金龟子绿僵菌中苦马豆素的分离与鉴定

探求从金龟子绿僵菌中分离苦马豆素的有效方法,提高苦马豆素产量及降低苦马豆素生产成本。采用超声波处理、过滤、离心、索氏抽提、萃取、离子交换色谱、吸附柱色谱及减压升华等方法,从菌丝体中分离苦马豆素,以薄层色谱、气相色谱及熔点测定法对分离产物进行鉴定分析,气相色谱法测定金龟子绿僵菌干燥菌丝体中苦马豆素的含量。结果分离到白色针状结晶3.15 mg,经薄层色谱、熔点测定及气相色谱鉴定分析,确定分离到的结晶为苦马豆素,提取率为21μg/g。气相色谱法测定金龟子绿僵菌干燥菌丝体中苦马豆素的含量为2.26 mg/g。     

苦马豆素对小鼠细胞免疫功能的影响

【目的】探索苦马豆素(SW)对小鼠免疫器官发育、外周血液中细胞数及淋巴细胞增殖功能的影响,为SW免疫研究提供新的试验依据。【方法】将80只昆白系小鼠随机分为8组,其中5个试验组按0.05,0.2,0.8,3.2和6.4 mg/kg剂量每天灌服不同质量浓度的SW生理盐水溶液,连续21 d;其他3组均为对照组(分别为生理盐水组、环磷酰胺组和空白对照组)。检测小鼠胸腺和脾脏指数,用细胞分析仪检测外周血液中白细胞、红细胞及淋巴细胞数;用MTT法检测脾脏淋巴细胞的增殖活化。【结果】在SW剂量为0.2~0.8 mg/kg,小鼠脏器(胸腺和脾脏)指数及外周血液中的细胞数均增加;SW单独作用或其协同刀豆蛋白A(ConA)和植物血凝素P(PHA-P)刺激时,小鼠脾脏淋巴细胞的增殖活性增强,SW协同脂多糖(LPS)刺激时,小鼠脾脏淋巴细胞增殖活性降低。SW剂量为6.4mg/kg时,小鼠的脏器指数和外周血液中的细胞数均减少;无论小鼠脾脏淋巴细胞受丝裂原刺激与否,小鼠脾脏淋巴细胞的增殖活性均降低。【结论】SW可以通过提高小鼠脏器指数及外周血液中细胞数提高淋巴细胞的增殖活性,增强小鼠的细胞免疫功能;SW剂量为6.4 mg/kg对小鼠细胞免疫功能有抑制作用,提示SW对小鼠细胞免疫功能的影响具有选择性和双向调节作用。     

金龟子绿僵菌发酵代谢产物中苦马豆素的初步研究

金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)经过发酵培养,采用气相色谱法对发酵代谢产物中的苦马豆素(Swainsonine SW)进行了定性和定量分析;同时用正丁醇萃取法对发酵液进行了初步的分离提取及薄层层析法检测。结果表明,金龟子绿僵菌发酵代谢产物中含有苦马豆素,且含量为10.2 131 mg/L;正丁醇萃取法是从发酵液中提取苦马豆素的有效方法。     

抗苦马豆素抗体ELISA检测方法的建立

【目的】建立一种敏感性高、特异性强的抗苦马豆素(Swainsonine,SW)抗体的ELISA检测方法。【方法】用SW人工抗原(SW-BSA)免疫小鼠,制备抗SW血清,通过ELISA法进行血清抗SW抗体效价检测,比较以SW-OVA或SW为包被抗原的检测结果,分析包被抗原浓度、封闭剂等对测定结果的影响,以确定测定的最佳条件。【结果】以SW-OVA为包被抗原的检测结果明显优于以SW为包被抗原;抗苦马豆素抗体的最佳测定条件为:以1.0μg/mL SW-OVA作为包被抗原,于4℃包被过夜或37℃包被2 h,选用15 g/L的明胶作为封闭剂,酶标抗体的工作浓度为1∶1 500。【结论】建立的抗苦马豆素抗体ELISA检测方法,特异性强、稳定性高,为进一步研究苦马豆素人工抗原的免疫原性等奠定了基础。     

苦马豆素-HSA对小鼠免疫原性研究

【目的】研究苦马豆素-HSA(SW-HSA)对小鼠的免疫原性,为构建SW噬菌体单链抗体库奠定基础。【方法】将12只健康Balb/c小鼠随机分为小剂量免疫组(A组)、大剂量免疫组(B组)和对照组(C组)3组,每组4只。免疫组用SW-HSA加入佐剂后进行了4次免疫,首免和第2次免疫间隔30 d,抗原剂量相同,分别为A组0.05mg/只,B组0.10 mg/只;第3,4次免疫分别在第50,70天进行,第3次免疫各组抗原量分别是首免的1.5倍,第4次免疫抗原量分别是首免的2.5倍。第3,4次免疫后第10天采血,用间接血凝试验与间接酶联免疫吸附试验检测血清中的SW抗体效价。【结果】第4次免疫后,间接血凝试验检测显示,A、B两组小鼠血清中的抗体效价分别达26和25;间接酶联免疫吸附试验检测显示,A、B两组小鼠血清中的抗体效价分别达29和28。【结论】用SW-HSA免疫Balb/c小鼠,可获得高抗体效价的免疫小鼠。     

苦马豆素对家兔肝脏抗氧化功能的影响

为了探讨苦马豆素对家兔肝脏抗氧化功能的影响,进一步揭示苦马豆素的毒性作用机理,将24只家兔随机分为4组,即对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组。将小花棘豆全草粉碎后,按Ⅰ组添加15%(含苦马豆素30 mg/kg)、Ⅱ组添加30%(含苦马豆素60 mg/kg)、Ⅲ组添加45%(含苦马豆素90 mg/kg)的比例制作混合饲料,饲喂至典型临床症状出现为止。攻毒后第14、35、71-70 d每次每组随机采集2只家兔的肝脏组织,检测机体SOD、GSH-Px、CAT和NOS活性及MDA、NEFA、·OH和NO含量的变化。结果显示,与正常对照组相比,试验组家兔肝脏SOD、GSH-Px、CAT等抗氧化物酶的活性极显著下降(P﹤0.01),而MDA、NEFA、·OH和NO含量极显著上升(P﹤0.01)。结果表明,不同浓度苦马豆素对家兔肝脏抗氧化功能有显著影响,且具有一定的时间效应和剂量效应关系,长期低剂量摄入苦马豆素可引起家兔机体不同程度的肝损伤。     

苦马豆素国内外研究进展

苦马豆素作为疯草毒性的主要成分，文中阐述了其物理化学特性，来源，临床症状，致病机理。但随着科学家对它的研究，发现了其抑制肿瘤细胞生长与免疫调节的作用，并作为一种新型的抗癌药物，对其进行了分离纯化与合成。     

苦马豆素对鸡马立克氏病血液学指标的影响

【目的】探讨苦马豆素(Swainsonine,SW)对马立克氏病(Marek′s disease,MD)鸡血液学指标的影响。【方法】将42只尼克T鸡随机均分成空白对照组(A组)、给药对照组(B组)、小剂量预防组(C组)、大剂量预防组(D组)、小剂量治疗组(E组)、大剂量治疗组(F组)和肿瘤对照组(G组),C-G组试验鸡注射马立克氏病病毒(Marek′sdisease virus,MDV),构建MD病理模型,A、B组为对照组。感染后6 d,B-D组鸡饮用以灭菌生理盐水稀释的SW,每4天饮1次,B、C组剂量为607μg/kg,D组剂量为1214μg/kg;E和F组鸡于感染后38 d饮用SW,给药途径和给药剂量分别与C和D组相同。感染后14 d开始采血,每10天采1次,测定血液学指标。【结果】MD模型构建成功,各组鸡白细胞总数在感染后14~34 d均上升,其中B-D组白细胞总数在感染后14 d显著高于A组(P<0.05),且B组淋巴细胞数显著高于A、D、F和G组(P<0.05);G组白细胞总数、嗜酸性白细胞数和单核细胞数在感染后44~84d下降至最低水平,E和F组次之,A、B、C和D组维持正常水平。【结论】SW能促进鸡淋巴细胞增殖,维持鸡白细胞水平,对鸡个体感染MDV具有保护作用。在MDV感染最早期,SW的预防效果良好。     

苦马豆素-BSA对家兔的免疫原性研究

用完全福氏佐剂对 14只家兔进行基础免疫 10 d后 ,将家兔随机分成 2组 ,每组 7只 ,1组为苦马豆素 - BSA免疫组 ,另 1组为对照。首免时免疫组每只兔四足掌共注射 0 .8m L,两侧大腿内侧肌肉各注射 0 .3m L,两侧颈部皮下各注射 0 .3m L,免疫总剂量为 2 m L/只 ,抗原含量 2 m g/ m L。 5周后第 1次加强免疫 ,免疫组每只兔两侧大腿内侧肌肉各注射 0 .5 m L,背部皮下 4点注射 ,每点 0 .2 5 m L,免疫总剂量为 2 m L/只 ,抗原含量 3mg/ m L。 1周后试血。 10 d后第 2次加强免疫 ,免疫途径与第 1次加强免疫相同 ,免疫总剂量为 2 m L/只 ,抗原含量 6 mg/ m L。1周后试血。结果表明 ,苦马豆素 - BSA第 1次加强免疫 1周后 ,1～ 7号兔都产生了抗体 ,间接血凝试验测定的抗体滴度分别为 2 1 ,2 1 ,2 2 ,2 1 ,2 1 ,2 2和 2 2 ,间接 EL ISA试验测定的抗体滴度分别为 2 2 ,2 2 ,2 3,2 2 ,2 2 ,2 3和 2 3。第 2次加强免疫 1周后试血 ,1～ 7号兔抗体滴度都明显升高 ,间接血凝试验测定的抗体滴度分别为 2 6 ,2 6 ,2 8,2 7,2 7,2 8和 2 8,间接 EL ISA试验测定的抗体滴度分别为 2 7,2 7,2 9,2 8,2 8,2 9和 2 9。     

苦马豆素对小鼠脑组织抗氧化功能的影响

探讨苦马豆素（Swainsonine,SW）对小鼠脑组织抗氧化功能的影响,进一步揭示SW的毒性作用机理。将64只昆明种小鼠随机分为对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组,将小花棘豆全草粉碎后,按Ⅰ组添加15%（SW含量30 mg/kg）、Ⅱ组添加30%（SW含量60 mg/kg）、Ⅲ组添加45%（SW含量90 mg/kg）的比例制作混合饲料,饲喂至典型中毒症状出现。攻毒后第14、28、42、63天每次每组随机采集4只小鼠的脑组织,检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH Px）、过氧化氢酶（CAT）、一氧化氮合酶（NOS）活性及丙二醛（MDA）、游离脂肪酸（NEFA）、羟自由基（·OH）、脂褐素（LPO）、一氧化氮（NO）和游离谷氨酸（Glu）含量的变化。结果表明,与正常对照相比,试验组小鼠脑组织SOD、GSH Px、CAT等抗氧化物酶的活性极显著下降（P<0.01）,而MDA、NEFA、·OH、LPO、NO和Glu含量极显著上升（P<0.01）。SW对小鼠脑组织抗氧化功能有显著影响,且具有一定的时间效应和剂量效应关系,长期低剂量摄入SW可导致小鼠不同程度的脑损伤。     

豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠行为致畸学研究

研究了豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠后代的行为致畸作用.将5组孕鼠分为空白对照组、豆类丝核菌次级代谢产物低剂量组、中剂量组、高剂量组及阳性对照组,分别灌胃给予生理盐水、低剂量（SW含量3.54 mg/kg）、中剂量（SW含量14.15 mg/kg）、高剂量（SW含量56.62 mg/kg）豆类丝核菌次级代谢产物及10 mg/kg环磷酰铵（CP）,待其自然分娩后,观察其后代生长发育及行为状态.结果表明,豆类丝核菌次级代谢产物3个剂量组在反射能力、协调运动能力、学习记忆能力及自主活动能力各方面指标与空白对照组相比差异均不显著（P＞0.05）,而与阳性对照组相比差异极显著（P＜0.01）.在本实验的剂量和条件下,豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠后代不具有行为致畸作用.     

豆类丝核菌次级代谢产物抗肿瘤作用的病理学观察

通过建立种植性肝癌(H22)实体瘤动物模型,并给荷瘤小鼠灌胃含有苦马豆素(swainsonine,SW)且剂量分别为2.7mg·kg-1·d-1和16.2mg·kg-1·d-1的豆类丝核菌次级代谢产物稀释液,分别于灌药后8d、16d剖检荷瘤动物并取肿瘤组织与肝组织制做石蜡切片,HE染色,普通光镜观察。结果表明,该次级代谢产物能抑制种植性实体瘤(H22)的生长和转移。因此,该次级代谢产物具有抗肿瘤药用价值。     

响应面法优化绿僵菌产绿僵菌素A的培养条件

【目的】优化绿僵菌Metarhizium anisopliae产绿僵菌素A的培养条件,提高绿僵菌素的产量。【方法】应用响应面法设计试验,以Plackett-Burman试验设计和中心组合试验设计筛选得到影响绿僵菌液体发酵的关键因素。【结果】试验得到1个拟合程度高、误差小的模型,该模型给出的最佳培养条件为:蔗糖22.7 g·L~(–1)、蛋白胨13.4 g·L~(–1)和发酵时间9.70 d,预测绿僵菌素A最大质量浓度为6.90μg·mL~(–1),实际测得质量浓度为6.89μg·mL~(–1)。【结论】结果可为绿僵菌大规模发酵获得粗毒素提供理论依据,使绿僵菌粗毒素的广泛开发与应用成为可能。     

豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素在小鼠体内联合抑瘤作用

探讨豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素(ADR)对小鼠肉瘤的体内联合抑制作用.建立小鼠肉瘤S180动物模型,分别用豆类丝核菌次级代谢产物、阿霉素、两药联合进行处理.计算抑瘤率、脾指数,测定小鼠T淋巴细胞活化指数、腹腔巨噬细胞吞噬活性,并对小鼠进行病理学观察.试验结果表明,两药联合能提高抑瘤率,次级代谢产物能显著提高小鼠的脾指数,使T淋巴细胞活化指数升高,腹腔巨噬细胞吞噬活性增强,同时能使瘤细胞密度降低,瘤组织出现大量变性坏死.豆类丝核菌次级代谢产物具有免疫增强作用,该产物与阿霉素联合对抑制小鼠移植性肉瘤S180具有相加作用.     

多巴胺对鸡新城疫疫苗抗体效价的影响

将180只10日龄公鸡随机均分成9组,用新城疫LaSota弱毒疫苗(ND)点眼滴鼻免疫的同时,3个实验组分别肌肉注射高、中、低剂量的多巴胺激动剂和拮抗剂溶液,注射1次/d,连续注射3次,对照组注射生理盐水。各组分别于免疫后7、14、21、28 d翼下静脉采血,分离血清,用微量血凝抑制(HI)测定新城疫抗体效价。结果表明,多巴胺(DA)受体激动剂中剂量组的HI抗体效价明显高于对照组,且呈现一直上升趋势;多巴胺(DA)受体拮抗剂的高剂量组抗体效价明显低于对照组,且呈现一直下降趋势;表明DA对新城疫疫苗的抗体效价有明显的调节作用。     

新城疫纳米乳疫苗研制及其免疫效力试验

研制新城疫纳米乳疫苗,并考察其免疫效果。利用伪三元相图法优选配方,并考察其结构类型、形态粒径、稳定性、安全性及免疫效果。结果表明:新城疫纳米乳疫苗为W/O型,澄明均一,乳滴呈球形,平均粒径364 nm;稳定性良好;注射、口服接种安全;每只0.751、.0 mL免疫剂量可产生良好的免疫效果。新城疫纳米乳疫苗安全、稳定、免疫效果好,具有临床应用前景。     

5-羟色胺对鸡新城疫疫苗抗体效价的影响

研究了5-羟色胺(5-HT)对鸡新城疫疫苗抗体效价的影响,结果表明:5-HT受体激动剂中剂量组的抗体效价明显高于对照组,且呈现一直上升的趋势;5-HT受体拮抗剂中剂量组的抗体效价明显低于对照组,且呈现一直下降的趋势;这表明5-HT对新城疫疫苗的抗体效价有明显的调节作用。     

不同油剂对金龟子绿僵菌孢子萌发率的影响

本文对杀蝗绿僵菌MA4菌株气生分生孢子在5种植物油、3种矿物油两两不同混配比例的混合油中的萌发率进行了研究,确定了混合比例为1:3的花生油与煤油的混合油作为制剂的载体油是一种理想的绿僵菌油剂类型.气生分生孢子在该混合油剂中36h的萌发率达到95%以上.