基于双柱固相萃取-色质联用技术同时检测鸡肉中8种抗病毒药物残留

建立了双柱固相萃取-液相色谱-串联质谱法,可实现对鸡肉中金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚胺、吗啉胍、利巴韦林、阿昔洛韦、更昔洛韦、奥司他韦等8种抗病毒药物的同时分析。采用三氯乙酸水溶液-乙腈对鸡肉中8种抗病毒药物残留同时提取,依次通过石墨化碳柱和强阳离子交换柱以实现对目标药物的富集、净化,选用石墨化碳色谱柱进行分离,超高效液相色谱-串联质谱检测。本文通过研究不同提取溶液、固相萃取柱及色谱柱对检测结果的影响,最终建立优化的检测方法,采用外标法计算,检测限1μg/kg,定量限2μg/kg,添加浓度在2~200μg/kg范围内的回收率大于80%,适用于鸡肉中8种抗病毒药物的同时分析。     

分散固相萃取结合亲水作用色谱-串联质谱法检测预混合饲料中7种抗病毒药物含量

建立了同时检测预混合饲料中7种抗病毒药物含量的分散固相萃取(Qu CHERS)结合亲水作用色谱(HILIC)-串联质谱检测方法,包括了金刚烷胺、吗啉胍、金刚乙胺、阿昔洛韦、利巴韦林、更昔洛韦和奥司他韦。选择使用乙腈提取,无水Mg SO_4进行脱水和盐析,C18粉和丙基乙二胺(Primary secondary amine,PSA)进行样品净化。使用亲水作用液相色谱柱进行分离,流动相为0.2%甲酸和乙腈,采用梯度洗脱,三重四级杆质谱进行定性定量分析。实验结果表明,方法的最低检出限为25μg/kg,最低定量限为50μg/kg,在50~5000μg/kg范围内线性关系良好(r0.995),添加回收率在60%~110%之间,RSD10%,表明该方法具有较好的准确度与精密度。     

鸡蛋中金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林和吗啉胍多残留检测方法的研究

研究采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱法建立了鸡蛋中金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林和吗啉胍4种抗病毒药物多残留的检测方法。样品经过-26℃低温反复冻融清除蛋白质后,在水饱和的正己烷处理条件下,采用超声法去除脂肪,并通过Cleanert PCX阳离子交换固相萃取柱净化,使用Eclipse Plus C18反相色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm)进行分离,以5 mmol/L乙酸铵和乙腈水溶液作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI+)模式电离,多反应监测模式进行定性定量测定。结果表明:金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林、吗啉胍4种待测物在0.01~200.0 ng/m L浓度范围内均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.999,该方法测定鸡蛋中金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林、吗啉胍的最低检出限(S/N=3)为1.0μg/kg,定量限(S/N=10)为2.0μg/kg,平均回收率多集中于80%~100%,批内和批间变异系数均≤12%。该方法的建立对于监控鸡蛋等动物源性食品中的兽药残留具有积极作用。     

高效液相-串联质谱法测定蜂蜜中利巴韦林残留研究

本研究采用同位素内标法建立了蜂蜜中利巴韦林残留液相色谱-串联质谱方法。样品经提取后经混合型阳离子交换固相萃取净化后上机测定,色谱柱为Hypercarb多孔石墨碳色谱柱(100 mm×2.1 mm,5μm),以0.1%(V/V)甲酸甲醇-0.1%(V/V)甲酸水为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾正离子(ESI⁺)和多反应监测(MRM)模式测定,同位素内标法定量。结果显示,利巴韦林进样浓度在2～100 ng/mL浓度范围内呈良好的线性关系(R²=0.9995);方法检出限和定量限分别为1μg/kg和2μg/kg;2、4、20μg/kg三个添加水平下,回收率在67.6%～112.7%之间,批内、批间相对标准偏差均小于15%。本方法简便、准确、快速、灵敏,适用于蜂蜜中利巴韦林残留检测。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测抗菌药物中非法添加利巴韦林的研究

建立了多种抗菌药物中非法添加利巴韦林检测的UPLC-MS/MS方法。样品经乙腈提取稀释后,采用ACQUITY UPLCBEH amide色谱柱为分离柱,质谱正离子扫描分析测定。结果显示,利巴韦林在1~50 ng/m L范围内线性关系良好(R2=0.9992),样品检出限为0.5 mg/g,定量限为2 mg/g;在40、50、60 mg/g添加水平的回收率为90%~110%,批内批间变异系数均小于10%。本方法灵敏、快速、重现性好,适用于多种抗菌药物中非法添加利巴韦林的检测。     

体外抗鸭坦布苏病毒的药物筛选试验

为了探讨抗病毒药物对鸭坦布苏病毒的作用,选用5种常用的抗病毒药物(金刚乙胺、脱氧若卡素钠、病毒灵、利巴韦林、阿昔洛韦)进行体外抗鸭坦布苏病毒的药物筛选试验。结果表明,利巴韦林药物浓度为0.156 mg/m L~0.625 mg/m L时,在DF-1细胞中能抑制鸭坦布苏病毒的增殖、利巴韦林在体外对鸭坦布苏病毒具有抗病毒作用;而阿昔洛韦、金刚乙胺、脱氧若卡素钠、病毒灵等4种药物对鸭坦布苏病毒无明显抗病毒作用。     

免疫抗病毒新药糖萜素

随着现代养殖业集约化规模化发展,畜禽疫病的危险性也在逐渐加大．为了预防疾病,人们往往在饲料中添加抗生素进行预防,但由于其频繁应用,使病原微生物耐药性增加,药物残留增多。另外。近年来病毒病的发生也不断呈上升趋势,而抗病毒的西药金刚烷胺、金刚乙胺、阿昔洛韦、吗啉（双）胍（病毒灵）、利巴韦林已被禁止应用于兽医临床（农业部560号公告）。因此,饲用抗生素替代物和免疫抗病毒新产品成为当前研究的热门。     

UPLC-MS/MS法测定氟喹诺酮类药物可溶性粉中非法添加物利巴韦林

建立了氟喹诺酮类药物可溶性粉中非法添加物利巴韦林检测的UPLC-MS/MS方法。样品经提取稀释后,采用ACQUITY UPLCR BEH amide色谱柱为分离柱,质谱正离子扫描测定。结果显示,利巴韦林在1~50 ng/mL的范围内线性关系良好（R2=0.9984）;样品检出限为0.5 mg/g,定量限为2 mg/g。在40、50、60mg/g添加水平的回收率为90%～110%,批内批间变异系数均小于10%。本方法快速、灵敏、重现性好,适用于氟喹诺酮类药物可溶性粉中非法添加利巴韦林的检测。     

九种药物对新城疫病毒的体外敏感性试验

利巴韦林、盐酸吗啉双胍(病毒灵)、聚肌胞、干扰素、黄芪多糖、双黄连、阿昔洛韦、胸腺肽、三黄植物血凝素这9种药物是临床上常用的抗病毒药物,它们对新城疫病毒的作用效果不一,试验测定了9种药物对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,并进一步对药物阻止病毒侵入CEF、抑制病毒在CEF内复制进行了测定,同时还筛选出有效的抗新城疫病毒的药物,为临床使用抗病毒药物提供了科学的理论依据.     

九种药物对新城疫病毒的体外敏感性试验

利巴韦林、盐酸吗啉双胍(病毒灵)、聚肌胞、干扰素、黄芪多糖、双黄连、阿昔洛韦、胸腺肽、三黄植物血凝素这9种药物是临床上常用的抗病毒药物,它们对新城疫病毒的作用效果不一,试验测定了9种药物对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,并进一步对药物阻止病毒侵入CEF、抑制病毒在CEF内复制进行了测定,同时还筛选出有效的抗新城疫病毒的药物,为临床使用抗病毒药物提供了科学的理论依据.     

HPLC-PDA法测定柴胡注射液中非法添加利巴韦林的研究

本试验建立了柴胡注射液中非法添加抗病毒药利巴韦林的高效液相色谱－二极管阵列检测器(HPLC-PDA)检测方法。色谱条件：采用Waters Atlantis T3 5μm,4.6×250mm的色谱柱;以水(用稀硫酸调节pH值至2.5±0.1)为流动相;柱温：30℃;进样量：10μl。采用二极管阵列检测器,采集波长范围为190nm~400nm,分辨率为1.2nm。结果显示,利巴韦林的线性范围为0.64μg/ml ~200μg/ml,;线性方程为Y=3305.68X 30933.7,r₂=0.9999, 利巴韦林平均回收率105.2%,RSD为2.7%。结果表明,本方法准确可靠,适用于柴胡注射液中非法添加的利巴韦林违禁药物进行检测。     

抗病毒药物的毒性及残留检测方法研究进展

曾试用于兽医临床后来又被禁用的金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林、阿昔洛韦和吗啉胍等抗病毒药物,常被一些不发分子用于预防和治疗动物疾病。长期大量使用这些药物会引起动物中毒、免疫抑制、耐药性和药物残留等问题,甚至给动物疫病防控带来巨大困难。2012年的“速成鸡”事件就检出鸡肉中残留有金刚烷胺,给我国家禽业带来了负面影响。文章就常见抗病毒药物的理化性质、代谢、毒性以及残留检测方法等四个方面的研究进展进行了综述。     

HPLC-UV法测定中兽药散剂中非法添加吗啉胍的方法研究

建立扶正解毒散、荆防解毒散、黄连解毒散、麻黄鱼腥草散、清瘟败毒散等中兽药散剂中违规添加吗啉胍的检测方法。样品经超纯水溶解、超声10 min,静置、过滤,取滤液进行高效液相色谱定量分析。结果发现吗啉胍在1.0~50.0μg/mL浓度范围内线性关系良好(R2=1.000);添加回收率为75.2%~115.3%,检测限为10 mg/kg,定量限为20 mg/kg。该方法操作简便,阴性样品无干扰,可用于上述5种中兽药散剂中非法添加吗啉胍的定量测定。     

体外抗鸭坦布苏病毒的药物筛选

为了探讨抗病毒药物对鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu, virus, DTMUV）的作用,作者对5种常见的抗病毒药金刚乙胺、脱氧若卡素钠、病毒灵、利巴韦林、阿昔洛韦进行抗鸭坦布苏病毒体外筛选试验。结果表明利巴韦林药物浓度为0.156~0.625 mg/mL时在DF-1细胞中能抑制鸭坦布苏病毒的增殖,利巴韦林在体外对鸭坦布苏病毒具有抗病毒作用。     

饲料和鸡肉中利巴韦林的测定--超高效液相色谱-串联质谱法

本研究建立了饲料和鸡肉中利巴韦林的UPLC-MS/MS分析方法。样品经三氯乙酸-乙腈溶液提取,离心后提取液经PBA固相萃取小柱净化,0.1 mol/L甲酸水溶液溶解,进行UPLC-MS/MS分析。结果显示,利巴韦林在10.0～500.0 g/L浓度范围内线性关系良好,r2=0.9991。以浓缩饲料、配合饲料、预混料和鸡肉等为添加基质,其回收率在90.0%～114.5%,检出限为25.0 g/kg,定量限为50.0 g/kg。表明本方法灵敏度高、专属性好、操作简单、结果可靠,可满足饲料和鸡肉中利巴韦林的分析检测。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡组织中氯苯胍残留

研究建立了鸡组织中氯苯胍残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。样品经酸化乙腈提取后,分别经中性氧化铝柱和HLB固相萃取柱净化,C₁₈柱分离,超高效液相色谱-串联质谱测定,外标法定量。氯苯胍在10 ng/mL～500 ng/mL的浓度范围内呈线性相关,相关系数为0.994以上。本方法对氯苯胍在鸡组织中的检测限为5μg/kg,定量限为10μg/kg;鸡肉、鸡肝和鸡肾在添加50μg/kg～200μg/kg浓度范围内,其回收率为76.7%～107.6%,鸡脂肪和鸡皮在添加100μg/kg～400μg/kg浓度范围内, 其回收率为81.2%～106.8%, 批内变异系数均在1.4%～19.5%之间,批间变异系数在2.5%～12.8%之间。本方法快速、灵敏、重现性好,各项技术指标均满足国内外相关法规要求,适用于鸡组织中氯苯胍的残留检测。     

QuEChERS净化法结合亲水作用色谱串联质谱测定鸡蛋中利巴韦林残留

建立了鸡蛋中违禁药物利巴韦林的QuEChERS净化法结合亲水作用色谱串联质谱测定方法。鸡蛋样品经三氯乙酸乙腈溶液提取,QuEChERS净化管净化,亲水作用色谱-串联质谱法测定,采用内标法定量。测定结果显示:利巴韦林在5.0μg/kg²50μg/kg范围内呈良好的线性关系,低中高浓度的精密度均低于20%,回收率在80%250μg/kg范围内呈良好的线性关系,低中高浓度的精密度均低于20%,回收率在80%¹20%之间。结果证实本方法适合于鸡蛋样品中利巴韦林的测定。     

利巴韦林对猪的毒性观察

猪对利巴韦林特别敏感,尤其是口服,对猪的毒性很大[1].虽然,关于猪利巴韦林中毒的病例时有报道[1-3],但对猪利巴韦林中毒的病理变化及发病机制尚缺乏系统的研究报道.本试验拟通过对生长猪饲喂高剂量(0.1～0.2 g/kg体重)的利巴韦林,使实验猪发生急性利巴韦林中毒,建立猪利巴韦林急性中毒实验动物模型,观察试验猪的发病情况、临床症状,检测组织脏器的病理性损伤及血液指标的变化,探讨利巴韦林中毒的病理变化及发病机制,以便为猪利巴韦林中毒的诊断和防治提供理论依据.     

首批兽药地方标准废止目录

序号类别名称/组方1禁用兽药β-兴奋剂类:沙丁胺醇及其盐、酯及制剂硝基呋喃类:呋喃西林、呋喃妥因及其盐、酯及制剂硝基咪唑类:替硝唑及其盐、酯及制剂喹噁啉类:卡巴氧及其盐、酯及制剂抗生素类:万古霉素及其盐、酯及制剂2抗病毒药物金刚烷胺、金刚乙胺、阿昔洛韦、吗啉(双)胍(病毒灵)、利巴韦林等及其盐、酯及单、复方制剂3抗生素、合成抗菌药及农药抗生素、合成抗菌药:头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松(头孢三嗪)、头孢噻吩、头孢拉啶、头孢唑啉、头孢噻啶、罗红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、磷霉素、硫酸奈替米星(netilmicin)、氟罗沙星、司…     

检测利巴韦林残留的化学发光酶免疫法建立

为了建立检测利巴韦林残留的化学发光酶免疫方法,对酶标抗原与磁标抗体的最佳稀释倍数进行优化,建立标准曲线,同时对方法的检测限、准确度和精密度进行评价。结果显示:50%抑制浓度(IC_(50))为2.263μg/L,线性范围是0.409～12.527μg/L;在动物组织、兽药、饲料中的检测限为2.0μg/kg,样本添加回收率为83.6%～94.7%,批内、批间相对标准偏差均10%;对实际样本进行检测,与液相色谱-质谱/质谱法的结果无显著性差异(P0.05)。该方法灵敏度高、操作简便,可广泛用于动物组织、兽药、饲料中利巴韦林残留量的测定。