诊断兔豆状囊尾蚴病的阻断ELISA方法的建立和初步应用

为了提高对兔豆状囊尾蚴病的血清学诊断率,本研究用纯化的63 000囊液蛋白免疫BALB/c小鼠,获得了高效价一抗,再用63 000囊液蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗,通过对各种试验条件的优化,建立了特异诊断兔豆状囊尾蚴病的阻断ELISA方法。结果显示,63 000囊液蛋白最佳包被浓度是5mg/L;一抗最佳稀释度为1∶800;最佳封闭时间是37℃3h;二抗最佳稀释度为1∶5 000,最佳反应时间是37℃30min;底物显色5min,终止反应后可先用目测法进行初步判定,并立即用酶标仪检测,根据D450值和判定标准确诊。用新建的阻断ELISA方法对兔的常见病,如兔脑炎原虫病、兔瘟、兔巴氏杆菌病、兔球虫病和弓形虫病进行了检测,均无交叉反应。从屠宰场和感染兔场随机采集150份血清样品,分别用阻断ELISA方法和间接血凝试验(IHA)进行比较检测,证明阻断ELISA方法的诊断率明显高于IHA。总之,阻断ELISA方法是一种简便、快速、灵敏和准确诊断兔豆状囊尾蚴病的新方法,适宜于基层兽医工作者应用和推广。     

猪囊尾蚴特异性单克隆抗体的制备及其识别抗原成分的鉴定

通过SDS-PAGE方法对猪囊尾蚴囊液抗原成分进行了分离鉴定,并分别分离纯化了其中的16 000和10 000特异性蛋白质成分;将16 000和10 000纯化蛋白质成分分别做成佛氏佐剂苗,分组免疫BALB/c小鼠,超免后,无菌取脾脏制备脾细胞,分别与NS0骨髓瘤细胞进行融合,经阳性筛选和特异性鉴定获得2株分泌猪囊尾蚴特异性单抗的杂交瘤细胞,命名为TSCF-1611H12B8和TSCF-1012G5B5。免疫学鉴定结果表明,单抗TSCF-1611H12B8和TSCF-1012G5B5与猪细颈囊尾蚴、旋毛虫、住肉孢子虫和蛔虫抗原间不存在交叉反应;单抗TSCF-1611H12B8识别囊液中16 000和10 000蛋白质抗原条带,而单抗TSCF-1012G5B5识别囊液中的10 000蛋白质条带。     

抗原皮试反应诊断兔豆状囊尾蚴病及吡喹酮治疗试验

<正> 兔豆状囊尾蚴在我县感染率达70％以上,使养兔生产受到一定损失,但目前尚缺简易的诊断和治疗方法。为此进行了本项试验。 一、材料与方法 (一)材料 1、选择外表健康,宰杀检查证明无其他疾病的兔的体内寄生豆状囊尾蚴包囊10—20个,收存于消毒过的容器内备用。 2、抗原的制备。用消毒过的镊子,夹取兔豆状囊尾蚴包囊放在75％酒精中消毒,凉干后,用8号针头刺破包囊,即流出豆状囊尾蚴囊泡,用镊子夹住头节,刺破囊泡流出囊泡液,装在消毒的比色杯里。用1毫升玻璃注射器吸取囊泡液备用。     

豆状囊尾蚴与细颈囊尾蚴和宿主（兔）的同工酶,蛋白质比较研究

用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分离出豆状囊尾蚴囊液乳酸脱氢酶同工酶4～5条酶带,酯酶同工酶1条酶带,蛋白质6～9条区带;豆状囊尾蚴囊壁和头节乳酸脱氢酶同工酶3～4条酶带,酯酶同工酶无,蛋白质17条区带;细颈囊尾蚴囊液乳酸脱氢酶同工酶1～4条酶带,酯酶同工酶1～3条酶带,蛋白质7～10条区带;宿主——兔腹水乳酸脱氢酶同工酶5条酶带,酯酶同工酶3～5条酶带,蛋白质13～16条区带。并作了豆状囊尾蚴与细颈囊尾蚴囊液同工酶、蛋白质和豆状囊尾蚴与宿主的同工酶、蛋白质相互关系的详细分析,结果表明豆状囊尾蚴与细颈囊尾蚴的同工酶和蛋白质具有差异和两者可能存在交叉免疫;豆状囊尾蚴的酶蛋白和蛋白质来源独立于宿主,但在一定程度上受宿主的影响。     

豆状囊尾蚴人工感染家兔效果研究

兔豆状囊尾蚴病是由豆状带绦虫(Taenia pisiformis)的幼虫豆状囊尾蚴(Cysticercus pisiformis)寄生于兔的肝、大网膜、肠系膜和腹腔内引起的一种绦虫蚴病。兔感染豆状囊尾蚴后由于虫体的代谢产物及囊壁破裂后囊液会引起兔中毒,降低机体免疫力,进而诱发其他疾病。目前大量研究发现氧化应激发生于许多疾病中,且对疾病具有恶化作用。     

豆状带绦虫六钩蚴Tp-dUTPase基因的表达及血清学诊断效果

采用PCR方法从豆状带绦虫六钩蚴中扩增得到Tp-dUTPase基因编码区,构建了pET32a-Tp-dUTPase原核表达载体,以重组蛋白dUTPase作为包被抗原建立的兔豆状囊尾蚴病Dot-ELISA诊断方法对226份兔血清进行了检测。结果显示,Tp-dUTPase基因编码区长447bp,编码148个氨基酸,表达的重组蛋白相对分子质量为36 200,该重组蛋白能与家兔豆状囊尾蚴病阳性血清特异性结合。以重组蛋白Tp-dUTPase作为包被抗原建立的Dot-ELISA诊断方法显示有较高的特异性（85.7%~92.9%）和敏感性（86.4%~88.0%）,与其他种类兔寄生虫病阳性血清有较低的交叉反应。结果表明,纯化的Tp-dUTPase重组蛋白可作为兔豆状囊尾蚴病的诊断抗原。     

SS2溶菌酶释放蛋白(MRP)B细胞表位预测、原核表达及免疫学特性

运用ANTHEPROT 5.0综合分析二级结构、亲水性、表面可及性与抗原性指数,预测MRP的B细胞优势袁位簇;PCR扩增出表达预测的抗原肽段的基因(mrp-1),构建重组原核表达载体pET32a-mrp-1,IPTG诱导表达,以渗透性休克法纯化重组蛋白;使用重组蛋白免疫血清和灭活猪链球菌2型SS2免疫血清Western blotting检测重组蛋白的免疫原性及其与SS2免疫血清的反应性;纯化的重组蛋白免疫雌性SPF昆明小鼠,SS2攻毒受试动物评估重组蛋白对小鼠的免疫保护力.Western blotting显示预测的950～1 210 aa肽段与PET32a重组表达的蛋白(MRP)具有良好的免疫原性和反应性;攻毒试验结果表明重组蛋白对小鼠的免疫保护率为菌体免疫所提供保护率的66.7％.研究为利用该细胞表位簇作为高效免疫制剂奠定了基础.     

猪囊尾蚴的实验室诊断

1酶联免疫吸附试验抗原采用猪囊尾蚴的囊液,经亲和层析纯化、浓缩、分装后,于-20℃保存,使用前,用0.1M pH值9.6醋酸盐缓冲液稀释,使蛋白含量为30毫克/分升.酶结合物用兔抗猪IgG免疫血清,经硫酸铵盐析沉淀,再经DEAE-纤维素纯化提取免疫抗猪IgG抗体,用辣根过氧化物酶标记兔抗猪IgG,经酶活力测定,应用时最适稀释浓度为1∶1000。操作方法为,以40孔聚苯乙烯微量反应为固相     

猪囊尾蚴的实验室诊断

<正>1酶联免疫吸附试验抗原采用猪囊尾蚴的囊液,经亲和层析纯化、浓缩、分装后,于-20℃保存,使用前,用0.1M pH值9.6醋酸盐缓冲液稀释,使蛋白含量为30毫克/分升.酶结合物用兔抗猪IgG免疫血清,经硫酸铵盐析沉淀,再经DEAE-纤维素纯化提取免疫抗猪IgG抗体,用辣根过氧化物酶标记兔抗猪IgG,经酶活力测定,应用时最适稀释浓度为1∶1000。操作方法为,以40孔聚苯乙烯微量反应为固相     

RHDV VP60“通用型”T细胞表位预测

兔病毒性出血症核衣壳蛋白VP60是兔出血症病毒的主要结构蛋白,具有很强的抗原性和免疫原性,可诱导细胞免疫,在抗病毒免疫中起着关键作用.确定T细胞所识别抗原分子上的短肽序列对T细胞表位进行定位,对于研究特异性免疫应答有着重要意义.本研究应用T细胞抗原表位分析的研究方法,预测VP60T细胞蛋白质抗原表位,为后期试验奠定了基础.