噬菌体展示技术在毒素检测分析中的应用

霉菌毒素严重危害动物及人类健康,毒素检测已成为评价农产品、食品、饲料品质的重要内容之一.毒素检测有一定危险性,建立新的毒素检测手段意义重大.噬菌体展示技术是一种设计精巧、具有极强分离多肽功能的生物学技术.综述了此项技术的发展和在筛选霉菌毒素模拟表位肽中的作用及模拟表位肽在毒素检测中的应用,并展望了该技术的应用前景.     

单域抗体T7噬菌体展示文库构建与鉴定

优化噬菌体展示文库构建策略,获得高品质羊驼源天然纳米抗体T7噬菌体展示文库,并对文库质量进行鉴定.分离羊驼外周血淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR扩增羊驼重链抗体可变区(VHH)基因,插入T7 select 415-1b噬菌体载体构建文库,计算文库的库容量,测定文库传代稳定性.测序分析VHH基因的多样性和纳米抗体氨基...     

G族黄曲霉毒素半抗原分子设计、抗原合成及抗体特性

根据黄曲霉毒素G_1(Aflatoxin G_1,AFG_1)的分子结构和活性位点,采用半缩醛法(SA)、环氧化物法(EP)和烯醇醚衍生物法(EED)制备G族AF人工抗原AFG_1-BSA,通过UV和SDS-PAGE进行鉴定。用AFG_1-BSA免疫Balb/C小鼠制备多克隆抗体(AFG_1 pAb),间接ELISA检测AFG_1pAb效价,阻断ELISA分析其敏感性,交叉反应试验分析其特异性。结果显示,AFG_1-BSA合成成功,3种合成方法中,SA法效果最好,AFG_1与BSA的分子结合比为4.32∶1,间接ELISA效价为1∶(6.4×10~3),阻断ELISA检测其IC_(500为13.6μg·kg~(-1),与AFG_2的交叉反应率(CR)为82.19%,与AFB_1、B_2无CR。表明获得高效价、敏感、特异、广谱的AFG pAb,为G族AF和AF总量免疫检测方法的建立奠定基础。     

利用噬菌体随机肽库筛选抗原模拟表位的研究进展

噬菌体随机肽库技术是将编码外源多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置,使外源基因随外壳蛋白结构基因的表达而表达,被展示的外源多肽可保持相对独立的空间结构和生物活性,是一种基因型与表达型的统一。近年来,噬菌体随机肽库技术被广泛应用于各种抗原的模拟表位筛选中,并取得了显著成果。综述了利用噬菌体随机肽库技术在抗原模拟表位筛选中的研究进展。     

新疆双峰驼纳米抗体噬菌体展示文库多样性的生物信息学分析

[目的]骆驼免疫系统中只存在重链抗体,其可变区VHH片段是最小的天然抗体片段.通过对双峰驼VHH基因进行序列分析,了解双峰驼VHH基因特征,分析VHH文库多样性组成.[方法]采用新疆双峰驼VHH特异引物扩增全部抗体基因片段,连接到M13噬菌粒载体上,与pⅢ蛋白融合表达在噬菌体表面,构建噬菌体展示文库.基因测序和菌落PCR方法,分析文库大小和阳性克隆插入率.NCBI-IgGBLAST工具对抗体序列进行IMGT编号命名,WebLogo工具分析抗体保守序列分布频率,MEGA6软件对VHH序列进行同源性比对和系统进化树构建.[结果]利用免疫的新疆双峰驼淋巴细胞,构建了库容量为1.4 ×109的VHH抗体噬菌体展示文库.对91个随机挑选的文库TG1单菌落进行PCR.结果表明该文库VHH阳性插入率为97;,DNA测序表明文库多样性为97.8;.对91个克隆DNA测序结果进一步分析表明,这些基因中除2个为常规VH抗体外,其余均为重链VHH抗体.根据抗体序列中的特征氨基酸分布,将91个抗体序列划分为7个亚群.[结论]构建的新疆双峰驼VHH文库多样性较好,生物信息学分析揭示出文库中多样性克隆的分布和特征,有助于新疆双峰驼纳米抗体噬菌体展示文库的进一步构建.     

日本血吸虫抱雌沟蛋白筛选噬菌体展示抗原对小鼠血吸虫病免疫效果观察

在前期研究中我们利用日本血吸虫抱雌沟蛋白筛选日本血吸虫噬菌体展示cDNA文库,共获得10种阳性噬菌体克隆。本研究选择其中5种噬菌体克隆单独或联合免疫小鼠,观察其对血吸虫成虫合抱的影响以及对血吸虫病的免疫预防效果。结果显示,19号克隆单独免疫和6号、18号混合免疫在预防实验中分别取得了40.53%和31.14%的减虫率及35.31%,44.65%的肝脏减卵率。研究结果提示,19号、6号和18号噬菌体展示的EST序列编码基因具有一定的抗血吸虫生殖免疫效果,在血吸虫疫苗研究方面具有重要价值。     

黄曲霉侵染茶树籽产黄曲霉毒素的研究

以茶树籽为原料,真空冷冻干燥后粉碎并喷无菌水,使含水量分别为10％、15％、20％,人工接种产毒黄曲霉(Aspergillus flavus)ACCC30899,置于生化培养箱,观察产毒黄曲霉的生长状况;采用液相色谱串联质谱法分别于黄曲霉侵染7、14、21 d、含水量大于15％的茶树籽所产黄曲霉毒素组分进行测定.结果表...     

黄曲霉毒素的危害

黄曲霉毒素具有很强的毒性和致癌性,各类食品中,花生及其制品、玉米污染严重。人或动物食用了被黄曲霉毒素污染的食物后,一部分会蓄积在人或动物的体内,另外一部分则会转化到乳汁和尿液中,所以,如果牛吃了被黄曲霉毒素污染的谷物,牛奶就会被污染。     

抗速灭威噬菌体单链抗体库的构建、筛选及鉴定

以速灭威抗原免疫的小鼠为实验对象,取其脾细胞,RT-PCR扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,重叠延伸PCR拼接单链抗体(ScFv)基因,克隆入噬菌粒表达载体pCANTAB5E并转化大肠杆菌TG1,成功构建了库容约7.6×105的抗速灭威噬菌体ScFv库。对该文库进行了5轮"吸附-洗脱-扩增"的富集筛选,获得了6个特异性较强的抗速灭威噬菌体ScFv阳性克隆。其研究结果为速灭威特异性抗体的大量制备奠定了一定的基础。     

基因工程技术在黄曲霉毒素生物降解中的应用

黄曲霉毒素具有强致癌性、致突变性和致畸性,影响动物生产性能,降低饲料转化效率,减少产肉量、产蛋量和产奶量,增加动物发病率和死亡率,给畜牧业造成巨大的经济损失。另外,黄曲霉毒素通过肉、蛋、奶食物链传递给人类,严重威胁人类健康。因此,黄曲霉毒素的防控已经成为全球性高度关注的问题。目前,饲料中黄曲霉毒素的脱毒方法主要采用物理吸附,如蒙脱石、活性炭、酵母细胞壁等,但物理吸附仅是吸附了黄曲霉毒素,并不能减少毒素的量,最终饲料中被吸附的毒素在体内解吸附后排出体外,可造成环境的二次污染。另外吸附剂效果不稳定,可能会吸附饲料中的维生素等营养物质,造成饲料品质下降。其中,生物降解法具有解毒彻底、专一性强,不影响饲料的营养价值且能够避免毒素的重新产生等优点,从而备受研究者的关注。目前,有越来越多的研究报道了真菌、细菌及其代谢产生的酶能够降解黄曲霉毒素,而鲜有关于降解黄曲霉毒素重组酶的报道。基因工程技术在黄曲霉毒素生物降解中的运用,可采用现代分子生物学的方法,从复合解毒酶中分离纯化出特定的蛋白。但因微生物降解酶分离纯化过程复杂、酶活不稳定、酶作用条件苛刻,较难用于实际生产。因此,人们利用基因工程手段将活性高的解毒酶基因进行基因克隆,实现降解酶基因在原核或真核工程菌种的异源高效表达,为酶制剂在降解霉菌毒素的实际生产中作用研究奠定了理论基础。文章就基因工程技术在黄曲霉毒素降解中的运用研究进展及未来发展方向进行综述,为饲料和食品中霉菌毒素生物降解酶的运用提供理论基础和实践依据。     

饲料中黄曲霉毒素去除方法的研究概况

对去除饲料中黄曲霉毒素的方法进行了综述。去除方法主要有物理法、化学法和生物法三大类,介绍了各类方法的技术内容、去毒机理、去毒效果及存在问题。     

抑制黄曲霉毒素前体合成的芽孢杆菌鉴定及其抑制活性研究

为了开发有效提高花生等农产品抗黄曲霉毒素污染能力的生物防腐剂,对已分离获得的一株生防细菌Hitwh-B05进行16S rDNA鉴定,并研究其防霉抑毒能力。结果表明,该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),产生抗黄曲霉毒素有效成分的能力不受传代次数影响,可在广温度范围内产生抑毒活性成分,培养基最佳初始pH为6,抑毒活性成分产生的最佳培养时间为6 d,菌株发酵上清液经甲醇提取获得的抑毒活性/mL时,对降散盘衣酸(norsolorinic acid,NA)积累抑制率均达到84%以上,抑制效果明显优于双乙酸钠,对花生的防霉抑毒处理起到良好的作用,结果对提高农产品的防霉抑毒能力,从污染源头有效阻止霉菌侵染,降低毒素产生,并减少化学防腐剂对环境和人体的危害具有重要意义。     

黄曲霉毒素的脱毒研究进展

黄曲霉毒素是由真菌代谢产生的天然毒素,主要分为B族黄曲霉毒素、G族黄曲霉毒素及M族黄曲霉毒素。黄曲霉毒素对人类和动物具有较高的毒性、致畸性、诱变性和致癌性,其中黄曲霉毒素B_1的毒性最高,且黄曲霉毒素B_1和黄曲霉毒素M_1被国际癌症研究机构列为一级致癌物。因此,黄曲霉毒素的脱毒越来越受到国内外的广泛关注。主要对国内外黄曲霉毒素的物理脱毒方法、化学脱毒方法及生物脱毒方法进行综述,重点对生物脱毒方法的种类、脱毒机理和降解产物的毒性进行了评述,并提出研究展望。     

北京地区被检饲料及饲料原料黄曲霉毒素污染情况的调查

【目的】了解目前北京市养殖场所用饲料原料和配合饲料受黄曲霉毒素的污染情况、检出频率和特点,为饲料生产和养殖企业提供数据参考。【方法】抽样采集北京市21个养殖场187份饲料样,采用免疫亲和柱-光化学衍生-高效液相色谱法测定黄曲霉毒素（B1、B2、G1和G2）的含量。【结果】玉米、麸皮、豆粕、DDGS、猪配合饲料和家禽配合饲料中黄曲霉毒素B1的检出率分别为50.0%、46.2%、33.3%、94.1%、67.1%和94.3%,平均含量分别为5.98、0.25、1.00、9.83、2.89和1.06 µg•kg-1,超标率分别为6.2%、0.0%、0.0%、5.9%、6.6%和0.0%。【结论】各类饲料不同程度地受到黄曲霉毒素污染,其中AFB1污染程度较严重;部分配合饲料、玉米和DDGS的AFB1平均含量较高,超标率也较高。     

食品中黄曲霉毒素检测方法研究进展

产毒真菌极易对食品造成污染并产生真菌毒素,尤其是谷物在生长及加工过程中,其中对人体危害较大的为黄曲霉毒素,严重危害消费者的身体健康.高效的食品安全检测技术是保护消费者免受黄曲霉毒素毒害的有力手段.介绍了近几年国内外食品中黄曲霉毒素检测的研究进展,重点分析了高效液相色谱法、液相色谱质谱法、酶联免疫吸附法、时间分辨荧光免疫...     

饲料中黄曲霉毒素B1和呕吐毒素生物法降解研究进展

黄曲霉毒素B1(AFB1)和呕吐毒素(DON)是由寄生曲霉、黄曲霉、镰刀菌等产生的次级代谢产物,广泛存在于受污染的饲料及其原料中,不仅给农业经济造成重大损失,也给动物的健康带来严重威胁。传统脱除AFB1和DON方法主要有物理法和化学法,但上述两种方法都具有局限性,而利用微生物脱毒方法安全、高效,绿色环保已成为目前研究的热点,且展现出良好的应用前景。文章对AFB1和DON的特点、危害和致毒机制以及生物脱毒方面的研究进展进行阐述。     

贵州省辣椒制品中黄曲霉毒素B1的污染调查

为了解贵州省辣椒制品中黄曲霉毒素B1的污染情况,采用ELISA方法对2009—2010年贵州省9个地区市场销售的669份辣椒制品中黄曲霉毒素B1含量进行检测分析。结果表明,贵州省辣椒制品中总体存在黄曲霉毒素B1的轻度污染,尤其是干辣椒制品中黄曲霉毒素B1的污染情况较重。     

改性蒙脱石对黄曲霉毒素B1吸附机理的研究

研究了改性蒙脱石对黄曲霉毒素了的等温吸附,以及赖氨酸、酸碱度、温度、离体肠管吸收及透析袋透析对其吸附的影响。结果表明,改性蒙脱石在pH2．0和pH8．0时对黄曲霉毒素B1的最大吸附量分别为598．8μg/g、682．4μg/g;赖氨酸含量为2．0mg／mL和4．0mg／mL时对吸附无影响I酸碱度在pH2．0至pH8．0及温度在20℃至60℃时对吸附无明显影响;改性蒙脱石可减少离体肠管对黄曲霉毒素B1的吸收率及黄曲霉毒素B1通过透析袋的透析率。改性蒙脱石对黄曲霉毒素B1可能以化学吸附为主鸡小肠对黄曲霉毒素B1存在主动吸收过程。     

乙腈溶液中黄曲霉毒素B1的电子束辐射降解行为的研究

为了研究复杂食品体系中黄曲霉毒素B1的降解行为,以黄曲霉毒素B1为研究对象,以乙腈为简单溶剂系统模型,利用高效液相色谱法,对辐照前后黄曲霉毒素B1进行定量,研究不同辐照剂量、不同毒素初始浓度等因素对黄曲霉毒素B1电子束辐射降解效果的影响。结果表明:电子束辐射能够有效地去除乙腈溶液中的黄曲霉毒素B1。在实验范围内,随着辐照剂量、初始浓度的增加,黄曲霉毒素B1的降解率增加。