大白菜延伸DNA纤维的制备和检测(英文)

[目的]制备和检测大白菜延伸DNA纤维。[方法]以大白菜幼叶为材料,采用刀切分离细胞核、SDS释放DNA、盖玻片滑动牵拉DNA的方法,首次获得大白菜DNA延伸纤维。[结果]以基因组DNA和25SrDNA为探针进行原位杂交检测,该DNA纤维长度大约为1.93Mb,25SrDNA在大白菜基因组中的拷贝数在258-687之间。该方法获得的DNA延伸纤维平行、清晰、适合FISH分析。[结论]该研究将会促进大白菜基因图谱的构建和组织分析。     

苹果细菌人工染色体双色DNA纤维荧光原位杂交体系的建立及应用

【目的】建立苹果DNA纤维荧光原位杂交（Fiber FISH）技术体系,从而为利用该技术确定苹果基因组DNA序列间的位置关系、构建精细物理图谱等方面的应用奠定基础。【方法】以‘Florina’苹果幼叶为试材,通过液氮研磨,尼龙膜过滤和TritonX-100去除叶绿素等步骤提取细胞核。细胞核经碱裂解,采用盖玻片拉伸方法制备DNA纤维。比较细胞核不同裂解时间和在5种不同包被类型的载玻片上DNA纤维拉伸的效果。用碱裂解方法提取来自苹果‘Florina’自交不亲和S9基因座的4个细菌人工染色体（Bacterium Artificial Chromosome）BAC 34G16、 BAC 45M19、BAC 70J19和BAC 69A4。提取的质粒经PEG纯化,用地高辛或生物素标记探针。探针与DNA纤维制片经过80℃变性、37℃杂交2-3 d和洗片,采用“三明治”方法进行信号放大和检测,在荧光显微镜下观察试验结果。【结果】建立了以苹果幼叶为材料,液氮研磨提取细胞核,碱裂解细胞核和盖玻片拉伸制备DNA纤维的试验方法。提取的细胞核纯净、结构完整,细胞核浓度＞5×103个/μL。试验结果表明,细胞核裂解4 min,在多聚赖氨酸包被的载玻片上制备的DNA纤维平直、伸展均匀,纤维量多、细长,效果好。经原位杂交和信号检测,获得了清晰的、具有Fiber FISH典型特征的“念珠状”杂交信号。对已知大小和位置关系的两个BAC克隆BAC 34G16和BAC 45M19进行杂交信号测量和分析,得出BAC 克隆大小（Y,Kb）与信号长度（X,μm）的相关方程为Y=3.47X（R2=0.9215）,其斜率即为该试验技术体系Fiber FISH的分辨率3.47 kb•μm-1。试验对未知大小和位置关系的两个BAC克隆BAC 70J19和BAC 69A4成功地进行了鉴定,它们大小分别为(112.1±18.4)kb和(133.2±16.3 )kb,之间有（90.2±7.3）kb的重叠区域。【结论】建立了以苹果幼叶提取细胞核,制备DNA纤维和原位杂交的方法,获得了高分辨率的苹果DNA纤维原位杂交试验技术体系。     

甘蓝染色体及伸长DNA纤维制备技术的研究

以甘蓝根尖、花药、黄化苗等为材料,初步建立了甘蓝有丝分裂前中期染色体、减数分裂粗线期染色体以及伸长DNA纤维等3种具有不同空间分辨率的靶DNA载体的制备技术.结果表明:通过变温处理可以有效提高前中期染色体分裂相比率;采用0.002 mol/L 8-羟基喹啉20℃预处理1 h、2%纤维素酶和2%果胶酶混合液37℃酶解约2 h、0.075 mol/L氯化钾25℃低渗30 min,制备的前中期染色体效果最佳;2%纤维素酶和2%果胶酶混合液37℃酶解约3 h,可获得伸展良好、背景干净的粗线期染色体;分子梳理法与移动界面法相比,前者制备的伸长DNA纤维效果较好.此方法的建立为荧光原位杂交技术在甘蓝相关研究领域的应用打下了坚实的基础.

Abstract：

A method of preparation was established for different FISH (fluorescence in situ hybridization)resolution on prometaphase and pachytene chromosomes and extended DNA fibers with roots, anthers and albino seedlings of Brassica oleracea. Alternating temperature treatment effectively improved the divisionindex of prometaphase cells. Optimum results were obtained for the preparation of prometaphase chromosomes when pretreatment was made with 0. 002 mol/L 8-hydroxy quinoline at 20 ℃ for 1 h before treatment with the enzyme mixture of 2% cellulase and 2% pectase at 37 ℃ for approximately 2 h in combination with a hypotonic treatment with 0. 075 mol/L potassium chloride at 25 ℃ for 30 min. Well-spread pachytene chromosomes with clear background were obtained through the treatment with the enzyme mixture of 2% cellulase and 2% pectase at 37 ℃ for about 3 h. Molecular combing was better than moving interface for preparing extended DNA fibers. The method lays a solid foundation for the application of FISH in B. oleracea.     

玉米基因组DNA的提取

玉米鲜叶不经冻干处理直接用ＣＴＡＢ法提取ＤＮＡ，其分子量和纯度均较高，可用于限制酶切、基因文库构建及基因组分析等。     

柔嫩艾美耳球虫端粒DNA重复序列的South-ern印迹杂交分析

为进一步确定柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)端粒DNA的重复序列,为下一步端粒酶活性检测奠定基础,根据已克隆发表的E.tenella端粒DNA重复序列信息,设计了由4个端粒重复序列串联的寡聚核苷酸探针(TTTAGGG)4,并以生物素地高辛标记。将该探针与经BAL31-EcoRⅠ酶切后的E.tenella基因组DNA进行Southern印迹杂交分析。结果显示:E.tenella基因组DNA与探针杂交获得了清晰的杂交条带,随BAL31酶切时间的延长,杂交信号逐渐减弱,进一步证明了E.tenella端粒DNA重复序列为5-′TTTAGGG-3′,且此重复序列在E.tenella染色体的末端。     

整体荧光原位杂交用于检测水稻特异DNA程序的研究

文章报道了整体荧光原位杂交应用于检测水稻特异ＤＮＡ的实验程序。利用该实验方法,以经地高辛（ＤＩＧ）标记的ｒＤＮＡ作为探针,成功地在水稻根尖和花药内部组织检测与探针互补的片段。对于实验方法,结果表明,整体荧光原位杂交的成功与否受到多种因素的影响,包括组织的种类、固定剂的种类以及固定后的处理方法（主要是酶解与否）等。检测根尖ＤＮＡ可以采用φ（福尔马林）＝１％固定加上酶解;检测花药（花粉发育处于单核期）     

玉米食物纤维的开发及在食品中的应用

1 食物纤维也称膳食纤维,英文名称为Dietery Fiber,它虽然不具有糖类、蛋白质、脂肪、维生素、矿物质等营养素的营养作用,但它的保健价值和生理作用是不可忽视的,是人体健康所必不可缺少的。因此,目前已认定它为第七大营养素。谷物是食物纤维的主要供给源,然而在现代饮食生活中,食物纤维的绝大部分在各类精制过程中被坏掉了,精米、精面已不能作为食物纤维的供给源。随着人民生活水平的不断提高和社会老龄化的来临,人们越来越重视饮食的质量,食物纤维被看成“废料”的时代已结束,西方“文明病”是我们的前车之鉴,开发利用食物纤维已势在必行。     

三种玉米DNA提取方法探究

采用改良CTAB法、改良SDS法、快速提取法分别以玉米种子、黄化苗叶片、正常生长期绿色叶片为材料提取细胞总DNA。结果表明用3种不同方法提取的DNA纯度符合分子生物学实验要求。不同部位的材料、不同的提取方法，DNA得率不同。玉米干种子优适用于在快速提取法中提取DNA；改良CTAB法、SDS法宜从玉米黄化苗叶片和正常绿色叶片中提取DNA。     

玉米DNA分子标记及其研究进展

玉米是主要的粮食、饲料及工业加工作物,中国是玉米第二大生产国,提高玉米产量、改善玉米品质和增强玉米抗性,实现玉米生产的高产、优质、广适、多抗不仅是常规育种的主要目标,也是生物技术研究的重要内容之一。玉米DNA分子标记研究始于1975年,就玉米DNA分子标记的种类和特点及在构建分子标记图谱、比较基因组、主效基因定位和全基因组QTL分析、图位克隆、分子标记辅助选择、DNA指纹分析、杂种优势遗传成因分析、资源评估和物种进化等领域的研究进展进行综述。     

快速提取玉米DNA方法的研究

[目的]为了探索一种快速、简便,能够用于SSR分析的玉米DNA提取法。[方法]采用改进的常规DNA提取法和DNA快速提取法提取玉米种子胚和黄化苗叶片中的DNA,进行SSR分析,通过琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳对SSR产物进行检测。[结果]用常规法提取时,用氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提1次就可获得质量好和浓度高的DNA;无须抽提,直接吸取上清液,可得到高浓度的DNA,也能满足SSR分析的需要;同样的提取法,SDS的提取效果比CTAB好。对快速提取法进行分析表明,相同的提取液和提取方法,采用种子胚提取的DNA浓度和质量明显高于叶片DNA。[结论]该研究为SSR在玉米种质及纯度鉴定上的应用提供了技术上的保证,有利于该项技术的普及和推广。     

2种玉米胚乳DNA提取方法的比较

[目的]筛选出玉米胚乳DNA提取的最佳方法。[方法]采用改进的CTAB提取液,以高温和常温2种方法提取玉米胚乳基因组DNA,用紫外分光光度计、0.8%水平的琼脂糖凝胶电泳及PCR检测法比较了2种方法的提取效果。[结果]高温法所提玉米胚乳DNA浓度和纯度均达到分子生物学要求,而常温法所提DNA的纯度未达到分子生物学的要求。电泳检测表明,高温法提取的DNA均未降解,DNA条带整齐度较好,而用常温法提取的DNA都出现了降解。PCR检测结果表明,用高温法提取的DNA作模板的PCR所得条带清晰,明亮,而用常温法提取的DNA作模板的PCR条带不清晰。最佳聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)的浓度确定为玉米籽粒重的6%~10%。[结论]高温法更适宜用作玉米胚乳DNA提取。     

DNA指纹图谱在玉米杂交种真伪及纯度鉴定中的应用

讨论了玉米DNA指纹图谱的不一致性和外部性状表现之间的对等性或等价性,并对DNA分子标记技术信息的稳定性与真实性进行了分析。认为大多数玉米SSR标记并非基因内标记,同时玉米的基因组序列极其庞大,因此,个别SSR引物多态性并不能辨别被测自交系或单交种;目前,生产上改良品种较多,改良品种与被改良品种之间极为相近,这就难以利用SSR标记将其区分。提出在构建玉米杂交种与亲本的DNA指纹图谱、筛选SSR引物时,尽量选择重要农艺性状的基因内标记或与其紧密连锁的标记,从而增加杂交种纯度及真伪辨别的准确性和有效性,经多次反复摸索建立了最佳技术体系。     

快速提取玉米叶片DNA的新方法

以玉米自交系掖478和海9-21及其BC2F3群体的幼苗期叶片为材料建立了一种快速提取玉米叶片DNA的新方法:通过在常温下取1～2cm2大小的玉米叶片于1.5 ml离心管中,加入600μl CTAB提取液,使用组织研磨器研磨,然后加入600 μl氯仿:异戊醇(24:1),10 000r/min离心10min,取上清,最后加入冰冻的乙醇沉淀DNA即可.这种方法操作简单,耗时少,效率高,提取的玉米基因组DNA量也较可观.     

利用外源DNA导入玉米自交系创造变异的研究

采用玉米开苞导入技术通过花粉管通道将玉米自交系13A的总DNA导入玉米自交系沈109中,结果表明,D1和D2代的生育期、株高、穗位、株型等性状都发生了变异,总变异率为17.98%,并用原位杂交技术进行验证.讨论了后代变异、变异率和该项技术的特点.     

Ar+介导玉米DNA水稻不同pH条件下蛋白水解酶的表达

利用离子束介导技术,对水稻豫粳6号种子进行Ar+照射处理,然后用玉米基因组DNA介导液进行转化处理。采用复性电泳技术对其幼苗叶片在不同pH下的蛋白水解酶瞬时表达情况进行了分析。结果表明,不同pH条件下各处理蛋白水解酶表达存在明显差异。与对照相比,Ar+介导玉米DNA的水稻幼苗叶片在pH 4.5条件下检测到1条129 kD的新酶带,缺失41、97、192 kD的3条酶带;在pH 7.0时检测到1条167 kD的新酶带,缺失1条67 kD的酶带;在pH 8.5条件下缺失1条61 kD的酶带,并且在192~234 kD检测到1条活性较强的亮带区。这表明,Ar+介导玉米DNA的水稻在蛋白质表达水平上产生显著差异,这可能是玉米DNA片段进入受体水稻细胞并引起受体基因表达改变的结果。     

小麦DNA导入玉米引起性状变异的研究

提取小麦DNA用4种不同的方法导入玉米植株,受体后代可产生6.09×10~(-4)～8.7×10~(-3)的变异株。变异性状多数为株高、生育期、株型、分蘖、育性等由多基因控制的数量性状。大部分变异性状随自交代数的增加而渐趋消失,有些性状在后代呈不规律的分离,只有少数变异性状可稳定遗传。本实验还对不同导入方法的转化效果进行了比较,若以变异率大小衡量,4种方法的依次顺序为花粉粒法>柱头法>籽粒注射法>生长点法。     

快速CTAB法提取玉米种子胚基因组DNA

提出了一种从玉米种子胚中快速提取基因组DNA的新方法。经过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表明,该方法所提DNA纯度高,完整性好,完全可以满足SSR-PCR分析的需要。该方法具有安全、经济、快速、方便的特点,有较强的实用性。     

改进的DNA指纹技术在玉米杂交种纯度鉴定上的应用研究

本试验以幼苗为对照,利用CTAB法建立了一套简单、快速的玉米干种子DNA提取程序,该程序提取的DNA分子量大小与幼苗法相当,能够利用SSR引物进行扩增,可应用于玉米杂交种纯度检测。