针叶苗木立枯病拮抗细菌SB-SF5的分离与鉴定

从黑龙江省牡丹汪地区东京城林业局苗圃土壤中分离获得一株对苗木立枯病病原真菌具有拮抗作用的细菌,经形态观察、生理生化特征分析及16S rDNA碱基序列测定争同源性分析,鉴定该茼株为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polyrnyxa).该菌株的165 rDNA序列已在CenBank中注册,登录号为EU286527.     

兰花炭疽病拮抗细菌5A5-3菌株的初步筛选和鉴定

从毛乌素沙地采集的10份土样中共分离到细菌320株,将分离到的细菌菌株与兰花炭疽病病原菌胶胞炭疽菌进行生长对峙试验.初筛获得拮抗菌57株.复筛后得到筛选自毛乌素沙地土壤生物结皮样品的5A5-3对病原菌具有较高的抑菌活性.对其进行形态特征观察和生理生化试验及16S rDNA序列相似性分析,结果表明:菌株5A5-3与Bacillus velezensis标准菌株(CR-502,AY603658)的16S rDNA序列相似度达100％,最终将菌株5A5-3鉴定为Bacillus velezensis.     

引起黑木耳栽培种污染细菌的分离与鉴定

以污染的木耳三级栽培种"荤油"层为材料,采用多种分离纯化方法、16S rDNA分子鉴定法以及回接试验,分离并鉴定出引起食用菌栽培种污染的细菌3株,其分属于Paenibacillus、Bacillus和Lysinibacillus属,分别命名为YC3、YC8、YC12。     

杨树腐烂病内生拮抗细菌鉴定及防治研究

采用平板稀释法从杨树枝条中分离到56株内生细菌,其中23株为内生拮抗细菌。通过室内对峙培养、内生拮抗细菌发酵液对杨树腐烂病菌Cytospora chrysosperma的抑菌作用以及室内离体枝条防病试验,证明杨树内生拮抗细菌Y-S-Y12菌株对杨树腐烂病的抑菌防病作用最显著,其次为Y-S-Y 2菌株。对Y-S-Y12菌株采用16S rDNA的序列分析方法鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。     

安宁思茅松毛虫6龄幼虫肠道可培养细菌的多样性研究

为给思茅松毛虫的综合防治提供参考措施,以安宁地区思茅松毛虫(Dendrolimu kikuchii)6龄幼虫为对象,采用纯培养法对其肠道细菌进行分离纯化,并进行形态特征观察及生理生化指标测定,对菌株进行初步鉴定,再结合16S rDNA分子鉴定技术进行分析,初步判定细菌的分类学地位,研究其肠道细菌的多样性。结果显示:从6龄思茅松毛虫幼虫肠道中共分离到104株细菌,初步鉴定隶属于10个属14个类群,分别为55株芽孢杆菌属(5个类群)、9株类芽孢杆菌属(1个类群)、2株苍白杆菌属(1个类群)、5株短芽孢杆菌属(1个类群)、4株微球菌属(1个类群)、6株莫拉菌属(1个类群)、8株栖水菌属(1个类群)、2株土壤芽孢杆菌属(1个类群)、7株葡萄球菌属(1个类群)、6株普罗威登斯菌属(1个类群)。其中芽孢杆菌属具有最高的相对分离率,为53.00%。6龄幼虫肠道细菌的Shannon多样性指数、Simpson优势度指数、Margalef丰富度指数分别为2.5217、0.9129、2.7991。思茅松毛虫6龄幼虫肠道细菌的多样性丰富,芽孢杆菌属为优势菌属,这些菌种为研究思茅松毛虫综合防治奠定了基础。     

一株茶树叶部内生木霉的分离和鉴定

以健康茶树为材料,采用组织分离法分离获得1株内生真菌CSN-16。该真菌的孢子形状、菌丝形态、菌落生长速度等形态学特征与木霉的特征基本一致;进一步进行分子鉴定,获得该菌株的18S rDNA部分序列,并提交Genebank,获得基因登录号为EU678669。18S rDNA序列系统进化分析显示该菌株与拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)的同源性最高,相似性达99%。初步鉴定该菌株为拟康氏木霉。     

具杀松材线虫活性细菌的筛选和鉴定

为筛选出对松材线虫具有抑制作用的生物防治细菌,对马尾松内生细菌进行分离纯化,从中筛选出6株对松材线虫具有杀线虫活性的细菌,其中细菌Z11-2和细菌G36具有较强的杀线活性,用它们的培养滤液分别处理松材线虫24 h,松材线虫的死亡率分别达92%和89%,48 h后线虫消解率分别是87.4%和77.5%。通过细菌形态特征观察和16S rDNA测序及其系统发育分析,菌株Z11-2和G36与短小芽孢杆菌Bacillus pumilus处于同一分支,同源性分别为100%和99%,初步鉴定细菌Z11-2和G36为短小芽孢杆菌。     

橡胶树内生细菌多样性初探及拮抗菌株的筛选

经过严格的表面消毒后,从成年橡胶树各组织中分离47份内生细菌.各组织中的内生细菌数量和种类由多到少分别为树根、花序、树皮、叶柄、叶片和果实.以橡胶树多主棒孢病菌Corynespora cossiicola(Berk & Curt.)Wei和炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides Penz.为指示菌,从中筛选出有较好作用的2个菌株,菌落形态观察、生理生化特征鉴定和16S rDNA序列分析表明它们是枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis和莫哈韦芽孢杆菌B.mojavensis.     

油松内生细菌的分离及拮抗菌的筛选

采用组织分离法,从健康油松Pinus tabulaeformis 1 a生松针,2 a生松针,1 a生松枝韧皮部、木质部,2 a生松枝韧皮部、木质部,根等7类部位共分离出40株内生细菌。通过平板对峙法对所得菌株的拮抗性进行了初筛和复筛,得到3株对油松枯梢病拮抗作用较强的菌株。其中AM-5菌株抑菌效果最强,菌体的抑制率达66.95%,其发酵液的抑制率为27.89%;菌体对病原菌孢子萌发也有显著的抑制作用。结合形态特征、生理生化及16S rDNA同源性分析,将AM-5菌株鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。盆栽试验结果表明,AM-5菌株对油松枯梢病的防治效果显著,在预防实验中,明显降低了油松枯梢病的发病率,预防效果为64.26%;在防治试验中,防效为53.32%。     

人参黑斑病生防用内生拮抗菌分离鉴定及发酵浓缩液的性质

采用平板稀释法在几种中药材中分离内生拮抗细菌,结果人参根中分离到的内生拮抗细菌菌株数较多。采用平板对峙法筛选高效拮抗菌菌株,其中菌株BJ33对人参黑斑病具有很强的抑菌活性,其抑制率达到了80%。根据BJ33菌株的形态和生理生化特征以及采用16S rDNA同源性分析方法鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。BJ33菌株及发酵浓缩液对供试的6种植物病原菌菌丝生长均具有较强的抑制作用;BJ33菌株发酵浓缩液在15~35℃和pH5~11均具有较强的抑菌活性;BJ33菌株发酵浓缩液对高温、紫外线以及蛋白酶等具有较强的稳定性。     

纤维素降解芽孢杆菌筛选及产酶条件优化

[目的]筛选沼气发酵液中高产纤维素酶菌株,并对产酶条件进行优化,为沼气发酵利用和纤维素酶的工业化开发提供高效菌株.[方法]利用刚果红平板染色法初筛,纤维素酶活测定进行复筛,从沼气发酵池中分离产纤维素酶菌株,并结合形态学观察、生理生化特征和16S rDNA基因序列同源性分析进行鉴定.对菌株产酶培养基中碳源、氮源、硫酸镁和...     

2种杨树可培养内生细菌的多样性和季节动态变化

为了解三倍体毛白杨和健杨94树干皮层组织中内生细菌的群落多样性和季节动态变化,利用传统的细菌分离培养,结合16S rDNA序列分析等方法对其进行分析.从2种杨树干部皮层中共计分离纯化细菌菌株5 32株,分属于26属47种,2种杨树内生细菌组成存在较大差异.其中,从三倍体毛白杨中分离得到1 8属30个种,以根瘤菌属和芽孢杆菌属为优势菌群;健杨94中分离得到16属22个种,以根瘤菌属、微杆菌属为优势菌群.杨树干部皮层植物内生细菌的多样性丰富.2种杨树内生细菌数量季节变化规律总体表现为夏秋2季均高于冬春2季.2种杨树在4个季节的优势菌群各不相同,随季节变化而变化.     

思茅松毛虫7龄幼虫肠道好氧细菌的筛选及毒力测定

将思茅松毛虫7龄幼虫中肠样品倍比稀释后涂布平板分离菌株,共分离得到14株好氧细菌。以细菌基因组DNA为模板,用细菌16S rDNA通用引物(27f,1492r)对模板扩增,并用2种限制性内切酶HaeⅢ和HindⅢ对PCR扩增产物进行ARDRA多态性分析。对聚类图谱的分析结果发现,14株好氧细菌在86%的相似水平上聚成4个不同分类操作单元(OTU),表明思茅松毛虫7龄幼虫肠道内好氧细菌的遗传多样性水平偏低。室内毒力试验表明,肠道细菌杀虫死亡高峰期在4～8 d,菌株7I-5杀虫效果最佳,12 d时校正死亡率达到64.29%。     

笋用竹正常植株和病害植株根际微生物的分析

以竹园采集土样分离出的根际微生物为主要研究对象,采用16s rDNA分子生物学手段和常规生理生化分析方法,对笋用竹正常生长植株及病害植株进行分析研究。有病竹植株的根际微生物可培养菌落数目比正常竹植株的多。特征分析表明:在分离纯化出的45株细菌中,其中的8株细菌初步鉴定为:菌株5-1-4为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis,菌株5-1-10为苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis,4-1-17为枯草芽孢杆菌Bacillus subti-lis,菌株3-1-8为洋葱博克霍尔德菌Burkholderia cepacia,菌株2-1-9为粘金黄菌Chryseobacterium gleum,菌株4-1-14为短小芽孢杆菌Bacillus pumilus,菌株4-1-16为普通变形菌Proteus vulgaris,菌株4-1-6为产气肠杆菌Enterobacter aerogenes。     

杨树根腐病生防菌的筛选及鉴定

【目的】杨树作为我国最重要的工业用材林树种之一,对其长期的生产力维护和人工林的健康管理是林业和生态建设的重中之重。近年来,杨树根腐病的防治措施作为林学界亟待解决的重要问题,目前以化学防治方法为主,但其存在许多环境危害,所以具有诸多优点的生物防治成为了现在国内外的研究焦点,找到生防菌是研究的重中之重。以一系列实验分离筛选到用于防治根腐病的低温适生菌为创新点,旨在找到对杨树根腐病菌具有拮抗作用的生防菌,并明确其分类地位,令其在杨树根腐病的生物防治生防菌种类方面作为参考,也为进一步研究其定殖特性、林间防效及生物安全性等问题提供前期基础。【方法】为了筛选出新的低温适生生防菌菌种资源,采用稀释涂布平板法从杨树土壤中分离得到20株芽孢杆菌,经过初步筛选得到了拮抗效果最好的一株芽孢杆菌B42,并对其进行分离纯化,采用平板对峙法对该芽孢杆菌的抑菌活性进行测定,然后鉴定明确其分类地位。【结果】该芽孢杆菌对杨树根腐病菌具有显著的拮抗作用,同时对茄病镰刀菌、红松根腐病镰刀菌、山核桃干腐病菌、链格孢、油茶炭疽病菌、白腐菌均具有广谱抗性。【结论】根据菌体的形态特征、生理生化指标以及16S rDNA序列分析的结果,鉴定该菌B42为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis。     

海南坡鹿致病性大肠埃希氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

从广东省广州动物园病死海南坡鹿病变器官中分离出1株大肠埃希氏杆菌,对细菌进行形态学观察、生化试验、血清型鉴定、药敏试验,PCR扩增测序分析,结果显示该分离株血清型为O78,该菌株对庆大霉素、丁胺卡那霉素、环丙沙星、头孢哌酮／舒巴坦钠、阿奇霉素高度敏感。     

铁皮石斛内生细菌群落结构分析

采集人工种植2年的铁皮石斛,将根、茎和叶研磨为粉末,采用NA培养基分离纯化其内生细菌,酶切去除冗余,利用16S rRNA基因序列同源性分析,对铁皮石斛根、茎和叶中分离得到的49株内生细菌进行分离鉴定。结果表明,获得的49株内生细菌在根、茎、叶中分别有24株、15株和10株,分别属于芽孢杆菌属的5个种、假单孢杆菌属的1个种和沙雷氏菌属的1个种。分离出的内生细菌表现出一定程度的细菌区系相似性,也表现出细菌区系的器官特异性。铁皮石斛内生细菌在石斛根部分布的属、种数量明显比茎、叶多,土壤可能是铁皮石斛内生细菌的主要来源;铁皮石斛不同部位内生细菌群落结构存在一定差异,群落种数根＞茎＞叶。研究获得荧光假单胞杆菌20株,占总内生细菌数量的40.82％,判断其可能为优势菌株。     

拮抗菌株SY-15的鉴定及其抑菌活性分析

拮抗菌株SY-15是从杨树根际土壤中分离获得的一株能高效拮抗金黄壳囊孢菌Cytospora.chrysosperma的拮抗细菌.研究基于形态学特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定了菌株SY-15的分类地位,并分别采用带药平板法和二分皿法分析了其抑菌活性,为进一步开发利用拮抗菌株SY-15提供科学依据.结果 表明:拮抗菌株SY-15最终鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,其无菌培养滤液和挥发性气体均能有效抑制金黄壳囊孢菌、迂回壳囊孢菌C.ambiens和黑腐皮壳菌C.mali的生长,处理60 h后,无菌培养滤液对3种植物病原真菌的抑菌率分别达到88.89％、60.39％和53.02％.处理36 h后,挥发性气体对3种植物病原真菌的抑菌率分别达到100％、76.98％和63.41％.此外,还发现拮抗菌株SY-15能产生蛋白酶和纤维素酶.研究表明拮抗菌株SY-15是一株潜在的高效防治杨树腐烂病及其他植物真菌病害的菌株资源.     

冬枣浆胞病病原微生物的分离与鉴定

对冬枣贮藏期浆胞病病原微生物进行了连续系统的分离和鉴定,试验结果表明:贮藏冬枣浆胞病病原真菌主要为两种,半知菌亚门交链孢霉属(Alternaria Nees Wallr.)和半知菌亚门无孢菌群根菌索菌(Rhizomorpha Roth.ex Fr.);连续3年均分离到的贮藏冬枣浆胞病病原细菌有4种,对4种病原细菌进行了基因组DNA的提取及rDNA片段的扩增,并完成了062281菌株rDNA片段的序列测定,经过同源性分析,将062281号菌株鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。     

拟松材线虫携带的细菌及其致病性研究

用来源于俄罗斯(E2),中国江西(JX2)、四川(SC)的3个拟松材线虫虫株,接种3年生黑松Pinus thunbergii,1个月后分离线虫体表携带的细菌。经API/ATB细菌自动鉴定系统鉴定:28个菌株中,鲁氏不动杆菌Acinetobacter 1woffii有10株,嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila和赫氏埃希菌Escherichia hermannii各有4株,其余10个菌株包括3株耳葡萄球菌Staphylococcus auricularis、2株泛菌Pantoeu agglomerans某些种、2株铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa、2株阴沟肠杆菌Enterobacter cloacae、1株荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens。对黑松切根苗的生物测定结果表明:强、弱、无致萎性菌株分别有10,15,3株。以强致萎活性菌SC5,SC7,E211和无致萎活性菌E25,JX23为代表,进行16S rDNA序列分析,结果表明:SC5为嗜水气单胞菌,SC7为荧光假单胞菌,E211为恶臭假单胞P.putida,E25为约翰逊不动杆菌Acinetobacter johnsonii,JX23为欧文氏菌Erwinia cypripedii。在此基础上,挑选SC7和E25为代表菌株,SC为代表虫株,对3年生黑松苗野外接种,结果为:强致萎病菌单独接种黑松不发病,无菌线虫单独接种也不发病,两者混合接种病情严重,说明拟松材线虫引起的松萎蔫病是该线虫与细菌复合侵染的结果。