抗稻瘟病的生防细菌筛选与鉴定

为获取优良的水稻抗稻瘟病的生防菌株,以稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)为指示菌,针对2016年和2017年采自辽宁省7个水稻主产区的46份水稻田土样,采用土壤稀释平板法从土样中分离纯化得到541株菌株,其中真菌137株,细菌288株,放线菌116株;再经菌株发酵液处理水稻种子,清水和氨基寡糖素处理为空白对照,待水稻长至3叶1心期时采用活体苗期接种的方法对已分离出的菌株进行筛选,得到对稻瘟病有较好诱导抗性的生防菌株5株,标记为DdN5-6、DdN6-1、PJN13-7、PJN13-5和YKN8-7,防治效果为76.13%～58.03%,其中DdN6-1防治效果最好,达到76.13%。本试验研究菌株发酵液浸种对水稻生长的促进作用,室内种子萌发试验结果表明,经菌株DdN6-1和PJN13-5发酵液浸种处理后的水稻种子发芽率分别达到88.89%和90.00%,明显高于对照;在相同的生长时间和生长条件下,经菌株PJN13-5发酵液处理的水稻根长最长,达到9.57 cm,高于其他菌株处理;经5株菌株发酵液处理的水稻种子,长至3叶1心期时与对照相比根系较粗壮,其中DdN6-1发酵液处理的水稻幼苗抗病效果最好,菌株PJN13-5发酵液处理的水稻幼苗促生效果最好。结合形态特征、生理生化特性和16S rDNA基因序列测定对筛选出的菌株进行鉴定,鉴定结果表明:菌株DdN5-6、PJN13-7和YKN8-7为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium);菌株DdN6-1为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus);菌株PJN13-5为纺锤形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fuormis)。     

西藏色季拉山土壤拮抗放线菌的筛选

利用稀释平板倾注法从西藏色季拉山22份土壤样品中共分离到各种放线菌菌株120株。以水稻稻瘟病菌、立枯丝核菌、棉花枯萎菌、烟草赤星病菌为指示菌,采用对峙培养法共获得对植物病原真菌抑菌圈直径>15 mm的菌株7株。将这7株放线菌菌株进行液体发酵试验,并采用生长速率法测定各个菌株发酵液的抑菌活性。结果表明,菌株2152无论是活体还是其发酵液对4种供试病原菌均表现强烈的抑菌效果,发酵滤液稀释10倍后对水稻稻瘟病菌的抑制率达78.6%。     

拮抗真菌菌株BOS-013对稻瘟病菌的抑制作用

[目的]为寻找对水稻稻瘟病的有防治作用的有益微生物及其代谢产物,研究放线菌BOS-013菌株发酵液对水稻稻瘟病菌的抑制作用。[方法]以水稻稻瘟病菌作为目标指示菌,采用杯碟法和滤纸片法测定BOS-013菌株发酵液及其不同溶剂提取物的抑菌活性。[结果]研究结果表明,含菌量为4×108 cfu/ml的BOS-013菌株发酵液对水稻稻瘟病菌的抑制率为92.0%±0.5%;该发酵液经高温、高压灭活后对水稻稻瘟病菌仍有抑制作用,抑制率为60.0%±0.5%。发酵液经非极性CAD-45型大孔吸附树脂吸附、60%乙醇溶液洗脱后,其抑菌活性很高,抑菌圈直径达33.0 mm。[结论]BOS-013菌株发酵液水稻稻瘟病菌有显著的抑制作用;该研究结果为进一步明确BOS-013菌株发酵液对水稻稻瘟病菌的抑制作用机理及其实际应用奠定了基础。     

放线菌ECO 00008发酵液提取物抗稻瘟病的活性筛选研究

从云南土壤中筛选分离到一株抗水稻稻瘟病菌的放线菌ECO 00008,对该菌株进行摇瓶发酵后采用乙酸乙酯萃取发酵液,测定其提取物(FR、FE、MR、ME)对水稻稻瘟病的抗菌活性.结果表明,萃取物FE和ME对水稻稻瘟病菌孢子萌发和菌丝生长具有较强的抑制活性,对孢子萌发抑制率分别为99.00 %和95.60 %,盆栽保护效果分别为97.61 %和75.07 %.     

大豆疫霉病病菌生防放线菌的筛选、鉴定及生防效果

为了开发对大豆疫霉病病菌具有拮抗作用的放线菌资源,从健康大豆根际土壤中分离筛选获得2株对大豆疫病具有显著抑制效果的生防放线菌菌株JAX-13和JAX-14.经生理生化和分子生物学鉴定,菌株JAX-13和JAX-14分别为放线菌属细菌(Actinomycetales bacterium)和链霉菌(Streptomyces).平板拮抗试验结果表明,2种菌株对大豆疫霉病病菌的抑制率分别为56.26％和50.06％;光学显微镜观察发现,菌株JAX-13和JAX-14发酵液处理的大豆疫霉病病菌菌丝排列杂乱无章,菌丝生长受到抑制并且菌丝内部出现原生质聚集成块现象.盆栽试验结果表明,经菌株JAX-13和JAX-14发酵液处理的大豆对大豆疫霉病病菌的防效分别达56.56％和72.22％,且菌株发酵液对大豆植株具有一定的促生作用.总体来看,菌株JAX-13和JAX-14生防效果优良,是2种具有潜在应用价值的放线菌.     

稻瘟病拮抗放线菌CZ133的筛选、鉴定及抑菌活性分析

采用平板对峙法,从湖南水稻根际土壤样品中筛选对水稻稻瘟病具有抑菌活性的拮抗放线菌,通过菌落和菌株形态、16S rDNA和gyrB基因序列对拮抗放线菌进行鉴定,并分析了其发酵滤液对稻瘟病病原菌菌丝生长和孢子萌发的影响。结果显示:分离纯化得到了1株对稻瘟病具有显著抑菌活性的拮抗放线菌CZ133,其对稻瘟病病原菌的平均抑制率为59.47%,经鉴定属于链霉菌属;该菌株发酵滤液能显著抑制稻瘟病病原菌菌丝的生长,最高抑制率达100%,2.5%的发酵滤液能明显导致稻瘟病病原菌菌丝膨大或异常扭曲、甚至自溶,5%～50%的发酵滤液能明显抑制孢子的萌发,最高孢子萌发抑制率达74.27%。     

几丁质酶产生菌的抗真菌活性及对水稻的保护作用

H3菌株是从自然界中通过选择性培养基筛选得到的一株对稻瘟病有高抗性的几丁质酶产生菌.测定了该菌株对几种病原真菌的抑制效果以及对水稻生长发育的影响,结果表明:H3菌株对几种病原真菌有明显抑制作用,对稻瘟病、水稻纹枯病、棉花枯萎病、小麦赤霉病、黄瓜枯萎病的抑菌率分别为72.17%、44.58%、62.63%、50.00%、55.77%;H3菌株发酵液具有促进水稻生长和干物质积累的功能,发酵液处理水稻后其出苗率和成苗质量有较大提高.     

13株植物病原菌拮抗细菌的筛选

为获得具有高效、广谱拮抗作用的生防细菌。从实验室及葡萄、黄瓜、西红柿的根和根际土壤中培养得到282株细菌,以13种常见植物病原真菌为靶标菌,通过平板对峙法和琼脂扩散法测定了分离细菌的发酵液和发酵滤液对靶标菌的抑制效果。结果表明:共有9株分离细菌具有较好的抑制作用,其中4株拮抗细菌的发酵液对所有13株靶标病原菌均有很好的抑制作用,表现出较为广谱的抑菌作用。其中k8j菌株的抑菌效果与其它拮抗菌株达到了显著性水平,其对玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)的抑制率最高,达到了92.02%。9株拮抗细菌的发酵滤液对不同的靶标病原菌也表现出一定的抑制作用,其中HMGR-2菌株对玉米大斑病菌的抑制效果最好,抑菌圈直径达到了4.15cm;菌株k8j的发酵滤液对11株病原菌均具有很好的抑菌效果(除水稻稻瘟病菌和番茄灰霉病菌外),并与其它拮抗菌株比较达到了显著性水平,说明该菌株的代谢产物也具有较为广谱的抑菌效果。     

烟草黑胫病菌拮抗放线菌LY18的分离筛选与鉴定

为了寻找对烟草黑胫病具有生防潜力的放线菌,笔者采用平板对峙法,从烟草黑胫病发病烟田健株根际土壤中,分离得到1株对烟草黑胫病菌具有显著拮抗效果的放线菌株LY18,其发酵液的无菌滤液对烟草黑胫病菌菌丝的抑制率达70%以上。电镜观察发现,抑菌圈周围的烟草黑胫病菌丝破裂、瘪陷。通过对LY18的形态观察、培养性状观察、生理生化测定结合16S rDNA序列分析,将该菌株为鉴定Streptomyces rajshahiensis。     

特殊生境中植物枯、黄萎病拮抗放线菌的筛选及鉴定

【目的】从特殊生境中分离筛选对植物枯、黄萎病具有较高生防活性的土壤放线菌,为深入开展枯、黄萎病的生物防治提供高效菌株。【方法】用平板稀释法,从采自广西、江苏、陕西等地特殊生境的5份土壤样品中分离放线菌;以西瓜枯萎菌、茄子黄萎菌、棉花枯萎菌作为靶标菌,通过平板对峙法进行初筛和复筛;采用菌丝生长速率法、水琼脂平板法,测定入选菌株发酵液的活性,并对其中拮抗活性高的菌株进行形态特征、培养特征及生理生化特性的分析鉴定,初步确定其分类地位。【结果】从5份采自特殊生境的土壤样品中共分离出53株放线菌,并从中筛选出JSC14、GXW1、GXC1、JSW5、JSW7等5株对所有靶标菌都有明显拮抗效果的菌株,其中JSC14菌株发酵液抑菌作用最强。对5株菌发酵液抑菌活性的测定结果表明,JSC14和GXW1菌株发酵液对供试病原菌菌丝生长和孢子萌发均有强烈的抑制作用,菌丝生长抑制率为62.98%～95.38%,孢子萌发抑制率为69.52%～100.0%。经初步鉴定,菌株JSC14为链霉菌属白孢类群白色亚群白色链霉菌(Streptomyces albus),菌株GXW1为拟诺卡氏菌属链孢拟诺卡氏菌(Nocardiopsis streptosporus)。【结论】获得2株对植物枯、黄萎菌有较高生防活性的土壤放线菌,为进一步探讨利用特殊生境中的放线菌控制土传病害提供了研究材料。     

烟草黑胫病菌拮抗放线菌LY18的分离筛选与鉴定

为了寻找对烟草黑胫病具有生防潜力的放线菌,笔者采用平板对峙法,从烟草黑胫病发病烟田健株根际土壤中,分离得到1株对烟草黑胫病菌具有显著拮抗效果的放线菌株LY18,其发酵液的无菌滤液对烟草黑胫病菌菌丝的抑制率达70%以上。电镜观察发现,抑菌圈周围的烟草黑胫病菌丝破裂、瘪陷。通过对LY18的形态观察、培养性状观察、生理生化测定结合16S rDNA序列分析,将该菌株鉴定为Streptomyces rajshahiensis。     

抗稻瘟病生防细菌的分离与筛选

由病原真菌Magnaporthe oryzae引起的稻瘟病是水稻生产上的一种毁灭性病害.从稻瘟病发病严重的田块分别采集健康株和病株,从14个不同生境(土壤、根茎叶围、根茎叶内)中共分离得到304株潜在生防细菌.通过对各细菌胞外产酶活性(葡聚糖酶、纤维素酶、蛋白酶)及产吲哚乙酸活性进行测定,并根据不同指标对细菌进行赋值,最终选择评分≥3分的114株细菌进行稻瘟病菌的平板拮抗试验,从中筛选得到15株对稻瘟病病菌有明显拮抗作用的生防细菌.最终根据赋值评分结果及平板拮抗试验在实验室条件下对筛选出的17株具有防治稻瘟病潜在能力的生防细菌进行16S rDNA鉴定,鉴定结果表明,有15株为芽孢杆菌,1株为糖霉菌,另1株为水库杆菌.本研究以此建立一个针对稻瘟病生防细菌筛选的系统,得到的生防细菌可以为田间防治稻瘟病并最终应用于实际生产提供理论基础.     

长白山地区不同海拔环境拮抗放线菌的筛选

利用稀释平板倾注法从吉林长白山地区不同海拔高度的不同环境中共分离到各种放线菌菌株104株.以24种农业常见植物致病真菌作为目标供试菌,采用抑制菌丝生长速率法对104株放线菌进行抗菌活性筛选,优选抗菌活性较佳的12株.将最佳放线菌No.6菌株进行液体发酵,并测定其发酵液滤液的抑菌活性.结果表明,No.6放线菌菌株对香蕉灰纹菌、辣椒疫霉菌、黄瓜炭疽菌、番茄灰霉菌、黄瓜黑星菌、番茄叶霉菌、番茄炭疽菌、棉花黄萎菌、黄瓜枯萎菌、小麦赤霉菌、稻曲病菌、水稻恶苗病菌、小麦纹枯病菌、水稻稻瘟病菌、水稻纹枯菌、油菜菌核菌均具有优异的防治效果,发酵滤液稀释10倍后对黄瓜黑星菌、番茄炭疽菌、稻曲病菌、水稻稻瘟病菌、水稻纹枯菌的抑制率分别达90.0%、93.3%、92.0%、93.3%、92.0%.     

寒地水稻病害生防菌株L1的鉴定及抑菌机理研究

本研究从寒地水稻根际筛选并鉴定了1株生防细菌,初步命名为芽孢杆菌L1,芽孢杆菌L1发酵培养5 d时发酵液中具有抑菌活性的次生代谢产物对水稻稻瘟病菌及纹枯病菌菌丝生长抑制率都达到最高,分别达74.57%和83.23%,随时间延长抑菌效果不再增加;芽孢杆菌L1的发酵液用硫酸铵梯度沉淀法提取粗蛋白,7个梯度下的粗蛋白对两种菌菌丝均具有抑菌作用,但对稻瘟病菌起主要抑菌作用的蛋白在硫酸铵饱和度50%～60%下沉淀,而对水稻纹枯病菌则在60%～70%,说明芽孢杆菌L1分泌对水稻稻瘟病菌和纹枯病菌起主要抑菌活性的蛋白可能不是同一类。     

桉树根际土壤抑草放线菌的筛选与鉴定

为筛选具有抑草作用的放线菌,通过稀释涂布平板法从桉树根际土壤分离了14株放线菌。其中,A10菌株发酵液稀释50倍后对莴苣根长和株高的抑制率分别为53.93%和29.71%;A10发酵液稀释100倍后对水稻、黄瓜、白菜、黑麦草根长的抑制率分别为10.13%、17.66%、31.70%、18.45%。形态学和16S r DNA鉴定结果表明A10菌株是链霉菌(Streptomyces)。A10菌株最优培养条件为:以葡萄糖或蔗糖为碳源,以酵母浸膏为氮源,培养温度30℃,p H值为6.0。最优条件下,A10菌株发酵液对苜蓿根长抑制率比优化前提高13.55%。A10菌株具有开发为微生物除草剂的可能性。     

放线菌C-2发酵产物对草莓和黄瓜白粉病的生防效果

利用对小麦白粉病具有较高防效的生防放线菌菌株C-2的发酵液对草莓白粉病和黄瓜白粉病进行生物防治.试验结果表明,C-2菌株发酵液对草莓白粉病的防治效果为70.04%和65.34%,对黄瓜白粉病的防治效果为72.14%和 66.57%,都具有较好的防效.     

稻瘟病菌拮抗微生物的筛选

采用稀释平板法从水稻根、叶、穗部分离到大量微生物,用平板对峙培养法测定其中601个菌株对稻瘟病菌的拮抗活性,其中196个菌株具有拮抗活性,占测定总菌株数的32.6%,获得2个生长快且具有显著拮抗作用的菌株B38和B4.进一步的生物测定表明:这2株菌株对作物病原菌有较广的抗菌谱;转管繁殖10代后抑菌作用未退化;发酵液在100 ℃,30 min条件下处理,抑菌作用未丧失;在室温(25 ℃)下浸种24 h对水稻种子的萌发无不良影响.菌株B38和B4显示出很好的生防应用潜力.     

烟草黑胫病菌拮抗放线菌的筛选

采用稀释平板涂布法对29份根际土样进行分离,共获得239株放线菌,采用平板对峙培养法筛选得到48株对烟草黑胫病菌有拮抗作用的菌株,占筛选菌株的20.1％,根据形态和培养特征,48株拮抗放线菌被鉴定为链霉菌属(Streptomyces)和诺卡氏菌属(Nocardia),以链霉菌属为主,占拮抗菌的97.92％.对拮抗作用较好的4株放线菌进行了发酵液拮抗活性的测定,结果表明,4株放线菌平均抑制率为59.80％,其中菌株A27-12最高,为70.59％,菌株A30-19抑制率最低为50.00％,两者呈显著差异.4株菌株的温室盆栽防效测定结果表明,菌株A30-19效果最好,其平均防效为78.79％,与58％甲霜灵锰锌800倍液的防效无显著差异,另3个菌株A36-15、A27-12和A20-8对烟草黑胫病的平均防效分别为67.95％、57.41％和50.46％.     

一株拮抗稻瘟病菌的放线菌筛选及初步鉴定

从采自全国各地的48份土样中分离得到放线菌403株。以水稻稻瘟病菌为指示菌,利用平皿对峙法筛选到30株具有较好拮抗作用的菌株,其中菌株WM2-4的拮抗作用最强,抑菌带宽度为22.2mm。结合抑制菌丝生长速率法进行复筛,结果表明菌株WM2-4对稻瘟病菌的抑制效果最好,抑制率为89.35%。根据形态特征、培养特征、生理生化特征及16S rDNA序列比对分析,初步鉴定菌株WM2-4为鲜黄链霉菌(Streptomyces galbus)。     

生防放线菌发酵液诱导黄芩对其防御酶系的影响

在高氏1号培养基中加入质量浓度为50μg/mL的化学抑制剂K2Cr2O7,用抑菌圈法从陕西省商州区土壤样品中筛选出8株放线菌,其中MⅠ2菌株对黄芩根腐病菌的抑制率最大(31.27%),可见MⅠ2菌株的生防效果最强。用放线菌MⅠ2发酵液诱导处理黄芩幼苗,测定在不同生长期黄芩叶片中防御酶系活性的变化。结果表明:MⅠ2菌株发酵液处理黄芩与CK相比,均能引起黄芩体内防御酶发生明显变化,过氧化氢酶(CAT)的活性受到抑制,过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均有所提高。CAT和POD活性以发酵液原液的作用效果最为显著,而PAL活性以发酵液稀释20倍的作用效果最为明显。放线菌MⅠ2菌株发酵液诱导黄芩使其防御酶系活性发生变化而提高植株的抗病性。