鲅鱼加工副产物水解液中ACE抑制肽分离纯化研究

以鲅鱼加工副产物为原料,经脱脂后进行碱性蛋白酶酶解,分离纯化具有ACE抑制活性的小肽。水解液经超滤、离子交换层析、凝胶过滤层析和反相高效液相色谱等逐级纯化,得到较纯的ACE抑制肽。结果表明,分子量小于3 kDa的超滤组分IV具有最高的ACE抑制活性,达45.6%;超滤高活性组分进一步经DEAE-Sepharodse FF阴离子交换层析分离,得到3个组分,其中组分A2活性最高,ACE的抑制率达50.3%;A2组分继而经Sephacryl S-100HR凝胶过滤层析分离,得到2个组分,其中B2组分ACE抑制率达83.4%;最后,B2组分经反相高效液相色谱进行分离,得到活性更高的C2组分,为下一步氨基酸序列测定提供了基础。     

荷斯坦牛红细胞抗菌肽的纯化及活性鉴定

以荷斯坦奶牛血液为原料,制备红细胞粗提物,通过离子交换层析和反相高效液相色谱法纯化抗菌肽,用琼脂糖弥散法测定其抗菌活性。结果表明：通过离子交换层析获得的阳离子峰具有抗菌活性,通过反相高效液相色谱对阳离子峰活性分布区域进行分离,获得了8个峰,8个峰对大肠杆菌均具有活性,F1、F3、F4、F5、F6和F8对金黄色葡萄球菌具有活性,F2、F4、F5、F6和F8对白色念珠菌具有活性。因此,试验成功地从牛红细胞中分离纯化到了抗菌肽,其中,F6的抗菌谱较广和抗菌活性较好。     

酶膜耦联反应降解酪蛋白制备抗菌肽

利用木瓜蛋白酶降解分离酪蛋白,采用间歇式酶解反应、间歇式膜分离反应、酶膜耦联反应3种不同的模式制备抗菌肽,以金黄色葡萄球菌为指示菌,用比浊法测定抑菌率。结果表明,间歇式酶解反应所得的抑菌肽抑菌效果最差;间歇式膜分离反应组酶解时间7 min的透过液抑菌效果最好,抑菌率达23.60%;酶膜耦联反应分离后分子量4 k Da的组分抑菌效果最佳,透过液抑菌率最高达24.10%。将酶解反应与膜分离耦合来水解酪蛋白,发现水解物的不同分子量成分与抑菌效果有关,证明此方法可用来工业化生产抗菌肽。     

地衣芽孢杆菌抗菌肽的纯化及抗菌特性分析

从地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）LY12发酵液中分离纯化抗菌肽,并得到抗菌肽抗菌特性。通过超滤、(DEAE-Sepharose FF离子交换层析、Sephadex G-15分子筛凝胶过滤层析、反向高效液相色谱（RT-HPLC）等方法纯化该抗菌肽。LC-ESI-MS质谱显示抗菌肽分子量为2750.785Da,同Tricine SDS-PAGE分析结果基本一致。体外抗菌试验结果显示,抗菌肽LYF12能够抑制丝状真菌、细菌的生长。对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、藤黄微球菌（Micrococcus aureus）、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）、副溶血性弧菌（Vibrio parachaemolyticus）的最低抑菌浓度分别为9.8、19.8、20.7、7.2、9.6、10.2 和15.7μg/ml。抗菌肽显示出对革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌及真菌具有较好的抗菌效果。从地衣芽孢杆菌LY12分离的抗菌肽在食品防腐中具有潜在的应用价值。     

酶膜耦联反应降解酪蛋白制备抗菌肽

利用木瓜蛋白酶降解分离酪蛋白,采用间歇式酶解反应、间歇式膜分离反应、酶膜耦联反应3种不同的模式制备抗菌肽,以金黄色葡萄球菌为指示菌,用比浊法测定抑菌率。结果表明,间歇式酶解反应所得的抑菌肽抑菌效果最差;间歇式膜分离反应组酶解时间7 min的透过液抑菌效果最好,抑菌率达23.60%;酶膜耦联反应分离后分子量<4 kDa的组分抑菌效果最佳,透过液抑菌率最高达24.10%。将酶解反应与膜分离耦合来水解酪蛋白,发现水解物的不同分子量成分与抑菌效果有关,证明此方法可用来工业化生产抗菌肽。     

海带褐藻糖胶的分离纯化及其抗氧化活性测定

为更好地开发海带资源,分别采用DEAE-Sepharose FF弱阴离子交换柱层析、高效液相凝胶色谱对海带褐藻糖胶粗品进行分离纯化,结果表明,2种方法均可用于褐藻糖胶的分离,均分离出3个组分,离子交换层析分离出的组分命名为D-1,D-2,D-3。高效液相凝胶色谱分离的3种组分命名为H-1,H-2,H-3,其分子量分别为193.148,74.407,44.452 kD。对D-1,D-2,D-33种组分进行抗氧化活性测定,3种组分对DPPH自由基和·OH均表现出一定的清除能力,且分子量越小,清除自由基能力越强,体外抗氧化活性越好。     

绿豆渣ACE抑制肽的纯化鉴定及构效关系初探

以绿豆淀粉生产副产物中的绿豆渣为原料,酶解制备血管紧张素转换酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽。采用超滤法、凝胶层析色谱法、反相高效液相色谱法进行分离纯化,对分离出的高活性组分进行二级质谱结构鉴定。结果表明,在绿豆渣中能分离出3条具有ACE抑制活性的肽链,分别为FLVNPDDNENL,FLVNPDDNENLRII,KDNVISEIPTEVLDL,并对构效关系进行分析。     

虎奶菇菌核多糖SHNP的分离纯化及形貌观测

利用DEAE-52纤维素柱层析和Sephadex G-1500凝胶柱层分离纯化热水浸提的虎奶菇菌核多糖,得到组分SHNP。利用紫外分光光度计和高效液相色谱鉴定其纯度,高效液相色谱测其分子量,气相色谱法进行单糖组成分析,环境扫描电镜观测了其分子形貌。结果显示, SHNP的分子量为1.463×106 Da,为只含葡萄糖的大分子葡聚糖,环境扫描电镜显示SHNP固体聚集体表面形貌较为规则、平整光滑且呈现排列紧密的片状和杆柱状结构。     

樟芝多糖的分离纯化和抗氧化活性

【研究目的】研究樟芝多糖分离纯化的方法以及其体外抗氧化活性,【研究方法】水浸提樟芝多糖,Sevag法除蛋白,利用sephadexG-200凝胶柱层析进行分离纯化,红外光谱、高效液相色谱测定结构和分子量,并进行樟芝多糖的体外抗氧化试验。【结果】樟芝菌丝体多糖ACP1和樟芝发酵液多糖ACP2多糖含量分别为31.76%和38.09%,提取率分别为1.59%和4.89%,特性粘度为[η]=8.382和[η]=1.999。红外光谱测定表明,ACP1、ACP2具有多糖的特征吸收,并且其糖环为吡喃环。ACP1、ACP2经高效液相色谱GPC柱分离得到三个峰,计算得各组分的数均分子量和重均分子量。利用sephadexG-200凝胶柱层析ACP1和ACP2后各得到2个洗脱主峰ACP1-1和ACP2-1。对ACP1-1和ACP2-1进行纯度鉴定,结果表明两者为均一多糖,超氧自由基的清除率分别达到61.6%和54.7%,【结论】樟芝多糖具有较强的抗氧化能力。     

从蛋清浓厚蛋白中提取溶菌酶技术的研究

通过中空纤维超滤法及亲和凝胶层析法对鸡蛋清中溶菌酶进行提取精制,结果表明蛋清溶菌酶的最佳超滤提取工艺为:连续稀释4倍、超滤温度35℃,料液pH值8.5,进样压力0.08 MPa,再经超滤浓缩处理,酶活得率为131.93%,溶菌酶透过率为73.57%,样品液的酶活约为4 700 U/mL。经过亲和凝胶层析的进一步纯化及真空冷冻干燥,最终蛋清溶菌酶冻干粉的酶活为18 500 U/mg,蛋清溶菌酶的酶活得率为180.83%。     

蚕蛹蛋白抗氧化肽的制备及其纯化

以DPPH自由基清除率为指标,采用正交试验,优化Alcalase酶解蚕蛹蛋白制备抗氧化肽的工艺条件;采用超滤、DEAE-52纤维素柱层析,以及Sephadex G-50柱层析分离纯化蚕蛹蛋白抗氧化肽。试验结果表明,酶解液制备蚕蛹蛋白抗氧化肽的最优工艺条件为:酶解温度30℃,pH值7.5,时间20min,底物质量分数3%,加酶量3.5%。Mr≤5ku时,组分有很强的体外抗氧化活性,从Mr≤5ku组分中获得了5个抗氧化肽组分,它们的体外抗氧化活性大小依次为:组分Ⅱ>组分Ⅲ>组分Ⅰ>组分Ⅴ>组分Ⅳ。     

Protamex酶解玉米蛋白质制备生物活性玉米肽的研究

利用Protamex蛋白酶控制玉米蛋白水解,制备有利于消化吸收,具有降血压和抗氧化等特定生理功能的玉米肽。适度变性的玉米蛋白易被Protamex蛋白酶水解,热处理的时间和温度均影响玉米蛋白的变性程度,经温度85℃热处理60min的玉米蛋白的水解度最大。相同的水解时间,在pH值为9.0,温度60℃时,该酶对变性玉米蛋白的水解度最大,在此条件下酶解60min,消耗NaOH（5mol/L）16.3mL,玉米的水解度为32.5%,肽的得率为51.2%。SephadexG-25对玉米蛋白水解产物的分离结果表明,Protamex蛋白酶水解玉米蛋白可生成分子量不同的5个组分。     

Protamex~酶解玉米蛋白质制备生物活性玉米肽的研究

利用Protamex~蛋白酶控制玉米蛋白水解,制备有利于消化吸收,具有降血压和抗氧化等特定生理功能的玉米肽。适度变性的玉米蛋白易被Protamex~蛋白酶水解,热处理的时间和温度均影响玉米蛋白的变性程度,经温度85℃热处理60min的玉米蛋白的水解度最大。相同的水解时间,在pH值为9.0,温度60℃时,该酶对变性玉米蛋白的水解度最大,在此条件下酶解60min,消耗NaOH(5mol/L)16.3mL,玉米的水解度为32.5%,肽的得率为51.2%。SephadexG-25对玉米蛋白水解产物的分离结果表明,Protamex~蛋白酶水解玉米蛋白可生成分子量不同的5个组分。     

三步法分离纯化副干酪乳杆菌细菌素的初步研究

为了提高副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)HD wy-1细菌素的分离纯化得率和活性。本研究主要利用三步法从副干酪乳杆菌HD wy-1发酵液中分离纯化得到抑菌物质副干酪乳杆菌细菌素,分别采用硫酸铵沉淀、CM Sepharose Fast Flow阳离子交换柱层析和Sephadex G-75凝胶层析分离技术对副干酪乳杆菌HD wy-1产生的细菌素进行纯化。结果表明：细菌素得率为39.93%,比活为1.56×103 AU/mg,是纯化前的2.87倍,得到的细菌素样品经Tricine-SDS-PAGE电泳出现清晰条带,大小约为72 KDa。通过该方法可以较好的对副干酪乳杆菌的细菌素进行回收。该工作为研究菌体内细菌素的理化性质及其开发应用提供了理论基础。     

高活性纤维素酶的分离纯化

为了纯化纤维素酶粗酶液,通过采用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶柱层析、DEAF FF弱阴离子交换柱层析的方法,研究纤维素酶粗酶液分离纯化的方法。结果表明：采用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶柱层析、DEAF FF弱阴离子交换柱层析的方法对内切葡聚糖苷酶组分的分离纯化有效。通过试验研究得到一种内切葡聚糖苷酶组分,其比活力提高了5.89倍,回收率为22%。     

大麦醇溶蛋白及其酶解产物的抗氧化活性研究

为了探寻出大麦蛋白中最具抗氧化活性的片段,对大麦醇溶蛋白粗提物及其酶解产物的抗氧化活性进行研究。从大麦面粉中提取大麦醇溶蛋白,对其粗提物进行凝胶层析法分离纯化,并模拟人体消化道系统酶解得到不同组分的酶解产物,采用FTC法及FARP法对酶解前后及不同组分酶解产物的抗氧化活性进行比较。结果显示,大麦醇溶蛋白酶解产物的抗氧化活性显著高于其未经酶解的粗提物,酶解产物中C-大麦醇溶蛋白的活性显著高于其他组分。可见,大麦醇溶蛋白是一种优良的天然抗氧化剂,并且经消化酶解会大大提高其抗氧化活性。     

桔梗多糖的分离纯化与含量测定

利用离子交换凝胶柱层析法分离纯化桔梗多糖,并对纯化组分进行纯度鉴定和糖含量及蛋白质含量测定。桔梗饮片经热水浸提、乙醇分步沉淀得桔梗粗多糖PPS80,Sevage法脱蛋白后,通过DEAE-Sepharose FF离子交换和Sephadex G-75凝胶柱层析进行纯化鉴定。分别采用苯酚-硫酸法和考马斯亮蓝染色法测定纯化后各组分的糖和蛋白质含量。试验结果表明,从桔梗粗多糖PPS80中分离得到2个均一性组分PPS80-I和PPS80-II,糖含量分别为90.32%和86.75%,蛋白质含量分别为0.48%和1.96%。该试验首次采用DEAE-Sepharose FF离子交换柱层析结合Sephadex G-75凝胶柱层析有效分离纯化出桔梗多糖均一性组分,为桔梗多糖的进一步研究提供基础。     

大叶南五味子多糖的分级与纯化

为了获得大叶南五味子多糖单体。用乙醇为沉淀剂对大叶南五味子多糖进行分级,Sephadex柱色谱梯度洗脱分离各级多糖,蒽酮-硫酸比色法测定糖含量、检测洗脱液吸光度值。乙醇分级沉淀结果显示从大叶南五味子多糖分到KPSⅠ~Ⅴ五个级分多糖,糖含量分别为76.51 %、78.36%、95.13%、92.41%、88.35%;Sephadex柱色谱对各分级多糖分离结果显示,KPSⅡ、Ⅲ、Ⅴ中所含多糖分子量基本一致,为纯多糖;KPSⅠ、Ⅳ中含有不同分子量多糖,其中KPSⅠ-1、KPSⅡ-1、KPSⅢ-1、KPSⅣ-6、KPSⅤ-1均为纯多糖。分级纯化的大叶南五味子多糖单体为其化学结构的分析奠定基础。     

东乡野生稻过氧化物酶分离纯化及其酶学特性研究

过氧化物酶与植物体内活性氧的清除和逆境适应性反应密切相关,为了深入研究过氧化物酶在植物抗逆反应中的重要作用,本文以东乡野生稻叶片组织为材料,采用浸提、盐析、透析和柱色谱法分离纯化POD蛋白,采用聚丙烯凝胶活性电泳检测蛋白,利用愈创木酚法研究POD的活性和酶学特性。结果表明,经磷酸缓冲液浸提、40%~80%硫酸铵盐析、再经Sephadex G-100凝胶柱层析等步骤,从东乡野生稻叶片组织分离制备得到POD1同工酶组分,酶蛋白的纯化倍数为16.49,比活力为568.80 U/mg。聚丙烯凝胶活性电泳检测仅呈单一POD1同工酶带,属于单一组分。经测定,POD酶Km为1.26 mmol/(L?min),最大反应速度Vmax为17.51 mmol/(L?min),最适宜的pH为5.0,最适宜温度35℃~45℃,Cu2+和Zn2+对POD有较强的激活作用,而Fe3+对POD活性有一定的抑制作用,POD酶活性受20%的甲醇、乙醇和丙酮等有机试剂抑制。本研究为进一步探讨东乡野生稻POD抗氧化功能和东乡野生稻抗寒生理提供了基础材料和依据。