神经垂体、第三脑室、血管3条途径释放;不同种属动物下丘脑催产素存在差异.     

黑皮质素4型受体在绵羊下丘脑区域的定位

黑皮质素4型受体(melanocortin 4 receptor,MC4R)作为下丘脑参与能量调控过程中的关键性受体,在动物能量代谢调节中被广泛关注。目前,关于该受体在绵羊下丘脑中分布区域的相关报道较少。针对试验过程中MC4R免疫荧光结果不稳定,分布区域不明显的特点,本研究在改进现有MC4R免疫荧光试验方法基础上,对MC4R在绵羊下丘脑的分布区域进行了观察。结果显示,分别经过4%多聚甲醛长时间固定(6 d),Triton X-100(pH≈8.68)长时间通透(2 d),以及3%过氧化氢和0.2 mol/L甘氨酸+0.3%SDS+20%甲醇的预处理后,可以获得稳定且饱满的MC4R免疫荧光结果。MC4R主要分布在绵羊下丘脑的室旁核(arcuate nucleus,ARC)区域,但在弓状核区域并无类似分布。     

绵羊附睾褪黑素受体1的表达与定位

为研究褪黑素受体1(MT1)在不同年龄绵羊附睾中的表达模式,选用幼龄绵羊(2~3月龄)、青年绵羊(6~8月龄)和成年绵羊(2~3岁)的附睾,采用实时荧光定量PCR和免疫组化技术检测不同年龄绵羊附睾各部位MT1基因mRNA的表达量和MT1的分布情况。结果表明:幼龄绵羊附睾尾MT1基因的转录水平极显著高于附睾头和附睾体(P0.01);青年绵羊附睾体和附睾尾MT1基因的转录水平显著高于附睾头(P0.05);成年绵羊附睾尾MT1基因的转录水平显著高于附睾头和附睾体(P0.05),附睾各部位MT1基因的转录水平随年龄增长呈明显降低趋势;定位结果显示,MT1在各年龄组绵羊附睾的各个部位均有分布,且主要分布在附睾上皮细胞中。综合上述结果,不同年龄绵羊附睾的不同部位均有MT1表达和分布,并随年龄增长各部位的表达量降低,相同年龄绵羊附睾尾MT1的表达水平较高。     

去卵巢及雌激素替代治疗后家兔海马nNOS阳性神经元的形态结构及分布变化

用SABC免疫组织化学技术,观察家兔海马各区nNOS阳性神经元在去卵巢及雌激素替代治疗后的形态结构及分布变化,为雌激素类药物防治绝经后老年性痴呆症提供理论依据。结果表明,家兔海马各区都有nNOS阳性神经元分布;去卵巢后海马nNOS阳性神经元的形态结构及分布变化有区域差异性:与假手术对照组相比,在海马CA1区、CA3区、齿状回(DG)阳性神经元数量明显减少(P0.05),而在CA2区数量明显增多(P0.05)。CA1、CA3区和DG的阳性神经元胞体截面积明显变小,最长突起长度明显变短,第一级突起数变少,与假手术组有显著差异(P0.05)。CA2区阳性神经元胞体截面积明显变小(P0.05),最长突起长度、第一级突起数增多,但差异不显著(P0.05);nNOS阳性神经元的4种指标在雌激素替代治疗组与假手术组之间无显著差异(P0.05)。结果提示:雌激素可能通过影响海马nNOS的表达来影响脑的学习和记忆功能。     

绵羊GnIH和VIP基因在不同繁殖状态下的表达变化

旨在进一步阐明GnIH和VIP基因在绵羊季节性发情和繁殖调控中的作用。本研究选取短光照(模拟繁殖季节)和长光照(模拟休情期)下成年苏尼特母羊各3只及卵泡期和黄体期的小尾寒羊母羊各3只,同时选取短光照第21天和长光照第3、15、21、42、49天共6个不同光照时间点的成年苏尼特母羊各3只,屠宰后采集其性腺轴组织(下丘脑、垂体、松果体、卵巢、输卵管、子宫体),利用qPCR技术分析GnIH和VIP基因mRNA表达规律。结果表明,GnIH和VIP基因在2个绵羊品种上述各组织中均表达,且在下丘脑中的表达量较高;苏尼特羊下丘脑中2个基因在长光照条件下的表达量均极显著高于短光照条件(P<0.01);在小尾寒羊下丘脑组织中,黄体期VIP基因的表达量显著高于卵泡期(P<0.05),黄体期GnIH基因的表达量稍高于卵泡期,但差异不显著(P>0.05)。由短光照转至长光照时,苏尼特羊下丘脑中GnIH和VIP基因表达上升,至长光照第3天时,2个基因表达均达到峰值,之后呈下降趋势。本研究揭示了GnIH和VIP基因在季节性发情和常年发情成年绵羊性腺轴各组织中的定量表达特征,不同光照条件和不同繁殖时期绵羊下丘脑中这2个基因的表达变化进一步提示了GnIH和VIP基因参与绵羊季节性发情调控和发情时期转换;在短光照转至长光照过程中,GnIH和VIP基因主要在长光照前3 d发挥关键作用。     

催产素免疫反应神经元在鸡下丘脑的定位——PAP法研究

应用免疫组化PAP法(非标记抗体过氧化物酶-抗过氧化物酶法)研究了鸡下丘脑催产素(Oxytocin,OT)免疫反应阳性神经元的分布.结果,OT阳性神经元存在于下丘脑室旁核各亚核、视前室旁核、视上核、视前大细胞核、下丘脑外侧核、室周核、室周弓状核,在下丘脑背侧区、视前外侧区和丘脑背外侧核也有零星的OT阳性神经元,视上背侧交叉和正中隆起存在大量的OT阳性纤维和纤维末梢.此外,还观察到视前区和下丘脑前部脑基底表面以及视上核的外缘有OT阳性神经元和纤维(?)达脑的外表,在第三脑室室管膜上存在OT阳性神经元,室旁核的OT阳性细胞突起伸入到室管膜上或突出于第三脑室室腔。结果表明,OT阳性神经元在下丘脑的分布较广泛,OT向脑脊液的释放可能是多途径的.     

高原地区成年藏绵羊和小尾寒羊附睾组织中eNOS差异表达研究

采用免疫组化SP法结合IPP统计分析法,比较高原地区成年藏绵羊和小尾寒羊附睾组织中eNOS的定位及分布特征。平均光密度数据统计表明,eNOS的平均光密度值在藏绵羊附睾尾部显著高于附睾头和附睾体(P0.05),藏绵羊附睾头和附睾体之间无显著差异(P0.05),但在小尾寒羊附睾体显著高于附睾头(P0.05)。小尾寒羊附睾体的平均光密度值显著高于藏绵羊(P0.05),附睾头和附睾尾之间无显著差异(P0.05)。结果表明,eNOS的活性在附睾尾部最高,提示NO与精子运输相关,对于高原地区不同品种绵羊附睾中eNOS分布较大差异的原因尚需深入研究。     

绵羊季节性繁殖的神经内分泌研究进展

季节性繁殖是动物适应自然环境变化的一种策略,通过在合适的时间繁殖来保证后代的存活和生长,GnRH神经元对雌激素负反馈响应的显著变化是调节季节性繁殖的主要原因。近年来,科学家对绵羊季节性繁殖的神经和神经内分泌调控进行了大量研究,主要集中在下丘脑褪黑激素及相关神经元的活动。本文综述了绵羊季节性繁殖的传入信号和神经通路,简要比较了绵羊和仓鼠季节性繁殖的相关研究,为绵羊季节性繁殖神经机制研究提供参考。     

狂犬病病毒固定株感染对微管结合蛋白EB3表达的影响

为研究末端结合蛋白RP/EB家族成员3(EB3)在狂犬病病毒(RABV)感染引起大鼠神经元细胞骨架发生明显改变过程中的变化情况,本研究采用RABV固定株CVS感染大鼠原代神经元细胞,从转录及翻译水平分别对EB3进行检测,并通过免疫荧光观察EB3在神经元细胞内的分布变化。结果显示,病毒感染6 h后,EB3转录和翻译水平有明显下调,EB3分布呈突起向胞体集中趋势,表明病毒可能通过对微管结合蛋白EB3的下调,使细胞骨架的稳定性降低。本实验结果为进一步研究RABV引起的神经元退行性病变机制奠定了基础。     

绵羊Otx-2基因的分子克隆、组织表达及其与季节性繁殖关系的研究

旨在研究绵羊Otx-2基因与绵羊繁殖的关系,从阿勒泰绵羊下丘脑组织中克隆Otx-2及MT1、KISS-1、GnRH基因CDs(Coding region)区部分序列,采用RT-PCR分析了这些基因在心、肝、脾、肺、肾、大肠、小肠、胃、大脑、小脑、子宫、垂体、松果体、下丘脑和甲状腺组织中的表达差异;进一步用实时荧光定量PCR方法分析繁殖期和繁殖间期绵羊下丘脑中这些基因在日间和夜间表达的变化规律。结果表明,Otx-2和KISS-1、MT1基因在各组织中均有不同程度的表达,其中Otx-2和KISS-1在下丘脑中的表达量较高。Otx-2基因与KISS-1和GnRH基因在繁殖期的表达量均高于繁殖间期的表达量,且均表现出夜间的表达量极显著高于日间表达量的相似表达规律,综上表明,Otx-2基因可能参与绵羊的季节性繁殖调控。     

促性腺激素释放激素在妊娠牦牛下丘脑主要核团中的表达

为了研究促性腺激素释放激素(GnRH)在妊娠期牦牛下丘脑主要核团中的表达,研究其与牦牛妊娠期调控的关系。运用免疫组化ABC法和图像分析软件Image-Pro Plus 6.0对妊娠期牦牛下丘脑主要核团中GnRH的表达情况进行研究。结果表明:在下丘脑中,GnRH神经元主要分布在下丘脑前核(AH)、乳头体内侧核(MMN)、腹内侧核(VMN)、弓状核(ARC)和室旁核(PVN)等核团。在核团间,GnRH阳性产物的表达面积(S)及累积光密度(IOD)值存在差异,(SAHSMMNSVMNSARCSPVN和IODAHIODMMNIODVMNIODARCIODPVN);妊娠期的表达量高于非妊娠期的,推测这些核团中的GnRH神经元对妊娠期激素的调控发挥重要作用。     

MC4R在小鼠下丘脑的定位及其基因在发情周期下丘脑、卵巢中的表达变化

黑素皮质素受体-4(Melanocortin-4 Receptor,MC4R)在参与调节摄食行为和机体能量平衡中发挥重要作用,但其在生殖活动中的作用尚不明确。为此本实验以不同发情周期中的C57小鼠为对象,利用免疫荧光对MC4R神经元在下丘脑的表达进行定位。通过Western Blot确定MC4R在小鼠发情前期、发情期、发情后期和间情期的下丘脑和卵巢中蛋白表达变化。结果表明:MC4R神经元广泛分布于下丘脑第三脑室,发情期下丘脑中MC4R蛋白表达量显著低于其他3个时期(P0.05);同时期卵巢中MC4R蛋白表达量显著低于发情前期和发情后期(P0.05),发情后期MC4R蛋白表达量极显著高于其他3个时期(P0.01)。这一结果阐明了小鼠在发情周期不同阶段下丘脑和卵巢组织中MC4R的表达变化规律,为进一步研究MC4R在小鼠生殖活动中的作用提供理论基础。     

澳杜湖杂交绵羊生长发育性能及血液生理生化指标测定

为研究澳杜湖杂交绵羊生长发育情况及其对当地生态环境的适应能力,采用常规测定、显微测定和全自动血液生理生化分析仪分析等方法,分别测定了不同年龄羊的体重、体尺、羊毛品质(包括净毛率和不同部位的羊毛的细度、有髓毛和无髓毛占比、自然和伸直长度)等指标和成年羊血液26项生理生化指标。结果表明,澳杜湖杂交绵羊早期生长速度快,初生阶段公母羊体斜长差异显著(P0.05),成年时期公母羊体重差异显著(P0.05),成年公羊平均体重为87.4 kg,成年母羊平均体重为78.7 kg,在其余各生长阶段内,公母羊之间体重及体尺差异不显著(P0.05)。该杂交羊毛平均净毛率在60%以上,平均自然长度为(3.05±1.50)mm,伸直长度为(4.60±2.62)mm,细度较为适中(33.60±1.97)μm。血液生理生化指标测定值在公母羊之间比较、以及同国内绵羊参考值相比较均存在一定的差异。白细胞、淋巴细胞、中间细胞和红细胞压积高于国内绵羊参考值;中间细胞比率和平均血红蛋白含量低于国内绵羊参考值;红细胞总数、血红蛋白、红细胞平均体积和血小板体积均在国内绵羊参考值范围内;谷丙转氨酶、谷草转氨酶、胆固醇和血糖含量高于国内绵羊参考值;肌酐、尿素氮和总蛋白含量低于国内绵羊参考值;白蛋白含量在国内绵羊参考值范围内;公母羊之间比较,淋巴细胞比率和血小板压积差异显著(P0.05),粒细胞、粒细胞比率和血小板总数差异极显著(P0.01),其余各项生理生化指标均无显著差异(P0.05)。测定结果表明,澳杜湖杂交绵羊在生长发育性能等方面都有不同程度的改善和提高,测定的羊毛品质和血液生理生化等相关指标,均为该品种羊进一步开发利用提供参考依据。