含有金银花的两种中药制剂微生物限度检查方法的建立

建立含有金银花的2种中药制剂的微生物限度检查方法。按照《中国药典》2020年版(四部)通则非无菌产品微生物限度检查微生物计数法与控制检查法、标准的规定,分别采用常规平皿法、培养基稀释法及薄膜过滤法对含金银花的鼻炎糖浆和退热口服液2种中药制剂的微生物限度与控制菌进行检查及方法学验证研究。结果显示,鼻炎糖浆、退热口服液均有抑菌作用。采用常规平皿法和培养基稀释法测定需氧菌总数,回收率低,不符合回收率要求;采用薄膜过滤法加菌回收率显著高于常规平皿法与培养基稀释法,符合回收率要求。采用常规法进行霉菌和酵母菌总数及大肠埃希菌检查,均符合回收率要求。结果提示,所建立的方法符合《中国药典》2020年版四部通则的相关规定,可用于这2种中药制剂的微生物限度检查。     

中药常山口服液微生物限度检查方法的验证

本研究旨在验证抗球虫中药常山口服液的微生物限度检查法,为其质量控制、研发新兽药奠定基础。试验通过直接接种法考察常山口服液的抑菌活性,并采用验证过的试验条件和方法（常规法）进行细菌计数、回收率测定及控制菌的检查,建立常山口服液微生物限度检查方法,并进行验证试验。结果证实常山口服液无抑菌作用或抑菌作用极其微弱,可采用常规法建立检查方法。常山口服液对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉的加菌回收率均大于70%,且供试品和所用稀释剂对此结果无干扰。按常规方法对大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌进行控制菌验证检查发现,试验组、阳性对照组均检出相应的试验菌,阴性对照组和供试液组均未检出相应的试验菌。综上所述,常规法可用于常山口服液细菌、霉菌和酵母菌的计数检验,控制菌检查及微生物限度检查,试验过程符合微生物限度检查法规定,且方法简便,可操作性强,结果准确可靠。     

薄膜过滤法在中药常山散微生物限度检查中的应用研究

为了探讨和建立抗球虫中药常山散的微生物限度检查方法,以大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉为挑战菌株,采用中国兽药典(2010版)收载的薄膜过滤法考察验证常山散的抑菌活性,并采用验证过的试验条件和方法进行细菌计数、回收率测定及控制菌的检查,对常山散微生物限度检查方法学进行建立和验证试验。结果验证试验证实,采用薄膜过滤法可消除供试品常山散的抑菌活性,可用于建立检查方法;常山散对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉的加菌回收率均大于70%。控制菌按薄膜过滤法验证检查,试验组、阳性对照组均检出相应的试验菌,阴性对照组和空白对照组均未检出相应的试验菌。表明采用薄膜过滤法处理中药常山散,试验过程复合中国兽药典微生物限度检查法相关规定,可用于常山散细菌、真菌和酵母的计数检验,控制菌检查及微生物限度检查,且操作简单、快速、数据准确可靠。     

益肾清列口服液微生物限度检查方法的建立

目的:建立益肾清列口服液微生物限度检查法并进行方法适用性研究。方法:按照《中华人民共和国药典》2015年版·四部非无菌产品微生物限度制剂1105、1106、1107通则中相关规定,对该制剂进行微生物限度检查方法的适用性研究。需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌计数采用增加培养基体积法(1∶50),控制菌大肠埃希菌采用薄膜过滤法,200 mL稀释液冲洗2次,可检出阳性指示菌,采用上述方法对益肾清列口服液各试验菌进行回收试验测试及对控制菌检查方法进行方法适用性研究。结果:需氧菌总数、霉菌和酵母菌适用性研究试验中各菌的回收比值均符合《中华人民共和国药典》2015年版规定,控制菌检查方法可行。结论:该方法适用于益肾清列口服液的微生物限度检查,标准可行。     

两种中药制剂微生物限度检查方法验证

建立滋阴清热降糖丸、金水咳喘康胶囊的微生物限度检查方法,并对其进行验证。取滋阴清热降糖丸、金水咳喘康胶囊各10 g,用TSB制成1∶10的供试液,混匀,采用平皿法进行检查,需氧菌采用1∶50、1∶100、1∶1 000 3个稀释度,霉菌、酵母菌采用1∶10、1∶100 2个稀释度,加入金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉,测定回收率。控制菌按照《中华人民共和国药典》2020年版四部中规定检查大肠埃希菌、沙门菌、耐胆盐革兰阴性菌。按上述方法进行验证,测定菌种回收率均为0.5～2.0,方法适用性试验结果满足要求。说明平皿法经验证有效,可用于这两种中药制剂的微生物限度检查,能有效控制药品质量,结果准确可靠。     

双葛止泻口服液微生物限度检查方法学验证

建立了双葛止泻口服液的微生物限度检查方法.根据2015年版《中华人民共和国兽药典(二部)》通则1102非无菌产品微生物限度检查:微生物计数法,以及通则1103非无菌产品微生物限度检查:控制菌检查法和通则1104非无菌兽药微生物限度标准进行方法适用性试验.结果 表明,采用薄膜过滤法对样品进行需氧菌总数、霉菌和酵母菌计数方...     

替代猪病治疗抗生素的8种候选中药提取物体外抑菌实验初探

试验以KB纸片扩散法筛选对猪源大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用但同时对益生菌—枯草芽孢杆菌抑制作用小的中药提取物。结果表明,8种中药提取物对2种致病菌均有不同程度的抑制作用,但土茯苓皂甙对枯草芽胞杆菌没有抑制作用,值得进一步研究。     

枯草芽孢杆菌BS1对动物致病菌拮抗方法的研究

为了探讨枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS1对2种常见动物致病菌的体外拮抗实验的有效性。研究将枯草芽孢杆菌BS1与大肠埃希氏杆菌K88、和金黄色葡萄球菌A333分别以牛津杯法和共培养法进行拮抗实验。结果发现,虽然枯草芽孢杆菌BS1对大肠埃希氏杆菌K88在平板上不显示抑菌圈,但共培养48h后,致病菌菌数显著低于对照。结果说明,枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS1对2种常见动物致病菌大肠埃希氏杆菌K88、和金黄色葡萄球菌A333均有显著抑制作用。     

氯氮平片微生物限度检查方法验证

利用常规法和培养基稀释法对氯氮平片微生物限度检查方法进行验证。结果表明,采用培养基稀释法时各试验菌回收率均大于70%;控制菌检测时,试验组检出控制菌大肠埃希菌,阴性菌对照组未检出阴性对照菌金黄色葡萄球菌。该试验表明氯氮平片具有微弱的抑菌作用,可采用培养基稀释法进行微生物限度检查。     

辛伐他汀片微生物限度检查方法学验证

利用常规法和培养基稀释法对辛伐他汀片微生物限度检查方法进行验证。结果表明,采用培养基稀释法时各试验菌回收率均大于70%;控制菌检测时,采用培养基稀释法,试验组检出控制菌大肠埃希菌,阴性菌对照组未检出阴性对照菌金黄色葡萄球菌。该验证试验表明辛伐他汀片具有微弱的抑菌作用,可采用培养基稀释法进行微生物限度检查。     

中药饮片金银花微生物污染状况考察

对河北、安徽及四川3省10家不同企业、不同环节的20批中药饮片金银花进行检测，全面考察微生物污染程度。按照《中华人民共和国药典》2020年版(四部)通则1108中药饮片微生物限度检查法，对20批中药饮片金银花采用常规平皿法(倾注法)进行需氧菌总数(TAMC)、酵母和霉菌总数(TYMC)、耐热菌总数、耐胆盐革兰阴性菌及沙门菌检测，参照其他国家药典增加金黄色葡萄球菌和洋葱伯克霍尔德菌的检验，统计微生物限度污染情况。结果显示，饮片中TAMC与耐热菌和耐胆盐革兰阴性菌呈正相关系；5批样品检出霉菌，在种植和加工环节尤为突出；15%的饮片耐胆盐革兰阴性菌N>10³;50%的饮片检出大肠埃希菌；沙门菌、金黄色葡萄球菌及洋葱伯克霍尔德菌均未检出。从考察结果看，亟需完善国内中药饮片分类体系，建立适合国内中药饮片的培养体系和标准，从而加强中药饮片种植和加工环节微生物污染的管控。     

泰地罗新原料药微生物限度检查验证

根据《中华人民共和国兽药典》2015年版一部附录1105非无菌产品微生物限度检查的要求,采用薄膜过滤法(每筒冲洗量300mL)进行需氧菌、霉菌和酵母菌总数检测,对泰地罗新原料药各试验菌进行回收试验测试及其检查方法验证。结果表明,胰酪大豆胨液体培养基适用于需氧菌检测,沙氏葡萄糖琼脂培养基适用于霉菌、酵母菌检测;验证试验中需氧菌、霉菌和酵母菌的回收比值均符合《中华人民共和国兽药典》2015年版规定。结论:可以采用薄膜过滤法对泰地罗新原料药进行微生物限度检查。     

两种益生芽孢杆菌体外抑菌活性及其耐药性研究

试验分别采用牛津杯法和微量肉汤稀释法进行益生芽孢杆菌体外抑菌活性及耐药性研究,结果显示,枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌对大肠埃希菌C83901、C83917和沙门菌有中、低度抑制作用;对抗敌素、硫酸黏菌素、喹乙醇有一定耐药性．而吉他霉素和硫酸新霉素对这2种杆菌抑制作用较强,不宜联用。     

双葛止泻口服液抑菌剂用量筛选与抑菌效力研究

通过抑菌效力研究确定了双葛止泻口服液中抑菌剂的合理添加量。根据《中国兽药典》2015年版一部附录“1121抑菌效力检查法”要求,以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉为试验菌株,建立双葛止泻口服液抑菌效力检查方法,对不同苯甲酸钠含量的双葛止泻口服液进行抑菌效力测定,筛选出供试品中抑菌剂合理添加量。结果表明,0.3%的苯甲酸钠对微生物生长繁殖具有良好的抑制作用,且为最低有效剂量。因此,0.3%的苯甲酸钠可作为双葛止泻口服液的抑菌剂用量。     

大肠埃希氏菌和蜡样芽孢杆菌致犊牛腹泻的诊治

为了对某肉牛场发生的犊牛腹泻进行诊断和治疗,采集了发病犊牛的肝脏和脾脏,通过细菌分离鉴定和小鼠致病性试验对其进行诊断。最终分离到1株蜡样芽孢杆菌和1株致病性大肠埃希氏菌,致病性试验发现所分离的蜡样芽孢杆菌和致病性大肠埃希氏菌接种小鼠会使其分别在36 h和24 h全部死亡。同时,结合发病犊牛的临床表现确诊为致病性大肠埃希氏菌混合蜡样芽孢杆菌感染引起的腹泻。药敏试验结果显示致病性大肠埃希氏菌对头孢噻呋钠、硫酸庆大霉素和复方磺胺氯达嗪钠敏感,蜡样芽孢杆菌对庆大霉素、氟苯尼考、万古霉素和恩诺沙星敏感。对发病犊牛进行隔离,参考药敏试验结果配合中药处方等措施,犊牛病情得到有效控制。     

枯草芽孢杆菌和猪源乳酸杆菌混合饲喂对仔猪肠绒毛发育的影响

本研究主要探讨混合饲喂枯草芽孢杆菌RJGP16和猪源乳酸杆菌B1对仔猪肠道肠绒毛发育的影响,以及这两种益生菌在体内拮抗大肠埃希氏菌K88的能力.试验选取8窝新生仔猪为研究对象,分别于0、7、11和26日龄经口腔灌服枯草芽孢杆菌菌液(活菌数1.0×109 CFU· mL-1)、猪源乳酸杆菌菌液(活菌数1.0×109 CFU· mL-1)、枯草芽孢杆菌和猪源乳酸杆菌混合菌液(体积比1∶1),以及对饲喂混合菌液的试验组进行大肠埃希菌K88的攻毒试验.试验结果表明,同时饲喂枯草芽孢杆菌和猪源乳酸杆菌能显著提高十二指肠(P＜0.05)和回肠(P＜0.01)的肠绒毛高度,增加十二指肠(P＜0.05)和空肠(P＜0.0l)绒毛的数量,降低空肠(P＜0.05)和回肠(P＜0.01)的隐窝深度,以及增加十二指肠(P＜0.05)、空肠(P＜0.05)和回肠(P＜0.0l)的绒腺比.此外,同时饲喂这两种益生菌能有效地拮抗大肠埃希菌K88对仔猪肠道上皮的损伤.笔者的研究提示枯草芽孢杆菌和猪源乳酸杆菌对肠道绒毛的发育起到了促进作用,并能有效地提高抗感染能力.     

不同种类中药废弃物和中药复方的体外抑菌试验

为了寻找更为安全高效的动物替抗药物，本试验以3种中药复方和7种中药废弃物为材料，采用K-B纸片法检测抑菌圈直径、二倍稀释法检测最低抑菌浓度(MIC)、平板涂布法检测最低杀菌浓度(MBC),综合评价所选药物对大肠埃希菌、肠炎沙门菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果。试验结果显示：9种药物(除清开灵药渣外)都对金黄色葡萄球菌具有显著的抑菌和杀菌作用，其MIC和MBC值在3.91～125 mg/mL范围内，为金黄色葡萄球菌中度到高度敏感药物；中药复方1和中药复方3对大肠埃希菌的MIC值分别为125 mg/mL和62.5 mg/mL,表现为中度抑大肠埃希菌；忍冬藤和中药复方1对肠炎沙门菌的MIC值都是125 mg/mL,为肠炎沙门菌中度敏感药物。试验结果表明，3种中药复方和6种中药废弃物(除清开灵药渣外)可开发成防治金黄色葡萄球菌感染性疾病的药物，中药复方1和中药复方3可预防和治疗禽畜大肠埃希菌感染，而中药复方1和忍冬藤可防治畜禽因感染肠炎沙门菌引起的病症。     

中药对藏香猪源致病性大肠埃希菌地方流行株体外抑菌效果试验

为了分析20味中药对藏香猪源致病性大肠埃希菌地方流行株SCCD201712体外抑菌效果,试验采用水提法制备了中药药液,浓缩为1 g生药/mL;采用牛津杯法和微量二倍稀释法分别测定20味中药对藏香猪源致病性大肠埃希菌地方流行株体外抑菌圈直径和最小杀菌浓度(MBC),采用微量肉汤棋盘稀释法测定两种敏感中药组合的联用抑菌指数(FICI)。结果显示,藏香猪源致病性大肠埃希菌地方流行株SCCD201712对黄连、诃子、白头翁、五味子、五倍子5种药物高度敏感;其抑菌圈直径在16.3 mm～19.8 mm之间,MBC在15.65～31.25 mg/mL之间;诃子+黄连、诃子+白头翁2种中药组合具有协同作用,诃子+五倍子、五味子+黄连、五味子+白头翁3种中药组合具有相加作用,五味子+五倍子中药组合有拮抗作用。为中药防治藏香猪源致病性大肠埃希菌病提供研究基础。     

ERIC-PCR和PFGE对大肠埃希菌由舍内向舍外传播的鉴定及两种方法的比较

为了深入认识鸡舍环境微生物气溶胶的产生及其向舍外环境的传播,同时比较ERIC-PCR和PFGE对细菌的基因分型结果,本研究以大肠埃希菌为指示菌,采用Andersen-6级空气微生物样品收集器,分别在两个鸡舍的舍内、舍外上风向10 m和50 m和下风向10、50、100、200、400 m的距离处收集空气样品,同时采集鸡的粪便,分离、鉴定大肠埃希菌。采用ERIC-PCR和PFGE两种方法对不同来源的大肠埃希菌分离株进行基因分型,根据每个采样点大肠埃希菌的相似性指数,确认动物舍内微生物气溶胶向舍外环境传播的模式,并比较这两种方法对大肠埃希菌的基因分型结果,分析这两种分子生物学分型方法各自的优缺点和适应性。本试验共采集到28株大肠埃希菌,ERIC-PCR和PFGE两种方法分别进行同源性鉴定显示,从鸡的粪便中分离到的大肠埃希菌与从舍内空气中分离到的部分大肠埃希菌(62.5%)具有相同来源;从鸡场舍外下风方向分离到的多数大肠埃希菌(20%)与舍内空气或粪便中分离的大肠埃希菌来源相同。而从鸡舍上风没有分离到大肠埃希菌,排除了下风向采得的大肠埃希菌来自上风向的可能。而很多从舍内空气和舍外下风方向分离到的大肠埃希菌与粪便中的具有相同来源,说明粪便中的细菌能够形成气溶胶,并且通过舍内外气体交换传播到舍外,依气象条件传播到舍外不同的距离。造成周边环境的生物污染以及病原微生物的扩散。本研究同时对ERIC-PCR和PFGE两种方法所得的分型结果进行了比较。PFGE的分辨率高于ERIC-PCR,而且PFGE的重复性也很高,不同试验室得出的结果可以相互比较,是细菌基因分型的"金标准"。但是PFGE试验费用高,需要时间长,对试剂、仪器和操作都具有很高的要求;ERIC-PCR虽然分辨率不及PFGE,但是ERIC-PCR简单、快速,成本低,对操作和试剂以及仪器要求都不高,所以ERIC-PCR也可以对肠杆菌进行同源性鉴定,应用于流行病学调查和对气源性微生物传播的鉴定。由于ERIC-PCR和PF-GE是根据DNA中不同的遗传特征进行分类的,所以这两种分型技术结合起来分析菌株的遗传进化关系,意义更大。     

盐穗木活性成分的提取及抑菌效果研究

为了解盐穗木的药用性能,试验将盐穗木全草经乙醇提取得到总浸膏,结合药敏试验对其进行效价测定。结果表明:盐穗木总浸膏对大肠埃希杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有一定的抑菌活性,对酵母菌、链球菌、普通变形杆菌无抑菌作用;不同季节盐穗木总浸膏的抑菌活性无差异。进一步提取得到有机酸、生物碱、酚类3种物质进行试验,结果有机酸与酚类抑菌作用不明显,生物碱有一定的抑菌作用。利用不同有机溶剂对生物碱进行分离,结果乙酸乙酯相抑菌活性明显,其他分离相抑菌效果均不明显。乙酸乙酯对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度为7.8 mg/mL,对大肠埃希杆菌的最小抑菌浓度为15.6 mg/mL。总浸膏对大肠埃希杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度为31.2 mg/mL。