辐射花粉授粉诱导甜瓜单倍体

本研究以3种不同基因型的甜瓜为材料进行辐射花粉授粉创制单倍体试验,探究了父母本基因型和辐射剂量效应,辐射花粉授粉后喷施TDZ激素。结果表明:3个不同基因型的甜瓜诱导率分别为0（TG-1）、0.32%（TG-2）、0.15%（TG-3）;实验中筛选出的最优剂量为200Gy,单倍体诱导率为1.2%;辐射花粉授粉后喷施TDZ激素可有效的提高二倍体的产率（CK=0.72%;处理组=2.28%）。     

辐射花粉技术在葫芦科诱导单倍体上的应用

由于传统的花药和花粉小孢子培养难以在葫芦科中获得单倍体，因此采用辐射花粉结合离体挽救诱导雌核发育单倍体是一种值得借鉴的有效方法。鉴于目前国内这方面的报道极少，本文就该技术的方法和影响因素加以概述。     

玉米花粉诱导不同基因型小麦单倍体得胚率的比较及幼胚离体培养方法对成苗率的影响

选用六倍体普通小麦JYP97系列、常规材料小披白粒,9312(Z)、贵农、恒丰1号和四倍体硬粒小麦、雄性不育系HB系列(12号、11号、13号、26号)等不同倍性或不同基因型的小麦与玉米加-1、超-1、加-6、综-1、701,703等杂交,采用1/2MS培养基,剥取胚龄为14 d、大小为0.4~1.0 mm的小麦杂种幼胚,接种于培养基上,放置24~25℃黑暗条件下2~3周,置于温度为(26±1)℃、光照为1800~2 000 lx的条件下进行幼胚离体培养。结果表明:玉米花粉诱导六倍体普通小麦得胚率为5.4%,明显高于四倍体,玉米花粉诱导雄性不育系的得胚率为3.2%,高于常规材料。混合玉米花粉诱导小麦单倍体得胚率4.6%,高于单一玉米花粉。采用未加任何激素的1/2MS培养基,选取14 d胚龄0.4~1.0 mm的幼胚离体培养,成苗率为81%,显著高于前人所采用的其它培养基进行幼胚离体培养的成苗率。     

葫芦科植物单倍体离体诱导研究进展

重点对葫芦科植物离体诱导单倍体的研究进行综述,包括花药培养、离体雌核培养、辐射花粉诱导单倍体培养等在育种中的应用,以及供体基因型、培养基、预处理方式、胚囊发育时期等因素对离体诱导再生频率的影响。关于离体培养发育机制的生理生化研究主要集中在离体雌核发育的形态及细胞学过程以及培养早期生理、生化的变化研究。同时总结了葫芦科植物DH育种研究进展,指出葫芦科植物离体诱导单倍体研究中存在的问题并提出思路和建议。     

西葫芦花粉生活力测定方法及最佳授粉时间的研究

研究了西葫芦新鲜花粉的生活力测定方法、离体培养条件、短期贮藏方法以及不同时间的花粉生活力强度。结果显示:TTC染色法的测定值与离体培养法的测定结果相近且差异不显著,是一种快捷、准确测定西葫芦花粉生活力的染色方法。培养基15%蔗糖+100mg/L硼酸+300mg/LCa(NO3)2.4H2O+200mg/L MgSO4.7H2O+100mg/L KNO3,适宜西葫芦花粉离体萌发,花粉离体萌发率最高,为60.602%,0℃黑暗干燥或4℃黑暗干燥贮藏花粉,生活力保持最好,均在70.000%以上,且散粉情况较好;人工授粉最好在上午10:00之前完成,最佳授粉时间为6:00-8:00,此时种子的结实率最高。     

辐射花粉授粉技术诱导黄瓜单倍体

辐射花粉授粉是获得单倍体的有效途径。本研究旨在探讨该途径中影响单倍体再生率的关键因素。本试验利用60Coγ对不同黄瓜材料进行不同剂量的辐射处理,系统研究了辐射剂量、花粉供体基因型、母本基因型对诱导黄瓜单倍体植株再生率的影响。结果表明:3个花粉供体基因型(5211、CC3、南抗一号)花粉经150 Gy辐射处理后,花粉供体基因型5211诱导的植株再生率、单倍体再生率均高于花粉供体基因型CC3和南抗一号。花粉供体在辐射剂量150 Gy辐射处理下较250 Gy及350 Gy更有利于诱导植株再生,再生率最高可达3.92%,单倍体再生率为1.96%。10个母本基因型中6个母本基因型没有诱导出再生植株,占母本基因型总量的60%;4个母本基因型诱导出再生植株,占母本基因型总量的40%,单倍体诱导率为0.26~0.54。     

辐射花粉授粉诱导黄瓜单倍体

实验采用辐射花粉诱导黄瓜单倍体的方法,研究了辐射剂量(150,300Gy)和基因型在黄瓜单倍体诱导中的影响。结果发现基因型、辐射荆量都对植株再生率有极显著的影响。对相同基因型,不同剂量的植株再生率而言,150Gy总体上效果好于300Cy。对相同剂量,不同基因型的植株再生率而言,经150Gy辐射花粉授粉处理的7307植株再生率最高。0548植株再生率最低。对不同荆量,不同基因型而言,低剂量(150Gy)对4种基因型的植株再生率影响较大。而高剂量(300Gy)对4种基因型的植株再生率的影响处于两个极端。     

西葫芦双单倍体自交一代离体再生研究

以西葫芦DH12-11409双单倍体植株自交后代种子为试材,研究不同激素组合、外植体类型和苗龄对诱导西葫芦不定芽再生以及不定芽生根的影响。结果表明,取5d龄西葫芦双单倍体黄绿色子叶的子叶节为外植体,在MS+30g/L Suc+8g/L Agar+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培养基上诱导不定芽效果最好,诱导率高达90.0%,分化系数为8.5;生根培养基则以MS培养基中添加0.05或0.1mg/L NAA为宜;5~6片真叶再生植株经驯化移栽成活率高达90.0%,为再生植株驯化移栽的最佳时期。     

西葫芦离体雌核发育胚状体成苗影响因子分析

以西葫芦杂交组合20-3-9×17为供体,进行未受精胚珠的离体培养,诱导离体雌核发育。分析表明,培养基的碳源、外源激素配比对胚状体的形态建成及成苗有显著影响,以30 g.L-1蔗糖或20 g.L-1葡萄糖做为胚状体诱导培养基的碳源、添加4.00 mg.L-12,4-D 0.25 mg.L-1NAA 1.00 mg.L-16-BA或4.00 mg.L-12,4-D 0.5 mg.L-1NAA 1.00 mg.L-16-BA,并以20 g.L-1蔗糖或葡萄糖作为成苗培养基的碳源,可使健全胚状体成苗率达95.0%以上。未受精胚珠取样部位与胚状体转接时期也是影响胚状体成苗的重要因子,取自子房中部的胚珠诱导出的健全胚状体比例与成苗率均较高;胚状体形成后1周内转接有利于成苗。     

西葫芦DH群体主要农艺性状分离的初步分析

对一个包括31个株系的西葫芦胚囊植株DH群体进行考察,初步分析其几个主要农艺性状的分离变异情况,并与同来源的F2群体进行比较,以了解其在西葫芦性状遗传分析及优异自交系选育上的应用价值。结果显示,所考察的西葫芦DH群体在第一雌花节位、雌花节率、始花期、始收期、果形指数、果肉厚、果柄长及单果质量等数量性状上的分离变异情况与F2基本一致;在果实颜色、叶片形状、分枝习性等质量性状上的分离经卡方检验,只有叶片形状基本符合1∶1的分离比,其余两个性状的分离均出现了超亲类型;该DH群体中5个株系两个自交世代R1、R2的相关性状表现出较好的遗传稳定性。     

外源添加物对西葫芦胚状体诱导效果研究

以6个基因型的西葫芦未授粉子房为试材,于MS培养基中分别添加不同质量浓度6-BA(1.0,1.5,2.0mg/L)和TDZ(0.04,0.05,0.06mg/L),筛选最适培养基与出胚材料;获得最适培养基后再分别添加不同质量浓度的NAA,AgNO3或相同质量浓度(20mg/L)秋水仙碱不同时间培养,分析其对西葫芦未授粉子房胚状体诱导的效果。结果表明:1西葫芦未授粉子房在培养基(P5)MS+30g/L Suc.+8g/L Agar+0.05mg/L TDZ上胚状体诱导效果最好,XH13-7为出胚率最高材料;2在P5培养基中添加0.25 mg/L NAA有利于出胚并可适当降低玻璃化率,胚状体诱导率高达10.53%;3添加20mg/L AgNO3显著减少胚状体玻璃化,对出胚影响不明显,玻璃化率仅为11.63%;4添加20mg/L秋水仙碱抑制胚状体发生。     

西葫芦胚囊植株生殖特性

考察了经未受精胚珠离体诱导获得的西葫芦再生胚囊植株及其3个自交世代的生殖特性。单倍体胚囊植株高度不育,无法获得自交后代。绝大多数双单倍体（DH）胚囊植株及其3个自交世代的花器特征、开花进程等与二倍体供体一致。DH植株当代的花粉萌发率为15.52%~42.67%,花粉量偏少,自交单果结籽数明显少于二倍体供体。DH植株3个自交世代的花粉萌发率为17.62%~42.70%,均低于二倍体供体,各自交株系的花粉生活力在3个自交世代间保持稳定,但花粉量仍偏少。交叉授粉验证结果显示,DH植株当代及其3个自交世代的雌性生殖能力接近二倍体供体,雄性生殖能力明显低于二倍体供体,但未呈现持续下降趋势。DH植株3个自交世代的种子发芽率均在92%以上,自交种子具可稔性。     

西葫芦未受精胚珠离体培养条件的优化及胚囊植株的产生

 【目的】建立西葫芦离体雌核发育高频植株再生体系，以加速自交系选育，有效缩短西葫芦杂种一代育种周期。【方法】将西葫芦未受精胚珠接种至附加2，4-D、NAA、BA的N6培养基上可形成胚状体，该胚状体转接至无激素的N6培养基上可形成再生植株。【结果】试验共获得120棵再生植株（R0），其中41株因生活力低下死亡，8株用于摸索移栽方法死亡，71株移栽成活且生长正常，其中42株性状表现符合二倍体特征且育性正常，已有10株获得自交果实及种子，其余29株育性异常。试验结果表明，胚珠发育时期、培养基、供体基因型及供体栽培季节等均显著影响胚状体诱导频率。【结论】胚状体起源于胚囊成员细胞，再生植株为胚囊植株。试验筛选出3种诱导频率较高的培养基；以开花前1日及当日的胚珠诱导频率较高；秋播材料诱导效果最好。     

西葫芦未受精子房离体培养的影响因素

【目的】探究西葫芦未受精子房离体培养的主要影响因素,以提高其胚状体诱导率和生根品质,增加再生植株数量,丰富西葫芦育种材料。【方法】以西葫芦"春玉一号"未受精子房为材料,分析MS、B5、N6和White 4种基本培养基的诱胚效果;在MS培养基中添加不同质量浓度的6-BA(0,0.5,1.0,2.0mg/L)和NAA(0,0.2,0.5,1.0mg/L),筛选2种激素的最佳组合;之后添加不同质量浓度的2,4-D(0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mg/L),筛选2,4-D的适宜质量浓度;在MS培养基中添加不同质量浓度的NAA(0,0.05,0.1,0.2,0.5,1.0mg/L),分析其对胚状体芽生根效果的影响。【结果】西葫芦未受精子房以MS为基本培养基时胚状体诱导率最高,为16.67%;在MS培养基中添加1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA时的诱导效果最好,诱导率为19.76%;在MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA培养基中添加1.0mg/L 2,4-D可以加快胚珠膨大的速度,增加胚珠转绿的数量,但对出胚的提高效果不显著。MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+0.1mg/L NAA有利于提高胚状体芽的生根品质,且根系生长健壮。【结论】MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+1.0mg/L 2,4-D是西葫芦未受精子房离体培养中胚状体诱导的最佳培养基,MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+0.1mg/L NAA是诱导其胚状体芽生根的较适宜培养基。     

辐射花粉授粉培育单倍体黄瓜研究

【目的】为系统探讨授粉组合、雄花辐射时的发育时期和辐射剂量对黄瓜座果和单倍体胚生产的影响。【方法】选用了32个不同基因型黄瓜作为母本，6个不同基因型黄瓜作为父本，采用1次辐射2次授粉结合胚胎拯救的方法。【结果】从15个基因型的母本中获得了单倍体胚48个，单倍体胚的平均产率为0.77%，最高产率可达50.00%。【结论】试验发现雄花辐射时的发育时期对座果率影响不大，对单倍体胚产率有一定影响；辐射剂量的差异对座果率和单倍体胚产率都有影响，但剂量效应不明显；授粉组合之间单倍体胚产率差异很大。对单倍体的形态、减数分裂染色体行为与育性、部分生理生化指标进行了研究，结果表明单倍体的茎叶表面形态和花器官形态与二倍体存在显著的差别；大部分的单倍体植株雌雄均不育，但单倍体H2的雌雄配子均有一定育性；对减数分裂行为的观察发现单倍体H2的各个分裂时期的染色体行为均异常，但后期I极低频率的（0+7）型分离方式可能产生具有育性的配子；单倍体的叶绿素含量、过氧化物酶活性（POD）及可溶性蛋白含量与二倍体存在较大差异。     

西葫芦离体雌核发育初期POD及其同工酶活性变化研究

以一代杂种碧珠为供体诱导西葫芦离体雌核发育,研究了离体雌核发育初期胚珠中过氧化物酶(POD)及其同工酶活性的变化规律.结果显示,西葫芦离体雌核发育初期即未受精胚珠接种后13 d内,胚珠中POD及其同工酶活性变化明显,其中总的过氧化物酶(POD)、NADH过氧化物酶(NADHPOD)、生长素过氧化物酶(IAAO)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性呈上升趋势;细胞色素过氧化物酶(COX)、抗坏血酸过氧化物酶(ASP)的活性呈先下降后略升高的趋势.