自由基氧化法制备海带岩藻聚糖硫酸酯的抗凝血活性

以海带(Laminaria japonica)为原料,采用阴离子交换和自由基氧化降解反应制备了不同分子量和硫酸根含量的岩藻聚糖硫酸酯,然后以血浆复钙时间(RT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)为指标,研究海带岩藻聚糖硫酸酯抗凝血活性的构效关系.结果表明,采用离子交换,可从海带糖提取物中分离出低硫大分子组分F-A和高硫大分子组分F-B.粗糖经自由基氧化降解,可得到分子量为1.5 kD和8.0 kD左右的低分子组分,实验重复性好,产物分子量集中,其中分子量8.0 kD左右的低分子组分硫酸根含量最高.抗凝血实验表明,岩藻聚糖硫酸酯能显著延长RT、APTT和TT,尤以高硫组分大分子F-B抗凝血效果最好,而对PT影响不大,说明岩藻聚糖硫酸酯对外源凝血系统影响很小,它的抗凝血活性主要是通过内源性凝血途径来实现的.岩藻聚糖硫酸酯分子量对抗凝血活性的影响要比硫酸根含量的影响更大,其抗凝血活性随着分子量的降低而显著降低.对于分子量相近的岩藻聚糖硫酸脂,硫酸根含量越高,则抗凝血活性越高.总之,岩藻聚糖硫酸酯分子量和硫酸根含量越高,其抗凝活性越高.     

龙须菜多糖的降解及其降解产物的抗氧化活性

采用维生素C和过氧化氢体系诱导产生的自由基降解龙须菜多糖,并对龙须菜多糖及其降解产物的抗氧化活性进行分析。结果表明,在维生素C和过氧化氢反应体系中,龙须菜多糖的降解反应在2h内基本完成,降解后得到的4种产物分子量分别为21492,12864,5417和3043U,降解反应未导致龙须菜多糖去硫酸化,但3,6-内醚-半乳糖含量略有降低;在清除超氧阴离子、DPPH自由基和还原Fe3+方面,龙须菜多糖的抗氧化活性随分子量的降低而增强,而在清除羟基自由基方面,抗氧化活性却随多糖分子量的降低而减弱。     

超声降解法制备可溶性鱿鱼墨黑色素及其抗氧化性

实验研究了一种在碱性条件下利用超声降解制备可溶性鱿鱼墨黑色素的新方法。将鱿鱼墨黑色素溶于NaOH后用超声细胞破碎仪处理1 h,超滤后分别获得不同分子量可溶性黑色素组分。结果显示,超声处理后黑色素平均粒度从17.34 μm下降至1.467 μm,紫外、红外光谱和核磁共振谱图从结构上说明超声作用主要破坏黑色素的高度聚合状态,而黑色素的主要化学结构并没有被破坏,只有少部分基团,尤其是较低分子量组分中的DHI和DHICA结构被氧化;体外抗氧化实验显示经过0.5 mol/L和1 mol/L的NaOH处理,分子量大于10 ku的组分具有很强的抗氧化性,这些组分清除超氧自由基能力(IC₅₀=19～80 μg/mL)远优于作为商品抗氧化剂的肌肽(IC₅₀=355 μg/mL);清除羟基自由基活性(IC₅₀=115～180 μg/mL)与肌肽(IC₅₀=110 μg/mL)相当。可溶性鱿鱼墨黑色素作为一种天然色素和新型自由基清除剂,其良好的可溶性大大提高了机体的吸收利用率。     

海带粗提物及褐藻酸钠寡糖的保湿与抗氧化作用研究

以海带为原料提取海带粗提物,以褐藻酸钠制备古罗糖醛酸寡糖与甘露糖醛酸寡糖,研究比较海带粗提物、褐藻酸钠、古罗糖醛酸寡糖、甘露糖醛酸寡糖及岩藻聚糖硫酸酯的吸湿、保湿性及抗氧化性。试验结果表明,海带粗提物、褐藻酸钠、古罗糖醛酸寡糖及甘露糖醛酸寡糖具有较高的吸湿性与保湿性,且古罗糖醛酸寡糖、甘露糖醛酸寡糖、褐藻酸钠及岩藻聚糖硫酸酯对超氧阴离子和羟基自由基均有较强的清除作用。     

大眼金枪鱼头蛋白酶解物1 ku超滤组分的抗氧化活性及其理化性质

研究大眼金枪鱼头蛋白酶解物1 ku超滤组分体外的还原力、自由基清除能力及对衰老小鼠体内抗氧化能力的影响,分析1 ku超滤组分的一般成分、氨基酸组成及分子量分布,为进一步分离纯化金枪鱼头抗氧化肽提供基础。体外结果显示,1 ku超滤组分对羟基自由基、超氧阴离子和DPPH自由基的清除活性随浓度的增加而增强,IC50分别为1.38、0.73与0.93mg/mL,还原力也随浓度的增加而增大,在浓度为12.5 mg/mL时为0.763;体内结果显示,灌胃30 mg/kg的1 ku超滤组分连续42 d,D-半乳糖致衰老小鼠肝组织的超氧化物歧化酶(SOD)活性、肝组织和血清的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性显著提高(P<0.05),血清丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.01);理化分析结果显示,1 ku超滤组分(干基计)蛋白质含量为96.40%,脂肪0.11%,灰分4.86%,疏水性氨基酸占氨基酸总量的35.8%,活性组分分子量在1 802~2 519 u和422~922 u。     

尼罗罗非鱼鱼皮胶原蛋白中游离基清除肽的制备及其抗氧化活性

采用菠萝蛋白酶和Alcalase酶依次对尼罗罗非鱼皮胶原进行复合酶解.研究了该酶解产物的体外抗氧化活性.实验表明,该酶解产物具有较强的超氧阴离子/羟基自由基清除活性和还原能力.采用不同截留分子量的超滤膜将该酶解物分离成5个组分,即TGH-Ⅰ(＞10 ku),TGH-Ⅱ(10～5 ku),TGH-Ⅲ(5～3 ku),TGH-Ⅳ(3～1 ku)和TGH-Ⅴ(10 ku).其中TGH-Ⅴ组分显示出最强的超氧阴离子自由基清除活性,因此采用凝胶过滤、离子交换和反向高压液相色谱技术对该组分进一步分离纯化.纯化得到的肽具有很强的超氧阴离子自由基清除活性,其IC50值为4.6 μg·mL-1.通过质谱分析可知,该肽的分子量位于311.3～932.8 u之间.     

超声波辅助过氧化氢法降解坛紫菜多糖及其抗氧化活性的研究

该试验比较了超声波法、过氧化氢法、超声波辅助过氧化氢法降解坛紫菜(Porphyra haitanensis)多糖的效果,最后以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为指标,通过单因素和正交试验优化了超声波辅助过氧化氢法降解坛紫菜多糖的工艺。对比了降解前后多糖的抗氧化活性,并分析了其与分子量、结构特征及理化性质等的相关性。结果表明,在过氧化氢体积分数10%、温度65℃、超声波辅助2.5 h条件下,该多糖降解前后DPPH自由基清除率的半抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)由9.37 mg·mL^-1降为1.71 mg·mL^-1;凝胶渗透色谱结果显示分子量由大于670 kD降为235835 D;傅里叶红外光谱表明多糖特征吸收峰依旧存在;高效液相色谱分析发现单糖组成大致相同,糖醛酸质量分数有所降低;理化性质显示硫酸基质量分数增高,3,6-内醚半乳糖质量分数明显降低。因而超声波辅助过氧化氢法可较好地降解坛紫菜多糖,并可改善理化性质及结构特征进而增强抗氧化活性,为低分子量多糖的制备及构效关系分析提供依据。     

海藻硫酸多糖抗氧化活性研究进展

本文就海藻硫酸多糖（SPS）的结构特征、制备,抗氧化机制及影响因素进行了较为详细的阐述。众多研究表明,SPS是从海藻中提取的一类生物活性多糖,是多糖分子链中单糖分子的部分羟基被硫酸根取代而形成的;它能有效地清除自由基,还能与金属离子鳌合,抑制脂质过氧化作用,具有显著抗氧化活性;制备粗多糖主要采用水提醇沉法,用离子交换、凝胶渗透和亲和层析法进行纯化;影响SPS抗氧化活性的因素主要有硫酸多糖的来源、多酚含量、相对分子质量大小以及硫酸基的含量与位置等。     

低分子量海带岩藻聚糖硫酸酯的清除活性氧自由基和体内抗氧化作用

用化学发光分析法研究了3种低分子量涨带岩藻聚糖硫酸酯（LMWF－M，LMWF－I，LMWF－IV）体外清除超氧阴离子自基基（O2^-)及羟基自同基（．OH）的作用，并观察了LMWF－M对高脂血症大鼠的抗氧化作用，结果表明阴离子分量海带岩藻聚糖硫酸酯组分均有清除活性氧自由基的能力，随体系中LMWF浓度的增加，其清除活氧自由基的能力增强，LMWF－I清除自同基的能力最强，它对O2^-的IC50为0.044mg.mL^-1,对.OH的IC50为0.062mg.mL^-1,，LWMF－M能显著降低高脂血症大鼠箅清和组织中LPO含量（P＜0．01），增强SOD活力（P＜0．01）.     

海带岩藻聚糖硫酸酯电渗析分离工艺

采用电渗析法对盐沉后的海带酶解液中岩藻聚糖硫酸酯进行分离,探索工业化分离生产岩藻聚糖硫酸酯的方法,以解决目前乙醇沉淀法存在的安全性和高成本等问题。以脱盐率、糖保留率为检测指标,采用响应面法优化了电渗析工艺参数。结果显示,在操作电压80 V、料液流量3.2 L/min、固形物浓度10 mg/ml、p H=5的条件下,电渗析连续循环3次,海带酶液解干基中多糖含量由40.17%提高至47.11%,硫酸根含量由3.36%提高至4.97%。电渗析后海带酶解液干基中的金属离子含量为Ca 0.13 mg/g、Mg 16.04μg/g、Cu 0.29μg/g、Se 11.7μg/g、Cr 8.06μg/g,Pb未检出,较电渗析前均有降低。电渗析对脱除褐藻胶的海带酶解液进行脱盐纯化处理,可有效地分离纯化出岩藻聚糖硫酸酯。     

硫酸酯多糖的生物活性及其提取方法

本文分析了硫酸酯多糖的立体结构、分子量和硫酸基等因素对其生物活性的影响;比较了硫酸酯多糖的热水浸提、酶法、超声波提取等几种提取方法的提取率,并从抗凝血活性、抗病毒活性、抗肿瘤活性、抗氧化活性、降血糖和降血脂作用等几个方面综述了硫酸酯多糖所具有的生物活性,提出了硫酸酯多糖向海洋生物药源方面开发应用的展望。     

缢蛏多糖的提取及抗氧化作用研究

以新鲜缢蛏的碎肉为材料,加水配制成一定比例的匀浆,利用超声波提取法对缢蛏碎肉匀浆进行多糖的提取。利用蒽酮—硫酸法对多糖得率进行计算。将得到的多糖粗品通过DEAE离子交换层析及G-75凝胶层析进一步分离纯化。通过邻苯三酚自氧化体系和Fenton体系测定所得样品的抗氧化能力。结果表明:利用超声波提取多糖的提取率为19.93%。多糖粗品通过DEAE离子交换柱,得到2个峰,峰1对超氧阴离子的清除能率为43.89%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为57.80%。峰2对超氧阴离子的清除能率为57.80%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为77.83%。将DEAE峰2进行G-75凝胶层析得到2个峰,峰1对超氧阴离子的清除能率为83.08%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为94.76%。峰2对超氧阴离子的清除能率为74.41%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为52.41%。     

Does dietary tocopherol level affect fatty acid metabolism in fish?

Fish are a rich source of the n-3 polyunsaturated fatty acids (PUFA), particularly the highly unsaturated fatty acids (HUFA) eicosapentaenoic (EPA; 20:5n-3) and docosahexaenoic (DHA; 22:6n-3) acids, which are vital constituents for cell membrane structure and function, but which are also highly susceptible to attack by oxygen and other organic radicals. Resultant damage to PUFA in membrane phospholipids can have serious consequences for cell membrane structure and function, with potential pathological effects on cells and tissues. Physiological antioxidant protection involves both endogenous components, such as free-radical-scavenging enzymes, and exogenous dietary micronutrients including tocopherols and tocotrienols, the vitamin E-type compounds widely regarded as the primary lipid-soluble antioxidants. The antioxidant activities of tocopherols are imparted by their ability to donate their phenolic hydrogen atoms to lipid (fatty acid) free radicals, resulting in the stabilization of the latter and the termination of the lipid peroxidation chain reaction. However, tocopherols can also prevent PUFA peroxidation by acting as quenchers of singlet oxygen. Recent studies on marine fish have shown correlations between dietary and tissue PUFA/tocopherol ratios and incidence of lipid peroxidation, as indicated by the levels of thiobarbituric-acid reactive substances (TBARS) and isoprostanes. These studies also showed that feeding diets containing oxidized oil significantly affected the activities of liver antioxidant defence enzymes and that dietary tocopherol partially attenuated these effects. However, there is evidence that dietary tocopherols can affect fatty acid metabolism in other ways. An increase in membrane PUFA was observed in rats deficient in vitamin E. This was suggested to be due to overproduction of PUFA arising from increased activity of the desaturation/elongation mechanisms responsible for the synthesis of PUFA. Consistent with this, increased desaturation of 18:3n-3 and 20:5n-3 in hepatocytes from salmon fed diets deficient in tocopherol and/or astaxanthin has been observed. Although the mechanism is unclear, tocopherols may influence the biosynthesis of n-3PUFA through alteration of cellular oxidation potential or peroxide tone.     

海芦笋黄酮的抗氧化作用及对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用

为深入探究海芦笋黄酮的活性作用,研究海芦笋黄酮在体外的抗氧化作用及其对CCl_4导致的小鼠急性肝损伤的预防保护作用。通过分析海芦笋黄酮对4种自由基(DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基及超氧阴离子自由基)的清除能力反映海芦笋黄酮的体外抗氧化能力。将海芦笋黄酮分为低、中、高3个剂量[75、150、300 mg/(kg·d)]对小鼠连续灌胃8 d,通过腹腔注射CCl_4建立小鼠急性肝损伤模型,测定海芦笋黄酮对血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)的活性以及肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)水平的影响,观察肝脏病理变化。结果显示,在体外抗氧化实验中,海芦笋黄酮对4种自由基都有良好的清除效果。在CCl_4急性肝损伤模型中,与模型组对比,各剂量海芦笋黄酮均能使血清中ALT、AST、ALP酶活性、肝脏MDA含量显著降低;使肝脏SOD活性、GSH含量显著增加。海芦笋黄酮中、高剂量组与模型组相比,肝脏CAT活性显著升高。肝脏切片结果显示各剂量组肝组织损伤情况有不同程度改善。海芦笋黄酮对由CCl_4引起的小鼠急性肝损伤具有一定程度的预防保护作用,其急性肝损伤保护机制可能与黄酮对脂质过氧化程度的削弱、机体抗氧化能力的提高有关。     

Role of free radicals in swimbladder inflammation of carp

Abstract. Several diseases are known, including a number of inflammatory origin, in which the role of free radicals has been proved. In the elimination of reactive oxygen intermediates, SOD, catalase and GPase have a significant role. A study of the activities of these enzymes and of the lipid peroxidation in carp with swimbladder inflammation showed that the formation of free radicals plays a direct or indirect role in the development and/or progress of this inflammation.     

南极冰藻Chlorophyceae L4抗氧化酶活性对温度升高的响应

为了阐明南极冰藻Chlorophyceae L4抗氧化酶活性对温度升高的响应以及了解冰藻细胞内抗氧化酶系统对活性氧自由基的清除作用,对不同温度下（包括最适温度6℃、高于最适温度10℃和15℃）Chlorophyceae L4细胞中自由基的产生速率、丙二醛含量的变化和相应的抗氧化酶系统活性的变化进行了测定。结果表明,在环境温度高于最适生长温度的初期（24～72h）,Chlorophyceae L4中自由基产生速率、丙二醛含量迅速提高,但随后（96～144h）很快降低,恢复到细胞能容忍的水平。各种抗氧化酶SOD、POD和CAT活性在初期显著降低,但随后响应温度的变化很快升高,明显比对照组的高,而且温度越高酶活性增幅越高。     

Antioxidant and Angiotensin I Converting Enzyme Inhibition Effects and Antihypertensive Effect in Spontaneously Hyertensive Rats of Peptide Isolated from Boiled Abalone By-Products,Hallotis discus hannai

ABSTRACT

Abalone is a marine gastropod that is an important fishery and food industrial resource, massively maricultured in Asia, Africa, Australia, and America. Marine by-products from boiled abalone, normally discarded as industrial waste in manufacturing plants, were fractionated and concentrated using an ultrafiltration membrane system (? 1 kDa). In this study, the antioxidant and angiotensin I converting enzyme (ACE) inhibition effects of the boiled abalone by-products (BABs) were investigated. BABs have high antioxidant activities against free radicals (1,1-diphenyl-2-pycryl-hydrazyl (DPPH), hydroxyl, peroxyl, and superoxide radicals), reactive oxygen species (ROS) stress, and DNA damage in H₂O₂-treated RAW 264.7 macrophages. The structure of the purified peptide was identified to be ATPGDEG (MW 752 Da), and the ACE inhibition pattern of the peptide was found to be noncompetitive. In addition, the peptide exhibited an antihypertensive effect according to time-course measurement after oral administration to spontaneously hypertensive rats (SHR). BABs from this genus may be potential candidates for the development of unique natural substances for further industrial applications as functional foods and pharmaceuticals.     

大叶藻黄酮对酒精性肝损伤的保护作用

为了深入挖掘大叶藻黄酮(ZF)的生物活性,提高大叶藻的利用价值,本实验研究了ZF对酒精性肝损伤的保护作用;实验采用纤维素酶-超声波辅助复合浸提法提取大叶藻中的天然活性物质黄酮类化合物,并采用聚酰胺树脂柱层析法对其进行纯化;研究ZF的体外抗氧化能力;将60只ICR小鼠随机分成6组,通过建立酒精性肝损伤模型,研究ZF对肝损伤的保护作用;结果显示,经纯化后ZF的含量达到80%。体外实验表明ZF对DPPH自由基和羟基自由基有清除能力,具有一定的抗氧化活性;体内实验表明ZF对酒精性肝损伤小鼠的抗氧化能力、脂质代谢能力以及乙醇代谢能力均有影响。ZF各剂量组与模型组相比,血清ALT、AST和γ-GT活性显著降低,肝组织MDA含量显著降低,乙醇代谢酶活性显著提高;ZF中、高剂量组小鼠肝组织GSH-Px和SOD活性显著提高,血脂浓度显著降低。长期过量饮酒可导致小鼠肝脏严重损伤,ZF可以改善小鼠肝组织损伤情况,对酒精性肝损伤起到保护作用,其机制可能与增强机体抗氧化能力、调节脂质代谢和乙醇代谢能力有关。     

大鲵肉酶解产物的制备及其抗氧化性的研究

以大鲵肉为原料,利用Aspergillus sp.酸性蛋白酶进行酶解,研究其最佳的酶解条件以及酶解产物的抗氧化作用。结果表明,大鲵肉酶解的最佳工艺条件为Aspergillus sp.酸性蛋白酶加酶量为0.4%(质量比)及底物浓度为0.1g/mL时,酶解时间5.5h,pH 2.0,温度45℃。时间飞行质谱表明酶解产物的分子量小于2 000,苯酚硫酸法测定糖含量为2%,Folin-酚试剂法测蛋白含量为93%。大鲵酶解产物清除羟基自由基(.OH)和DPPH自由基的能力随浓度升高而增强。