猪肉中四环素类抗生素残留的ELISA检测

采用间接竞争ELISA检测猪肉及内脏组织中土霉素、四环素、金霉素的残留量,在50~300μg/kg浓度范围内,标准添加样品回收率81.3%~122.4%,变异系数2.7%~11.1%。本方法的建立为四环素类抗生素残留的快速检验试剂盒的研制奠定了基础。     

动物组织中四环素类抗生素残留的HPLC检测研究

本试验建立了动物组织中四环素类药物残留的高效液相色谱测定方法。试验分别采用50 mL/L高氯酸、Mcllvaine缓冲液为样品提取液;乙腈/磷酸二氢钠、甲醇乙腈0.01mol/L草酸(1.5 1.5 2.0,pH 2.0)为流动;流速1.0 mL/min,组合测定。结果显示,50 mL/L高氯酸为样品提取液,流动相甲乙腈0.01 mol/L草酸,检测灵敏度较高在此色谱条件下,土霉素、四环素、金霉素的最低检测限为100μg/kg,在100μg/kg~1 000g/kg浓度范围内,标准添加回收率为74.3%~97.1%,变异系数为0.43%~9.54%。本方法适用于四环素类抗生素残留的确证性定量分析。     

恩诺沙星在鸡肉组织中残留的ELISA检测方法研究

分别用N-羟基琥珀酰亚胺法和氯甲酸异丁酯法把恩诺沙星(ENR)与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和包被抗原,免疫新西兰大白兔得到ENR的多克隆抗体,建立了ENR间接竞争ELISA方法。结果表明:抗ENR血清效价达达1∶212以上,得到标准曲线的线性回归方程为Y=-0.2341X+0.1193(R2=0.9878),中值(IC50)为36 ng/mL,最低检测限(LOD)为10 ng/mL,标准曲线的线性范围为10~1000 ng/mL。批内变异系数为3.18%~7.64%,批间变异系数为9.69%~11.94%,鸡组织中的ENR的回收率为76.5%~89.42%。本试验建立的ELISA方法能够满足恩诺沙星兽药残留检测要求。     

双抗体夹心ELISA检测牛病毒性腹泻病毒的研究

建立了从粪便中检测牛病毒性腹泻（ＢＶＤ）病毒抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ。试验方法的最佳工作条件为，抗体包被量为１００μｇ／孔，酶标抗体的浓度为１：４００。对不同地区牛、羊、鹿粪样检测结果，牛的ＢＶＤＶ感染率为１６．５％￣８９．０％，羊为１４．６％￣８３．３％，鹿为１９．６％￣４４．４％，并且从许多地区的牛、羊同时检测到ＢＶＤＶ，表明本病在国内某些地区存在着严重的感染。     

双抗体夹心ELISA检测伪狂犬病病毒的研究

建立了检测伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ。试验方法的最佳工作条件为,抗体包被量为５μｇ／孔,酶标抗体的浓度为１２００。对人工感染兔和自然感染猪的组织脏器检测,结果发现扁桃体、脑和肺的检出率最高,其次为心、肝、脾、肾等组织。     

用间接ELISA法检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接ELISA方法，用该法检测20份人工感染鸡血清样品，抗体阳性率为100％，康复期鸡群血清抗体阳性率为43％，人工接种弱毒疫苗65d和170d鸡群血清抗体的阳性率分别为60％、70％。经反复试验，确定了诊断抗原的制备方法和间接ELISA检测鸡痘抗体的最佳反应条件，即抗原包被浓度10．8μg／孔，待测血清最佳稀释度为1：100。     

应用间接ELISA检测动物隐孢子虫病抗体

分别应用蔗糖和氯化铯密度梯度离心法纯化小型隐孢子虫（ Ｃｒｙｐ ｔｏｓｐ ｏｒｉｄｉｕｍ ｐ ａｒｖｕｍ ）卵囊,获得高纯度的抗原,建立了用间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测动物隐孢子虫病抗体的方法。抗原最适包被质量浓度是 ５．０ ｍ ｇ／ Ｌ,待检血清最佳稀释度是 １∶１００,明胶封闭体积分数和作用时间分别为 １％ 和 ６０ｍ ｉｎ。试验证明,该法具有快速、简便、特异和重复性好等优点。     

Detection of ruminant meat and bone meal in feeds by sandwich ELISA with monoclonal antibodies

A sensitive and reproducible enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using two monoclonal antibodies directed against a synthetic peptide with an amino-acid sequence related to the C-terminus of bovine myoglobin and the whole molecule of sodium dodecyl sulphate (SDS)-denatured bovine myoglobin was adapted for detecting bovine myoglobin in contaminated feeds. The ELISA employed bovine meat extract of a known myoglobin concentration as a calibration standard and had an limit of detection (LOD) of 3.54 ng/ml and an limit of quantification (LOQ) of 11.0 ng/ml corresponding to 0.022% and 0.067% (wt/wt) bovine meat-and-bone-meal (MBM) mixed in 20-fold-diluted feed extracts, respectively. A cut-off threshold of 20.6 ng/ml bovine myoglobin was set to simplify ELISA and facilitate quick assessment of test results without a tedious calibration process. The ELISA was able to detect bovine MBM in artificially prepared model feeds, mixed botanical feeds, mixed botanical feeds with skimmed milk, fish meal, pork meal and pork/chicken meal at 0.1% (wt/wt). It was also able to detect sheep MBM in test feeds, but showed no reactivity to swine MBM, chicken MBM, skimmed milk or gelatine of bovine origin. The advantages of this method are the quick and easy extraction protocol of proteins from test feeds, using 100 mM sodium sulphide and 0.6% sodium dodecyl sulphate in the extraction solution and the effective detection of bovine and sheep MBM at 0.1% (wt/wt).     

鸭瘟抗体检测方法研究

将鸭瘟组提病毒经Sephadex G200柱层析纯化后作为包被抗原，以健康鸭IgG提纯后免疫羊，制备羊抗鸭IgG，并用过碘酸钠法进行辣极过氧化物酶标记，建立了检测鸭瘟病毒抗体的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。经对不同血清样品的检测，表明此方法特异性高，重复性好，操作简便，适于大批鸭群抗体水平监测和流行病学调查，为合理免疫和科学预防提供了技术手段。     

间接ELISA检测新型鸭瘟病毒抗体

以50%饱和度的硫酸铵粗提病毒,再经Sephadex G-200过柱层析纯化了新型鸭瘟病毒,以此作为包被抗原,并用自制油苗免疫雏鸭,获得了高效价的血清抗体,又经过各种条件优化,建立了检测血清抗体的间接ELISA方法.经对不同发病日龄和免疫油苗后雏鸭的血清检测,证明该检测方法有很高的敏感性、特异性和重复性,可作为快速诊断该病的一种可靠方法.     

猪细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及抗原捕捉ELISA方法的建立

为制备猪细小病毒VP2蛋白单克隆抗体(McAb),建立检测猪细小病毒的抗原捕捉ELISA方法 (AC-ELISA),本研究以原核表达的重组VP2蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c雌鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA方法筛选,成功获得了2株能稳定分泌抗猪细小病毒VP2蛋白的McAb,命名为3C4、5F8。以多克隆抗体作为捕获抗体、单克隆抗体5F8作为检测抗体,通过双抗夹心ELISA各个反应条件的优化,建立检测猪细小病毒抗原捕捉ELISA方法。该方法与日本乙脑病毒(JEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)均不发生交叉反应;与RT-PCR相比较,符合率、敏感性和特异性分别为93.6%、90.9%、94.4%。本研究建立的猪细小病毒AC-ELISA有良好的重复性、敏感性和特异性,可应用于猪细小病毒感染的早期诊断。     

间接酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸系统综合征血清抗体的研究

本研究建立了检测猪生殖与呼吸系统综合征（ＰＲＲＳ）血清抗体的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为２μｇ／ｍｌ，血清最适稀释度为１∶１００。试验结果表明：ＥＬＩＳＡ的敏感性高于间接免疫荧光抗体试验（ＩＦＡ），是一种切实可行的诊断方法。     

夹心酶联免疫吸附试验检测包虫病循环抗原

建立了检测包虫病循环抗原的夹心酶联免疫吸附试验。对１３０份阳性血清（猪６５,羊６５）作了检测,总阳性率为７９．２％,抗原最小检出量为５０μｇ／Ｌ。     

四环素多克隆抗体的制备、鉴定及ELISA检测

采用戊二醛交联法和混合酸酐法制备了四环素-BSA完全抗原,分别将两种不同偶联法制备的四环素-BSA完全抗原按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,酶联免疫吸附法鉴定出多抗中含有四环素的特异性抗体,特异性抗体效价最高达1:320000,抑制率为50%(IC50)时的四环素浓度为92.6μg/mL,四环素的最低检测限为6.25μg/mL,四环素和金霉素的交叉反应率达到78%,该方法灵敏度高,为试纸条法快速检测四环素类的残留奠定了基础。     

反刍动物口蹄疫ELISA诊断试剂盒质量检测

利用参考血清,按试剂盒标明的使用方法,对上海优耐特生物医药有限公司提供的3批反刍动物口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体和3批反刍动物口蹄疫病毒NS非结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒的敏感性和特异性分别进行检测.结果表明,2种试剂盒的敏感性和特异性均符合相关标准的规定.     

间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体

用猪肾传代细胞IBRS－2增殖猪伪狂犬病病毒（PRV）鄂A株，病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇（Mr20000）浓缩后作为包被抗原。用纯化的猪血清IgG免疫家兔，HRP村记撮的兔抗猪IgG，制备出高效价的酶标抗体，酶标抗体工作浓度为1：50000；经各种条件的选择，建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接ELISA。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为39.2mg/L，血清最佳稀释度为1：20，与猪细小病毒、猪、O型口蹄疫、猪衣原体标准阳性血清呈阴性反应，与标准阴性血清和临床未感染PRV的猪血清呈阴性反应；与猪伪狂犬病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应；与美国进口的PRV抗体检测ELISA诊断试剂盒检测结果比较，45份猪血清的阴、阳性检出符合率均为100％。表明建立的间接ELISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点，可用于猪伪狂犬病血清抗体的定性和定量检测。