香菇中γ-谷氨酰转肽酶的分离纯化及其酶学性质研究

通过(NH4)2SO4沉淀、Phenyl Sepharose FF疏水层析分离纯化香菇中的γ-谷氨酰转肽酶(γ-Glutamyltranspeptidase,GGT),纯化后的GGT的比活力到达了19.59 U/mg.SDS-PAGE分析表明,GGT由分子量分别为28 kDa和60 kDa的两个亚基组成.酶学性质试验结果表明,GGT反应的最适温度为37 ℃,最适pH 值为7.6;金属离子Na+、K+和Ca2+对酶有激活作用,而Ag+、Cu2+、Zn2+和Fe3+则有抑制作用;试验范围内,GGT水解γ-glutamyl-p-nitroanilide的米氏动力学参数Km 值为2.601 μmol/mL,Vmax值为0.0287 μmol/min;组成的氨基酸中,Glu和Asp含量较高,Met和Cys含量较低.     

番茄EST-SSR标记PCR反应体系的优化

应用L16 (44)正交实验优化番茄EST-SSR标记PCR反应体系.结果表明:20 μL体系中各反应物最适浓度为:DNA模板45 ng/20μL,引物0.75 μmol/L,Mg2+ 2.0 mmol/L,dNTPs0.4 mmol/L,Taq DNA酶0.5 U/20μL,且Mg2+对该标记反应体系影响最大.利用5对EST-SSR引物及P1、P2基因组DNA验证优化体系的可靠性,为该标记在番茄基因组分子标记辅助育种提供了试验依据.     

果用香蕉薄片外植体植株再生的研究

 利用薄片培养方法, 通过直接和间接器官发生途径分别获得了‘广东631’香蕉的再生植株。该途径受多种因素影响。通过正交试验和单因子试验确定了最佳培养条件: (1)直接器官发生培养基为Ma (MS modified) + BAP 10μmol/L + KT 50μmol/L + IAA 1μmol/L ; (2)愈伤组织诱导培养基为Mb (B₅ modified) + Dicamba 10μmol/L + IAA 1μmol/L + 2 ,4-D 0. 7μmol/L + NAA 0. 5μmol/L + BAP 4. 4μmol/L + 活性炭1 g/L ; (3) 愈伤组织继代培养基为Mb + Dicam-ba 5μmol/L + IAA 1μmol/L + 2 ,4-D 0. 4μmol/L + BAP 22μmol/L + KNO₃ 500 mg/L + 维生素B₁ 40 mg/L + 活性炭0. 5 g/L ; (4) 分化培养基为1/ 2 Ma + BAP 1μmol/L + IAA 0. 5μmol/L + 活性炭1 g/L ; (5) 成苗培养基为Ma + BAP 1μmol/L + KT 4. 6μmol/L + NAA 1μmol/L。愈伤组织诱导和继代培养需在黑暗中进行。     

粘红酵母与金属离子结合使用对柑橘采后青霉病的抑制效果

研究了粘红酵母(Rhodotorulaglutinis)不同处理方法对柑橘果实采后病害(指状青霉)的抑制效果。结果表明:粘红酵母细胞悬浮液的抑菌效果最好,当浓度为1×109CFU/mL时,几乎完全抑制病害的发生,而滤液则会使病害加重。当粘红酵母分别与0.1mol/L浓度的Ca2+、0.1mol/L的Mg2+结合使用时,可提高抑菌效果。如与Fe2+使用时,高浓度的Fe2+会加重病害的发生,低浓度对抑菌效果不明显,当仅以浓度为2.5μmol/L的添加量抑菌效果较好。     

小干松SRAP-PCR反应体系的建立

以小干松针叶基因组DNA为模板,采用L16(45)正交实验设计,对SRAP-PCR反应体系中的Taq酶、Mg2+、dNTPs、模板DNA和引物5个因素在4个水平上进行优化.结果表明:小干松SRAP-PCR 20 μL反应体系最佳组合为:Taq酶0.5U,Mg2+浓度2.5mmol/L,dNTPs浓度0.15 mmol/L,模板DNA含量60 ng,引物0.2μmol/L.使用12对SRAP引物,采用优化后的体系进行SRAP-PCR反应,表明优化的体系很好地满足了小干松基因组DNA进行SRAP的扩增要求.     

红芝组成型漆酶酶学性质的研究

研究了温度、pH值、金属离子和抑制剂对红芝漆酶活性和稳定性的影响,测定该漆酶的Km值和Vmax。结果表明:红芝漆酶最适反应温度为60℃,低于50℃时较稳定;最适pH值为3.0,在pH 2.5~4.0的范围表现出较强的稳定性;Cu2+、Mn2+、Mg2+对酶活有促进作用,而Cr3+、Hg2+、Fe2+和抑制剂EDTA、DMSO、SDS对酶活有抑制作用;以愈创木酚为底物时Km值为0.13 mmol/L,最大反应速率Vmax为234 nmol.mL-1.min-1。     

黄绿蜜环菌SSR-PCR反应体系的优化及引物筛选

以CTAB法提取的黄绿蜜环菌(Armillaria luteo-virens) DNA为模板,应用L16(45)正交实验设计,对Mg+、dNTPs、引物和Taq DNA聚合酶、模板浓度5种因素进行SSR-PCR反应体系优化,建立了适合黄绿蜜环菌SSR-PCR反应的最佳体系并对退火温度进行检测.结果表明:在15μL反应体系中包括:1×PCR Buffer,100 ng模板DNA,dNTPs 217ìmol/L,引物0.5 μmol/L,Taq DNA聚合酶0.75 U,Mg2+ 1.3 mmol/L.稳定性检测证明,该反应体系具有较高的稳定性和重复性,并从34对引物中共筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物8对.该体系的建立为今后利用SSR标记对黄绿蜜环菌遗传多样性研究、亲缘关系分析及种质资源鉴定等研究提供了依据.     

三色雷蘑核糖核酸酶的分离纯化和理化性质

依次采用离子交换层析(DEAE-Cellulose、CM-Cellulose和SP-Sepharose)和凝胶过滤层析(Superdex 75 HR10/300 GL)从三色雷蘑(Leucopaxillus tricolor)子实体中分离纯化得到一种核糖核酸酶(Ribonuclease,RNase)。该酶比活为1406 U/mg,纯化倍数为154,通过HPLC-LTQ-Orbitrap测序得到4条肽段序列,分别为DMAVSYLSR、IGLSSIPR、ILGRFVVDTYK和SGKANAATPK。该核糖核酸酶的相对分子质量为15000,最适反应pH为 9.0,最适反应温度为40 ℃,热稳定性高,80 ℃孵育1 h后能保持90%以上的活性:Cu^2+、Ca^2+、Mn^2+、Cd^2+和Al^3+在1.25~10 mmol/L浓度下对该酶活性具有抑制作用,且抑制作用随着金属离子浓度的升高而变强;Fe^2+在1.25~5 mmol/L的浓度下,Pb^2+、Zn^2+、Mg^2+、Hg^2+、Fe^3+在1.25~2.5 mmol/L 的浓度下对该酶的活性有促进作用。     

新疆阿魏菇高效原生质体分离与再生体系的建立

以新疆阿魏菇为材料,研究了阿魏菇原生质体分离、再生体系建立的影响因素,建立了稳定的新疆阿魏菇原生质体分离、再生体系,并通过出菇验证了该体系的可利用性。结果显示,在35℃、0.6mol/LKCl稳渗剂条件下,菌龄为8d阿魏菇菌丝体(0.1g)在0.8mL酶解液中(1.5%离析酶+0.5%纤维素酶+2%溶菌酶)制备原生质体,酶解3h获得原生质体达5×106个/mL;在0.8mol/L蔗糖稳渗剂下,原生质体再生时间为16d,其再生率可达0.6%。出菇试验表明,获得的原生质体具有较强的恢复能力,能够与对照组在同样条件下正常出菇。从细胞水平上探索一条食用菌育种新途径,为发展和完善食用菌新菌株选育提供理论依据和技术借鉴。     

叶面喷施Fe2+对生菜形态和生理指标的影响

以生菜品种"大速生"为试材,采用基质栽培研究方法,研究了叶面喷施不同浓度的Fe2+对生菜幼苗形态和生理指标的影响。结果表明:喷施低于60mg/L的Fe2+处理对生菜的株高无明显影响,但浓度为60mg/L Fe2+时,就会抑制植株长高;Fe2+浓度低于45mg/L时,生菜具有较多的叶片数,浓度为60mg/L则起抑制作用;Fe2+处理对生菜的叶绿素a含量和叶绿素总含量的影响不明显,但是15mg/L Fe2+处理对生菜叶绿素b含量有促进作用,在此处理下的叶绿素b含量显著高于其它各处理,约为对照的164%;60mg/L Fe2+处理显著提高了生菜叶片的可溶性蛋白质含量;虽然叶面喷施Fe2+对叶片可溶性糖含量没有显著的影响,但显著降低了叶片脯氨酸含量和过氧化物酶的活性,且浓度越高,抑制作用越明显。