珍稀共生食用真菌松茸DNA指纹研究

利用ＲＡＰＤ分析技术他中国主产区野生松茸的ＤＮＡＥ指纹图谱。从４０个随机引物中筛选到１６个扩增效果好、重复性稳定的引物以介导不同来源的２０个松茸子实体ＤＮＡ的扩增,均得到清晰可辨的ＤＮＡ指纹。分隔数据分析表明供试松茸在７２％相似水平上聚成一大类,支持关于云南、四川、吉林的松茸是一个相同物种的结论。     

云南香格里拉新鲜松茸大量出口日本

松茸作为世界上珍稀名贵的天然药用菌,我国主要产茸区有香格里拉产茸区、楚雄产茸区和延边产茸区等地区。松茸含有18种氨基酸等丰富的营养以及不错的口感深受人们的喜爱。而日本人对松茸更是情有独钟,几乎到了“崇拜”的地步。但是日本自产的松茸很少,大部分需要从中国、韩国等地进口。据了解,今年7月份以来,共有38.4 t产于云南香格里拉的松茸通过南航航班从昆明经广州中转至日本大阪,比去年同期增加了75%。     

云南：多措并举加大对日松茸出口

据报道,受日本地震、海啸引发核辐射影响,日本部分地区蔬菜辐射超标,供应链面临重组。而云南是我国唯一至今未检出核辐射的省区,扩大对日蔬菜出口面临新的机遇。近日,云南省商务厅组织召开对日本出口蔬菜形势座谈会,     

云南出台松茸出口经营行业管理细则严禁收购“童茸”

“松茸出口经营,二次违规将罚5万元。”这是新出台的2011年松茸出口经营行业管理细则中的内容,也是云南省加强野生茵出口食品安全监管力度,扩大野生茵出口的措施之一。6月29日,记者从云南省2011年野生茵出口,食品安全工作会议上获悉,已于此间出台的2011年松茸出口经营行业管理细则,取消了鲜松茸出口统一时间及结束时间;明确鲜松茸长度在5厘米以下的为童茸,严禁收购。细则中还对鲜松茸采摘、运输、自检到入库分检,再包装等各个环节提出细化措施。值得关注的是,为了避免国内收购价与日本市场销售价格倒挂,减少企业和经营者的亏损,在松茸经营最关键的7月20日左右,将公布松茸收购最高限价和最低出口价。在此期间,超过限价即定义为“炒价”,二次违规后将处以罚金5万元。     

云南出台松茸出口经营行业管理细则 严禁收购“童茸”

"松茸出口经营,二次违规将罚5万元。"这是新出台的2011年松茸出口经营行业管理细则中的内容,也是云南省加强野生菌出口食品安全监管力度,扩大野生菌出口的措施之一。     

改良CTAB法提取冷季型草坪草基因组DNA的研究

为获得高质量的冷季型草坪草基因组DNA,用改良和优化常规CTAB提取方法,提取冷季型草坪草基因组DNA,并对所得DNA的质量和浓度进行了检测.结果表明:改良CTAB-B法要好于常规CTAB法和改良CTAB-A法,提取的基因组DNA的OD260/OD280在1.8～1.9之间,电泳条带清晰,RNA消化彻底,DNA无明显降解,其含量和纯度均能满足基因工程操作的要求,且酶切效果理想.     

基于SSR标记的澳洲坚果种质资源DNA指纹图谱的构建

【目的】筛选一套SSR引物,构建澳洲坚果种质DNA指纹图谱,为澳洲坚果种质资源收集和品种保护提供技术支持。【方法】对澳洲坚果基因组序列进行SSR位点搜索并设计引物,以表型差异较大的4份种质为试材,利用琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选多态性引物,将筛选得到的引物荧光标记,建立基于荧光SSR标记的澳洲坚果种质鉴定体系。【结果】挑选的240对SSR引物经PCR扩增后进行2%琼脂糖凝胶电泳检测,选取其中155对SSR引物进行6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。最终选择22对扩增稳定、多态性高的SSR引物进行荧光标记,经毛细管电泳检测,获得83份澳洲坚果的基因型数据。利用其中9对荧光引物组合,构建了上述材料的DNA指纹图谱。【结论】筛选获得高效SSR引物,用于澳洲坚果种质资源的快速分子鉴定。     

疑似松茸菌株Z-s、R-b、H-c的DNA指纹鉴定

以松茸子实体为DNA参照样品,对疑似松茸菌株Z-s、R-b、H-c进行亲菌鉴定。运用RAPD-PCR技术,采用筛选的5个随机引物对1个供试松茸子实体及3个疑似松茸菌株Z-s、R-b、H-c进行RAPD(Random Amplified Polymorphic) -PCR鉴定,获得DNA指纹图讲;分析菌株Z-s、R-b、H-c间及其与松茸子实体间DNA同源性及遗传相似度,以鉴定疑似松茸菌株Z-s、R-b、H-c是否是目的松茸菌株。实验结果其相似系效分别为:Ssz 35.7%;Sbz 74.1%;Scz 76.9%,可以看出疑似菌株Z-s与松茸子实体DNA指纹图谱差异比较明显,相似系数只有Ssz 35.7%,而疑似菌株R-b和H-c则和松茸子实体的DNA指纹图谱比较相近,相似系数分别为Sbz 74.1%,Scz 76.9%。在分离菌株的形态及生物学特征进行表型鉴别的基础上,初步判定疑似菌株R-b和H-c-很可能是目的松茸菌株。     

一种不经热浴从双孢蘑菇子实体中提取DNA的新方法(英文)

介绍一种不经热浴快速从双孢蘑菇子实体中提取DNA的新方法,并与传统的CTAB和SDS法相比较,结果显示:该方法得到的DNA完整性好,时间短,步骤少,有毒试剂用量少,在提取DNA的质量、得率、时间及完整性等方面都优于传统的CTAB和SDS法,为食药用菌子实体DNA的提取参考。     

板栗基因组AFLP银染反应体系的建立

为了建立准确、高效、实用的板栗品种鉴别体系和方法,采用改进的CTAB—DNA提取方法,从板栗的嫩叶和老叶中提取获得总DNA。所得DNA样品的D260nm/D280nm值为1.7～1.9,琼脂糖凝胶上主带清晰、较少降解、样品纯度高、蛋白去除干净且获得率高。该体系使用操作简便、快捷、高效,适合于板栗DNA提取,所提取的DNA样品不含PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂,可被限制性内切酶MseI和EcoRI完全酶切,适合AFLP-PCR反应应用,得到清晰的指纹式样,适宜用作板栗品种鉴别的有效方法。     

花椒DNA提取方法的研究

采用经过改良的SDS法和CTAB法对不同品种花椒进行基因组DNA提取,用核酸蛋白分析仪测量DNA浓度,将提取的基因组DNA进行ISSR分析,以期找到一种提取花椒总DNA提取的最优方法。结果表明:改良的CTAB法更适合花椒基因组DNA的提取,CTAB法比SDS法提取的DNA纯度好,所获得DNA样品的OD260/OD280比值在1.8~2.0范围内,琼脂糖凝胶电泳图谱显示条带清晰。     

大肠杆菌高效感受态细胞的制备及快捷转化体系的建立

比较了不同方法制备的大肠杆菌感受态细胞的转化效率,并优化了质粒DNA转化感受态细胞体系。结果表明:高效法制备的感受态细胞转化效率极显著高于普通法制备感受态细胞的转化效率,其效率提高了966.1%,而高效法感受态细胞转化效率与商品化的感受态细胞转化效率差异不显著。-80℃超低温长期保存时,相比较于15%甘油,以7%DMSO为冻存保护剂保存的感受态细胞其转化效率达到1.1×107,较15%甘油冻存保护剂保存的转化效率提高了69%。温浴5 min,冰浴10 min时,其转化效率最高,达到4.95×107。应用高效法制备的感受态细胞转化不同大小质粒的效率极显著高于普通大肠杆菌感受态细胞,其转化效率较普通大肠杆菌感受态细胞的提高了550%,而转化时间缩短至普通大肠杆菌感受态细胞的12.5%,仅为15min。     

提取香菇DNA的LETS改进法

用改进的LETS法提取香菇子实体DNA,就是在香菇子实体匀浆中加入等体积的苯酚：氯仿：异戊醇混合液前,于匀浆液中加入0．25体积的无水乙醇和0．11体积的5mol／L醋酸钾溶液,能显著提高所提取DNA的溶解性。     

叶籽银杏DNA甲基化水平与模式变异的研究

以萌动期与展叶期的叶籽银杏和银杏为试材,采用基于DNA甲基化敏感扩增多态性分析（Methylation-sensitive amplification polymorphism,MSAP）方法,在全基因组水平上探究叶籽银杏、银杏不同发育期DNA序列中CCGG位点的甲基化水平及模式变化特征。萌动期选用22对引物,在叶籽银杏和银杏中检测到扩增位点为498和384个,甲基化位点为237和165个,其总甲基化率分别为47.6%和42.4%;展叶期选用40对引物,在叶籽银杏有叶生胚珠（YZ2）、无叶生胚珠（YC）及银杏（CK）叶片中检测到扩增位点767、600及367个,甲基化位点分别为370、244及152个,其总甲基化率分别为48.3%、40.5%及41.5%。进一步对不同发育期叶籽银杏、银杏DNA甲基化模式的变化特征进行分析,结果显示：萌动期、展叶期叶籽银杏与银杏相比均有超过半数的位点（52.1%、54.6%及64.2%）DNA甲基化模式发生多态性变化,萌动期叶籽银杏相对于银杏其变化趋势以超甲基化为主;展叶期叶籽银杏有叶生胚珠相对于叶籽银杏无叶生胚珠及银杏甲基化的变化趋势以超甲基化为主,叶籽银杏有叶生胚珠相对于银杏DNA甲基化模式变异幅度更大,超甲基化水平更高,显示出叶籽银杏基因组独特的DNA甲基化特征。     

不同方法提取青藏高原蕨麻总DNA的比较研究

以改良CTAB法、改良SDS法、试剂盒法提取青藏高原蕨麻总DNA;用紫外分光光度法测定提取的青藏高原蕨麻的总DNA浓度和质量;用琼脂糖凝胶电泳法、分光光度法测定提取的青藏高原蕨麻的总DNA质量,以期筛选出青藏高原蕨麻总DNA提取的最佳方法。结果表明:用改良SDS法提取的蛋白质含量最高,OD260/OD2801.61左右,用改良CTAB法提取的DNA的OD260/OD2801.76左右;用试剂盒法提取的DNA的OD260/OD2801.70左右;用改良CTAB法提取DNA的浓度在100μg/mL。     

白菜抗虫基因转化受体体系的建立

 就白菜基因转化受体系统的诸多因素进行了试验, 初步建立了良好的白菜抗虫基因转化受体体系。     

DNA content,morphometric and molecular marker analyses of Citrus limonimedica, C. limon and C. medica for the determination of their variability and genetic relationships within the genus Citrus

This work investigated the fingerprinting and phenotyping of Citrus germplasm; species selected were of historical importance belonging to Citrus limonimedica Lush. and its supposed ancestors, along with some other species of the Citrus genus. An integrated approach based on the exploitation of nuclear DNA content, morphological traits and molecular markers, such as RAPD fingerprints and ITS-based SNPs, was employed. We studied a core collection of 54 distinct accessions, including 43 genotypes of the Citrus species (18 species or supposed species) and 11 genotypes of the Poncirus genus, which was used as the reference outgroup. Morphological trait analysis and statistical analysis of DNA content and markers were useful for reconstructing a Citrus phylogeny. In particular, our experiments aimed at estimating the genetic variation within and the genetic relatedness among C limon (L.) Burm., C. limonimedica and C. medica L. to shed light on the hybrid origin hypothesis of C. limonimedica. The results of the multidisciplinary analyses allowed us to confirm a remarkable differentiation between Poncirus and Citrus genera and to highlight a close relationship among the three investigated Citrus species but a distinct difference between these three species and other species in the Citrus genus. RAPD fingerprints and ITS polymorphisms enabled us to point out a variation gradient between lemon and citron, with C. limonimedica as a possible intermediate species. Some accessions of C. medica and C. limonimedica that deviate from such a trend suggest recurrent introgression and/or hybridisation with other species of Citrus.