橘小实蝇α1微管蛋白基因的克隆和表达分析

利用RT-PCR和RACE方法克隆获得橘小实蝇α1微管蛋白基因的cDNA全长序列,命名为α1-Bdortub。测序结果表明,α1-Bdortub开放阅读框全长1 353 bp,编码450个氨基酸残基。氨基酸序列比对表明,α1-Bdortub与黑腹果蝇α1-tubulin的氨基酸序列相似性最高,为99.8%。不同部位和不同时期的实时荧光定量PCR分析表明,α1-Bdortub在不同部位都有表达,雌虫翅中的表达是其生殖节中的12倍。从幼虫期到蛹期α1-Bdortub mRNA表达量逐渐提高;第1、2、3天幼虫中的含量分别为第10天蛹的0.71、1.16、4.01倍;在第1、4、7天蛹中的含量分别为第10天蛹的4.22、13.2、18.5倍。结果提示,α1-Bdortub可能与橘小实蝇的发育有关。     

橘小实蝇的地理分布模型

根据橘小实蝇的致死温度和有效积温,用Access设计气候资料和地理信息数据库,用MapX和Visual Basic设计程序,建立了橘小实蝇地理分布模型.用中国670个气象站点30a的气候资料运行该模型.结果表明,橘小实蝇可在中国25%的地区发生,分布北界为(30±2)N左右,1a发生3-12代.     

橘小实蝇引诱物质研究进展

综述了橘小实蝇引诱剂物质和引诱机制的研究进展,指出当前对引诱物质的研究主要集中在蛋白和化学物质以及植物源物质上,对引诱机理的研究也表现在对化学物质和营养物质的需求方面,植物源引诱物质将成为未来橘小实蝇研究的重点。     

橘小实蝇生物学特性研究

通过对橘小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)在18℃、22℃、25℃、28℃、30℃下卵、幼虫、蛹的发育历期及室内条件下成虫羽化、取食、交配、产卵等生物学特性的研究，结果表明，橘小实蝇卵、幼虫、蛹的发育历期随温度的降低而延长，其发育最适温度为25～30℃。在25℃下，卵、幼虫、蛹的平均发育历期分别为1．5d、19．5d和12．5d；在28℃下，卵、幼虫、蛹的平均发育历期分别为1．3d、16d和9d。成虫具趋光性，羽化高峰为9：00～10：00，8：00～10：30和15：00～18：00为取食时间，多数成虫只交配1次，交尾高峰为19：30～22：30，产卵高峰为16：00～18：30，产卵开始后约20d达产卵高峰期，卵聚产。初孵幼虫具群聚性和负趋光性，幼虫成熟后具趋光性．跳跃能力极强。老熟幼虫经1～2d预蛹期后化蛹，湿度以60％-70％为宜。     

粤西山区橘小实蝇的发生与为害

2008年2月至2009年2月,在广东罗定市太平镇和罗镜镇利用性引诱剂对橘小实蝇进行了全年种群动态监测,调查结果显示橘小实蝇已在罗定大量发生、为害.该虫数量4-6月开始迅速上升,6-9月份是发生盛期:10月份虫口密度逐渐下降,12月到翌年2月份种群数量很低.     

橘小实蝇个体食量测定

橘小实蝇在有选择取食的情况下更倾向于倒挂取食,在无选择性取食的情况下位置对取食无影响(P>0.05).橘小实蝇对染料的排空试验结果表明,甲酚红和荧光素钠在4 h内即可到达后肠,通过染料J-管技术测得橘小实蝇取食量在2 h内就能达到最大,所以在测定橘小实蝇食量时饲喂时间以2 h为宜.染料J-管技术测定结果表明:3日龄和6日龄雌雄橘小实蝇2 h内个体食量分别为(4.0412±0.3348)、(3.4409±0.1132)、(5.6543±0.2852)、(4.6808±0.2654)g.     

橘小实蝇发生与综合防治研究进展

概述了橘小实蝇的发生与综合防治的研究进展,主要包括其生物及生态学特性、风险性和适生性评估、动态监测与防治指标以及综合防治方法。     

羧酸酯酶及其介导昆虫抗药性的研究进展

本文从分类、结构和水解作用机制、抗药性以及抗药机理等方面综述了昆虫羧酸酯酶的研究进展,旨在为进一步深入研究羧酸酯酶介导昆虫抗药性提供参考和奠定基础.     

橘小实蝇转主寄生的种群动态

以橘小实蝇入侵果蔬混栽橘园为研究对象,通过调查橘小实蝇对不同蔬菜寄主及柑橘品种之间的为害差异,结合蔬菜生育期和柑橘果实成熟期,明确了橘小实蝇转主寄生的种群动态,在柑橘果实转色期之前,橘小实蝇在蔬菜区继代繁殖;在柑橘果实转色后,橘小实蝇转主入侵到柑橘为害。橘小实蝇可因各蔬菜寄主成熟与否选择性为害;橘小实蝇对温州蜜柑为害严重,本地早和四三九品种为害较轻,哈姆林及刘本橙在本地不为害。同时给出了果蔬混栽园内橘小实蝇自柑橘瓜果期至采收期期间的种群动态。     

橘小实蝇不育雄虫田间释放效果

观察研究了橘小实蝇不育雄虫经辐射后田间释放的效果.结果表明,橘小实蝇雄虫经辐射后释放,第6天最远扩散距离可达207.89 m,田间最长存活期为15 d,与田间野生雌性橘小实蝇交配后,其卵不育率为91.15％,而对照区卵不育率仅为21.02％,达到了较好的释放效果.     

桔小实蝇电压门控钠离子通道基因cDNA克隆及其生物信息学分析

【目的】克隆获得桔小实蝇（Bactrocera dorsalis）电压门控钠离子通道基因cDNA序列,明确其典型特征,为研究桔小实蝇抗性分子机理奠定基础。【方法】采用RT-PCR和PCR技术,克隆桔小实蝇钠离子通道基因cDNA序列,利用相关软件对其序列进行生物信息学分析。【结果】克隆得到1条长为6 446 bp的cDNA序列,包含1个6 405 bp的完整开放阅读框,共编码2 134个氨基酸。同源比对发现,桔小实蝇与果蝇（Drosophila melanogaster,NP_001188635）和家蝇（Musca domestica,AAB47604）钠离子通道基因相似度分别高达91.7%和86.9%,而与人的钠离子通道Nav1.2基因（Homo sapiens,NP_066287）相似度为42.3%。所克隆序列包含昆虫钠离子通道所有典型特征。【结论】成功地从桔小实蝇中克隆得到钠离子通道基因完整开放阅读框。该钠离子通道基因存在丰富的选择性剪接,发现了3个可能与抗性相关的碱基取代。钠离子通道基因有可能发展成为一种昆虫系统发育研究的分子标记。     

大豆蚜羧酸酯酶基因AgCarE的克隆、表达及活性分析

【目的】克隆大豆蚜羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究大豆蚜抗药性机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术,克隆了1个大豆蚜羧酸酯酶基因的全长cDNA序列,命名为AgCarE,利用生物信息学软件及网上工具进行序列分析,以pET-21b为载体构建原核表达系统进行表达,并以α-醋酸萘酯溶液为底物进行活性测定。【结果】测序分析表明,羧酸酯酶基因AgCarE（GenBank登录号：JF970181）全长1 946 bp,编码526个氨基酸。羧酸酯酶AgCarE的等电点（pI）为6.08,蛋白活性中心包括3个氨基酸残基（催化三联体）：Ser186、Glu313、His434,5个N-联糖基化位点,具备羧酸酯酶的结构特征,属羧酸酯酶家族（EC: 3.1.1.-）。将该基因编码序列与pET-21b载体重组,经IPTG诱导表达HIS标签融合蛋白、SDS-PAGE分析和Western-blot检测,在大肠杆菌BL21中成功表达约59 kD的AgCarE蛋白,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036 mmol/100 μL酶液。【结论】成功克隆、表达了大豆蚜羧酸酯酶蛋白AgCarE,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036 mmol/100 μL酶液,有助于进一步了解羧酸酯酶的结构特征及水解作用,为设计研发新型杀虫剂提供可能。     

桔小实蝇takeout基因的克隆和序列分析及时空表达

采用RT-PCR及RACE技术克隆了桔小实蝇(Bactrocera dorsalis(Hendel))takeout基因的cDNA全长序列,命名为BdorTO。测序结果表明:BdorTO开放阅读框全长747 bp,编码248个氨基酸,相对分子质量约为28.15×103,等电点为5.29。Signal P软件分析表明,该蛋白N端具21个氨基酸的信号肽,为分泌型蛋白。氨基酸序列比对表明,BdorTO蛋白与其他昆虫TO蛋白的序列一致性较低,其中与刺舌蝇(Glossina morsitans)的序列一致性最高,一致性值为48.6%。荧光定量PCR分析表明,BdorTO在触角中的表达量最高,推测BdorTO可能参与了桔小实蝇嗅觉感受过程;在雄虫生殖节中的表达量明显高于雌虫生殖节,提示BdorTO可能与桔小实蝇雄虫的生殖生理过程密切相关。     

不同诱捕处理对桔小实蝇和瓜实蝇的诱集作用

利用引诱剂喷涂于瓶外与瓶内分别装水0、50、100、200 mL 5种不同诱捕处理方法,在番石榴园内对桔小实蝇和瓜实蝇进行诱集对比。结果发现,在用量1 g的条件下,好粘与稳得引诱剂对桔小实蝇和瓜实蝇均具有诱集效果,两种引诱剂对桔小实蝇的诱集效果前者大于后者,而对瓜实蝇的诱集效果则相反。不同诱捕处理的诱捕效果具有较大的差异性,在不同诱捕处理中,好粘对两种实蝇的诱集效果随加水量的增加而增强,当加水200 mL时达最大值;稳得对两种实蝇的诱集效果随着瓶内水量的增加,表现出先增强后随水量的增加诱集效果逐渐减弱,当加水50 mL时达最大值;但两种引诱剂喷涂在瓶内的不同诱捕处理对两种实蝇的诱集效果均明显好于喷涂瓶外。     

桔小实蝇二硫键异构酶基因的克隆及其发育表达

利用RT-PCR和RACE方法克隆获得桔小实蝇Bactrocera dorsalis（Hendel）二硫键异构酶（pro-tein disulfide isomerase,PDI）基因的cDNA序列,命名为BdorPDI。测序结果表明,BdorPDI开放阅读框全长1 497bp,编码498个氨基酸。氨基酸序列结构分析表明,该序列有PDI蛋白家族的典型特征:N端含有信号肽序列;在序列的N端及C端具有二硫键/巯基氧化还原位点CGHC;在C末端含有内质网滞留信号肽KDEL。进化树分析表明:桔小实蝇的PDI蛋白序列与脊椎动物安乐蜥（Anolis carolinensis）的序列（XP₀03217370）一致性最低,为49.3%;与双翅目昆虫刺舌蝇（Glossina morsitans）的序列（ADD20271）一致性最高,为76.3%。荧光定量PCR分析表明:BdorPDI mRNA在桔小实蝇1～3龄幼虫中的表达量相对较低,且呈逐渐增长的趋势;在1d蛹中的BdorPDI mRNA表达量达到最高峰,其表达量是基准含量的536.50倍,且随着蛹的发育,BdorPDI mRNA表达量呈逐渐降低的趋势。由此可见,桔小实蝇二硫键异构酶在化蛹过程中发挥了重要的生理功能。     

柑橘小实蝇综合治理措施的经济性分析

从经济学的角度分析了柑橘小实蝇的检疫措施和综合防治方法的利弊,便于果农选择合适的治理方法,从而提高柑橘产业的经济效益、生态效益和社会效益。     

桔小实蝇幼虫呼吸代谢研究

[目的]明确桔小实蝇幼虫的呼吸代谢特征。[方法]以重要的水果害虫桔小实蝇幼虫为对象,研究其呼吸代谢特征。[结果]桔小实蝇整个幼虫期总耗氧量达21.61 mL,耗氧量随着幼虫的生长发育而增加。各日龄幼虫的呼吸代谢存在显著差异,而这种差异与它们的生活特性有直接相关性。[结论]研究结果为进一步了解桔小实蝇为害规律和制定检疫处理技术提供了参考。     

桔小实蝇的产卵选择性

以番石榴、酸石榴、甜石榴和西红柿四种果实引诱雌虫产卵结果可知,桔小实蝇最喜欢在番石榴上产卵(132. 3±7. 31 /♀),次之是酸石榴(58. 0±6. 24 /♀ )和甜石榴 ( 42. 3±3. 84 /♀ ),而西红柿最差 ( 4. 3±1. 20 /♀)。雌虫产卵易受果实伤口引诱,雌虫喜欢在机械损伤造成的伤口上产卵。雌虫喜欢选择在成熟果实上产卵,果实越成熟产卵的数量越多。     

桔小实蝇对敌百虫抗药性遗传分析

运用经典的杂交法,采用剂量对数-死亡概率值回归分析法,利用室内选育的抗性倍数为65.96的桔小实蝇抗敌百虫品系和敏感品系,研究桔小实蝇对敌百虫的抗性形式遗传.结果表明,杂交F1代的显性度均在0～1的范围内,说明桔小实蝇对敌百虫的抗性由不完全显性基因控制;遗传因子数测定以及进一步的卡方检验可知∑x2F2和∑x2BG3值分别为20.964和19.684,均大于X2 0.05,9(16 919),表明桔小实蝇对敌百虫的抗性属多基因控制;杂交后代其雌雄性比近似保持在1∶1,说明桔小实蝇对敌百虫的抗性属常染色体控制.     

柑桔小实蝇诱杀专利技术

柑桔小实蝇属外来入侵生物,对多种果树造成严重为害,诱杀成虫是一种有效的防治技术,我国已取得多项研究成果,并应用于生产实践中。介绍了用于诱杀桔小实蝇的专利技术,拟为该害虫的防治提供技术支持,并指导和帮助新技术的研究。