吉林株犬新孢子虫的分离与鉴定

将疑似感染犬新孢子虫而流产的牛胎儿脑组织接种于Vero细胞进行体外培养,同时感染长爪沙鼠进行动物试验.提取牛流产胎儿脑组织DNA、沙鼠脑组织DNA、细胞培养虫体DNA,用犬新孢子虫特异性引物进行PCR扩增.结果显示,PCR扩增出了1条约为681 bp的目的条带;测序结果表明,扩增出的特异性目的基因序列与GenBank中发表的犬新孢子虫NcSAG1基因(AF113004)核苷酸序列的同源性为99.4%.结果表明,在吉林省牛流产胎儿脑组织中分离出犬新孢子虫.     

犬新孢子虫和新孢子虫病的综述

犬新孢子虫病是一种原生动物性疾病,它主要引起牛和狗发病。驯养狗是已知的唯一犬新孢子虫的终末宿主。本文将在生物学,诊断,流行病学和动物新孢子虫病的控制等方面进行综述。     

犬的犬新孢子虫心肌炎性猝死

犬新孢子虫和刚地弓形虫形态学相似。新孢子虫病可引起犬上行性瘫痪、衰弱、吞咽困难、多发性肌炎、心肌炎、皮炎和死亡。胎盘感染是唯一被证实的大新孢子虫感染的传播方式。     

犬的犬新孢子虫心肌炎性猝死

犬新孢子虫和刚地弓形虫形态学相似。新孢子虫病可引起犬上行性瘫痪、衰弱、吞咽困难、多发性肌炎、心肌炎、皮炎和死亡。胎盘感染是唯一被证实的犬新孢子虫感染的传播方式。     

犬新孢子虫和刚地弓形虫超微结构的比较

使用透射电镜，对从犬获得的三株犬新孢子虫分离株的感染培养细胞的速殖子超微结构进行检查。三个分离株的超微结构相似，速殖子具有一个表膜、２２个表膜下微管、一个类椎体，前后均有极环，８—１２个电子致密对式细胞器、大量微丝、一个单在泡状核、管状线粒体、高尔基复合体、核糖体、内质网、一个无活性的微孔、电子致密体、脂质体和技链淀粉体。大多数速殖子寄生在靠近宿主细胞核寄生性空泡中，它含有大量内空泡管。速殖子以内出芽形式分裂。没有观察到犬新孢子虫组织包囊。犬新孢子虫和刚地弓形虫的速殖子可根据对式细胞器的结构和数量、微丝和电子致密体的数量和位置予以区别。     

犬新孢子虫和刚地弓形虫超微结构的比较

使用透射电镜，对从犬获得的三株犬新孢子虫分离株的感染培养细胞的速殖子超微结构进行检查，三个分离株的超微结构相似，速殖子具有一个表膜、２２个表膜下微管、一个类椎体、前后均有极环、８－１２个电子致对式细胞器、大量微丝，一个在泡状核，管状线粒体，高尔基复合体，核糖体、内质网，一个无活性的微孔、电子致密体，脂质体和技链淀粉体。大多数速殖子寄生在靠近宿主细胞核寄生性空泡中，它含有大量内空泡管，速殖子以内出芽     

犬新孢子虫吉林株SAG1基因在BHK21细胞中的表达及免疫学评价

将构建成功的重组质粒pVAX-SAG1转染至BHK21细胞上,通过IFAT与RT-PCR方法检测重组质粒在BHK21细胞上的表达情况。大量提取重组质粒pVAX-SAG1,免疫Balb/c小鼠,分别在首免前、二免前、三免前以及三免后的第1、2、3周进行小鼠断尾采血,应用ELISA方法与流式细胞技术检测体液免疫水平和细胞免疫水平。结果表明,转染的重组质粒pVAX-SAG1在BHK21细胞中得到瞬时表达,并且重组质粒pVAX-SAG1免疫Balb/c小鼠后,在体液免疫水平上,pVAX-SAG1组与空载体pVAX1和PBS对照组差异极显著（P〈0.01）;在细胞免疫水平上,pVAX-SAG1组与PBS对照组差异显著（P〈0.05）。本试验为新孢子虫基因工程核酸疫苗的进一步研究奠定了基础。     

牛源犬新孢子虫MAG1基因的克隆及在Vero细胞中表达

为了解牛源犬新孢子虫MAG1基因的生物学特性,本实验应用PCR技术扩增牛源犬新孢子虫MAG1基因,构建真核表达重组质粒pVAX-MAG1,将鉴定正确的pVAX-MAG1重组质粒转染Vero细胞,应用间接荧光检测方法(1FA)和western blot技术检测MAG1基因在Vero细胞中的表达.结果显示,扩增的牛源犬新孢子虫MAG1基因长度为1047bp,与GenBank中登录的MAG1 (EF580924.1)核苷酸序列同源性为99％,IFA检测MAG1基因在Vero细胞中获得瞬时表达,western blot分析表达蛋白的分子量为39 ku,具有较好的反应原性.本实验为新孢子虫病核酸疫苗与诊断试剂盒的研究奠定了基础.     

犬新孢子虫抗原的研究进展

犬新孢子虫是专门寄生于细胞内的复顶门原生动物寄生虫。犬新孢子虫病给养牛业造成了严重的经济损失,全球已有很多国家检测有新孢子虫病,该病主要的传播方式是胎盘传播和接触传播。目前尚无有效的治疗药物和疫苗来控制该病的发生和发展,疫苗的研究是当前研究新孢子虫病的热点问题,而抗原的研究是研究犬新孢子虫病疫苗的基础。目前国内外研究主要集中在表面抗原、微线抗原及致密颗粒抗原,现综述如下。     

细胞因子在犬新孢子虫感染中的作用

犬新孢子虫是一种专一性细胞内寄生虫，它的感染导致了宿主Th细胞的分化。一方面，刺激宿主产生Th1型细胞因子反应，这些细胞因子包括IL-12、IFN-7和INF-α。Th1型细胞因子反应同时还激活了产生氧自由基（FOR）、一氧化氮（NO）及其代谢物，这些细胞因子对犬新孢子虫均具有致命的杀伤力。另一方面，引发宿主产生IL-4、IL-5和IL-10等Th2型细胞因子，Th2型细胞因子主要在宿主妊娠过程中发挥作用。     

犬新孢子虫病研究近况

新孢子虫病属于侵害神经一肌肉的疾病,其特征是渐进型麻痹(多在小狗)和不全麻痹.在自然条件下,未曾遇见猫罹患本病,仅见于实验感染例案.病原体是Neospora caninum属于Protozoa界Api-complexa门Coccidia纲,是一种细胞内的寄生虫病.1984年在挪威首次分离到该病原体.终末宿主是狗,中间宿主是牛、绵羊、山羊、鹿、印度水牛、郊狼、红狐和骆驼.实验感染的动物有猪、砂土鼠、猫、小鼠、家鼠、猿猴等.在动物体内新孢子虫存在两种无性类型:弓形体和孢囊.前者大小6×2μm,定位于寄生型空泡中或者神经细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、肾小管上皮细胞、肝细胞等;后者呈圆形或卵园形,大小达107μm,定位于大脑和脊髓的细胞之中.     

湟中县藏羊群中犬新孢子虫病的调查

<正>犬新孢子虫(Neospora caninum)是原生动物顶器门的一种原生动物寄生虫,它最早是在一条发生瘫痪的狗身上被确诊的。N.Caninum首次在羊上确诊是在英国。近年来,湟中地区的部分放牧藏羊群中出现数量不等的流产病例,为了查明该地区藏羊群中N.Caninum的流行情况,在本调查中进行了ELISA     

湟中县藏羊群中犬新孢子虫病的调查

<正>犬新孢子虫(Neospora caninum)是原生动物顶器门的一种原生动物寄生虫,它最早是在一条发生瘫痪的狗身上被确诊的。N.Caninum首次在羊上确诊是在英国。近年来,湟中地区的部分放牧藏羊群中出现数量不等的流产病例,为了查明该地区藏羊群中N.Caninum的流行情况,在本调查中进行了ELISA     

犬新孢子虫SRS9基因真核重组质粒的构建及在Vero细胞中表达

为构建犬新孢子虫NcSRS9基因真核表达重组质粒,了解NcSRS9表面蛋白基因的生物学特性及其体外表达情况。本试验应用PCR技术获得目片段,构建克隆质粒pMD18-NcSRS9,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后构建真核表达重组质粒pVAX1-NcSRS9,利用脂质体介导法转染至Vero细胞,以间接免疫荧光方法(IFAT)检测NcSRS9基因在Vero细胞中的表达。结果显示,犬新孢子虫表面蛋白基因NcSRS9基因长度为1 191bp,与GenBank中(EF440644.1)发表的基因核苷酸序列同源性为99%,IFAT检测NcSRS9基因在Vero细胞中获得瞬时表达,为核酸疫苗研究奠定了基础。     

犬新孢子虫吉林株SAG1基因真核表达载体的构建

根据GenBank中已发表的犬新孢子虫SAG1基因序列(AF132217),设计了一对含有Kozak序列、起始密码子、终止密码子、BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的引物。以含有SAG1基因的重组质粒pMD-18T-SAG1为模板,经PCR扩增获得SAG1基因,利用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切该片段,回收含有BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点粘性末端的SAG1基因片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的pVAX1真核表达载体中,获得重组质粒pVAX1-SAG1,经PCR鉴定、酶切分析和重组质粒的序列测定、比较,证实了重组质粒的正确性。     

犬新孢子虫Nc-GFP株对BALB/c小鼠的人工感染试验

为了解犬新孢子虫Nc-GFP株的生物学特性,本试验采用Vero细胞培养的犬新孢子虫速殖子,腹腔接种BALB/c小鼠,观察小鼠的临床症状及发病情况,脱颈处死濒死期小鼠,无菌分离小鼠脑组织,接种Vero细胞进行连续培养,并提取脑组织DNA进行NcMAG1基因的PCR鉴定。结果显示:BALB/c小鼠接种犬新孢子虫Nc-GFP株速殖子后,先后出现被毛逆立、共济失调等临床症状;小鼠脑组织接种Vero细胞14 d后,在荧光显微镜下观察到绿色荧光的犬新孢子虫Nc-GFP株速殖子和包囊;小鼠脑组织经NcMAG1基因的PCR检测,扩增出1 047 bp的目的基因条带,经测序与GenBank中发表的NcMAG1(EF580924.1)核苷酸序列的同源性为99.6%。本试验成功地从BALB/c小鼠脑组织中分离出了犬新孢子虫Nc-GFP株,为Nc-GFP株生物学特性的深入研究奠定了基础。     

弓形体RH株在3种传代细胞中增殖情况的比较

为建立有效适用的弓形体体外培养方法,本试验利用Vero、PK15、RK13 3种传代细胞和DMEM、MEM、RPM I1640三种培养液分别对RH株弓形体速殖子进行培养,并比较了虫体的增殖和活力情况。结果显示,利用Vero细胞DMEM培养液培养弓形体速殖子,虫体增殖快、活力强,是理想的培养方法。     

郑州市奶牛场犬新孢子虫血清学调查

犬新孢子虫是一种细胞内专性寄生的原虫,由新孢子虫属犬新孢子虫引起的多种家畜的一种原虫病,主要感染牛和犬,引起牛的流产和新生儿的死亡,已成为畜牧业生产中主要问题,犬新孢子虫病是引起牛流产的主要原因[1],对奶牛的危害严重,是一种世界范围内分布的致病性原虫[2-4],目前欧洲、美洲和亚洲等30多个国家报道有奶牛犬新孢子虫病发生,我国一些省份如吉林、新疆和青海等也陆续