苯并[a]芘、菲在缢蛏体内的生物富集与释放

为了研究苯并[a]芘(Bap)、菲PHE在缢蛏体内的富集及释放过程的动力学特征,通过双箱动力学模型对富集(15 d)与释放(9 d)过程进行非线性曲线拟合,获得缢蛏对BaP、PHE的吸收速率常数k₁、释放速率常数k₂、生物富集因子BCF、平衡状态下生物体内BaP含量C_Amax、生物学半衰期B_1/2。结果显示,缢蛏对BaP的富集能力高于PHE,BaP增加幅度分别为0.45 ng/(kg·d)(40 μg/L实验组)、0.33 ng/(kg·d)(20 μg/L实验组)、0.23 ng/(kg·d)(10 μg/L实验组);PHE增加幅度分别为0.33 ng/(kg·d)(30 μg/L实验组)、0.25 ng/(kg·d)(20 μg/L实验组)、0.18 ng/(kg·d)(10 μg/L实验组)。BaP、PHE的富集、清水释放均为前期迅速,后期缓慢。缢蛏对BaP、PHE的k₁范围分别为0.39~0.52,0.30~0.43,平均值分别为0.44和0.36,均随BaP、PHE暴露浓度的增大而减少;k₂范围分别为0.001 6~0.001 7,0.002 8~0.003 3,平均值分别为0.001 6和0.003 0,无明显的变化趋势;BCF范围分别为243.96~306.28,105.73~130.85,平均值分别为268.18和118.57,均随BaP、PHE暴露浓度的增大而减少;C_Amax范围分别为3 062.76~9 758.25 μg/kg,1 308.54~3 171.84 μg/kg,平均值分别为5 969.08和2 287.71 μg/kg;B_1/2范围分别为407.73~433.22 d,210.68~248.06 d,平均值分别为421.20和232.04 d,均随BaP、PHE暴露浓度的增大而增大。     

三疣梭子蟹体内As的蓄积特异性研究

本研究以三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)为实验生物,应用半静态双箱模型的方法在室内模拟了三疣梭子蟹对砷(As)生物富集过程,As暴露浓度梯度分别为5、20和100 μg/L。通过对三疣梭子蟹体内总砷含量变化进行非线性拟合,得到其对总砷的生物富集系数(BCF)、生物富集动力学参数。结果显示,三疣梭子蟹肝胰腺组织对总砷的BCF明显高于肌肉组织。到富集实验结束时,三疣梭子蟹肝胰腺组织中由低到高浓度组对总砷的BCF分别为21.21、15.07和10.31,吸收速率常数(k1)及BCF均随水体中As浓度的增加而减少;肌肉组织中,由低到高浓度组对总砷的BCF分别为5.17、3.74和5.83,5、100 μg/L实验组各动力学参数较为接近,但20 μg/L实验组的富集速率常数k1最小,释放速率常数(k2)最大。研究表明,三疣梭子蟹BCF和生物学半衰期B1/2最小。     

高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography)检测烟熏大黄鱼Pseudociaena crocea(Richardson)中苯并[a]芘(Benzo(a)pyrene)

本文研究了烟熏大黄鱼样品中苯并[a]芘残留的提取、净化和高效色谱分析条件。建立了高效液相色谱法测定烟熏大黄鱼中苯并[a[芘残留的方法。该法检出限为0．1g／kg。回收率为76％-96％。     

苯并[a]芘(BaP)急性暴露对泥蚶消化腺的毒性效应及其应对机制初探

本文研究了苯并[a]芘(benzo[a]pyrene, BaP)急性暴露对泥蚶(Tegillarca granosa)的毒性效应,并以泥蚶的消化腺为目标组织,对泥蚶抵抗BaP毒性的机制进行了初步探究。对样本进行HE染色并对所采集的图像进行分析处理,结果发现,暴露于BaP导致泥蚶消化腺组织出现坏死。对样本进行脂质过氧化并进行DNA氧化损伤测定的结果显示,暴露于BaP导致泥蚶消化腺氧化压力增加,进而导致脂质过氧化以及DNA氧化损伤等细胞层面的损伤。抗氧化酶活性测定结果显示,BaP胁迫诱导泥蚶产生氧化应激反应,抗氧化防御体系积极参与BaP诱导的氧化应激调控过程。神经毒性指标测定结果显示,BaP胁迫可能影响泥蚶神经冲动的传导而具有神经毒性。此外,DNA甲基化水平测定及抗氧化酶基因表达测定的结果显示,泥蚶可能通过降低DNA甲基化水平来激活抗氧化系统以对抗BaP毒性。综上所述,急性BaP暴露会对泥蚶产生显著的毒性效应,以组织损伤、氧化应激反应和神经毒性为主要表征;泥蚶可能通过调整自身DNA甲基化水平来对抗BaP毒性效应。通过本研究,有望为深入探索双壳贝类应对石油污染物胁迫的内在调控机制提供新思路,同时为石油污染威胁下泥蚶的生物资源保护提供参考。     

三疣梭子蟹体内镉的蓄积特性及相应防控

应用半静态双箱模型室内模拟实验, 研究三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)体内镉(Cd)的蓄积特异性; 并通过分析钙离子(Ca²⁺)对三疣梭子蟹可食用部位镉(Cd)富集和释放影响, 提出三疣梭子蟹 Cd 污染防控建议。通过双箱动力学模型对三疣梭子蟹体内 Cd 含量变化进行非线性拟合, 得到富集速率常数 k₁和排出速率常数 k₂, 进而得到生物富集系数(BCF)和生物学半衰期(B_1/2)。结果显示, 1 μg/L、5 μg/L 和 50 μg/L Cd 暴露组三疣梭子蟹肝胰腺组织对 Cd 的 BCF 明显高于肌肉组织, 三疣梭子蟹肝胰腺组织中 BCF 和 k1 均随水体中 Cd 浓度的增加而增加, 1 μg/L, 5 μg/L 和 50 μg/L Cd 暴露组对 Cd 的 BCF 分别为 12.16、112.77 和 260.11; 肌肉组织中吸收速率常数 k₁ 与释放速率常数 k₂ 均随水体中 Cd 浓度的增加而增加, 由低到高 Cd 暴露组对 Cd 的 BCF 分别为 1.85、2.45 和 1.97。各浓度暴露组肝胰腺中 Cd 暴露风险指数(THQ)除 1 μg/L 组外, 均大于 1, 存在严重健康暴露风险; 各浓度暴露组肌肉中的 THQ 均小于 1, 没有明显的健康暴露风险。另外, Ca²⁺对三疣梭子蟹肝胰腺和肌肉中 Cd 富集和释放影响的实验结果表明, Ca²⁺的加入能够有效降低三疣梭子蟹肝胰腺和肌肉对 Cd 的富集, 并促进肝胰腺对 Cd 的释放。本研究结果为三疣梭子蟹 Cd 污染防控和食用方案的提出提供了理论基础。     

[4]东海三疣梭子蟹精子发生及精荚形成

为探究东海三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus Miers,1876)雄性群体的性腺发育规律,通过定期采样,运用形态学、组织学方法对东海三疣梭子蟹精子发生及精荚形成过程进行了研究,并结合精小叶生殖节段法对处于不同发育阶段的精巢进行了定性分析.结果表明,三疣梭子蟹精巢属于叶型,由精小叶和精小管组成的叶状管交织而成.精子发生过程与其他高等短尾派蟹类相似,精子成熟后即进入精小管中.输精管可能起源于精小管.三疣梭子蟹精巢和输精管的发育存在一定的年际变化.4-5月份,精巢小叶内精原细胞占优势,输精管内精荚零星分布;6-7月份,精母细胞与精细胞比例增加;8月份精母细胞为主.到了9月份,整个精巢完全被精细胞等发育程度较高的精小叶所占据,输精管内充满精液和精荚,为即将到来的交配季节做好准备.三疣梭子蟹交配活动主要集中在10月份.12月份精巢精小叶中出现游离精子.此后,精巢逐渐退化(1-3月),但输精管中一直储存着精液和精荚.三疣梭子蟹精荚形成过程始于前输精细管,精荚膜两层,分别由来自前输精细管分泌的第一种不定物质和其中、后端分泌的第二种不定物质.精荚内的基质可能直接源于精巢的精小叶部分.输精管中的强嗜酸性颗粒与第二种不定物质有融合作用,使输精管中贮存的精荚膜嗜酸性.     

三疣梭子蟹微卫星富集文库的构建与群体遗传分析

采用富集文库-菌落原位杂交法分离了30个三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的微卫星标记.三疣梭子蟹基因组DNA经HaeⅢ酶切连接后.用固定了((AC)15和(AG)15探针的尼龙膜((Hybond N+)捕捉含有微卫星的片段.转化至大肠杆菌DH5α中.构建三疣梭子蟹微卫星富集文库.菌落原位杂交后.任意选取150个克隆进行测序.阳性克隆率为85.48%.利用软件设计了105对微卫星引物.筛选到稳定扩增标记56对.采用30个三疣梭子蟹个体进行多样性评价.30个位点均表现出多态性.观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)及多态性信息含量(PIC)的范围分别为0.2222～1.000 0、 0.4367～0.9099和0.350～0.892.本研究筛选的微卫星位点将为下一步三疣梭子蟹遗传多样性分析、家系分析、遗传图谱构建和QTL定位等研究提供基础依据.     

三疣梭子蟹核型分析

实验用三疣梭子蟹于2003年3月－2004年6月购自浙江象山石浦港。以成熟卵、精巢、胚胎及溞状幼体等为材料进行三疣梭子蟹染色体数目和核型的研究。染色体制片采用组织切片法和气干法,用Olympus显微镜进行观测、摄影,依据Levan等的染色体分类标准进行核型分析。结果表明,精巢最适宜进行三疣梭子蟹染色体计数,卵内溞状幼体最适宜做核型分析。三疣梭子蟹染色体的数目是2n=106,n=53。核型分析显示,三疣梭子蟹有20对（第1～20号）中部着丝粒染色体（m）、3对（第21－23号）亚中部着丝粒染色体（sm）和30对（笫24～53号）端部着丝粒染包体（t）。因此,三疣梭子蟹核型为2n=106=40m＋6sm＋60t,染色体臂数NF=152;没有检查出异形性染色体的存在。     

三疣梭子蟹综合养殖技术

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)属甲壳纲、十足目,梭子蟹科,广泛分布于我国沿海,是经济价值较高的大型海产蟹类.20世纪80年代初,山东沿海进行了三疣梭子蟹土池育肥和蓄养试验,并取得了初步成功[1].目前,我国沿海各省均开展了三疣梭子蟹人工养殖,尤其在山东、江苏和河北等省养殖规模较大.三疣梭子蟹人工养殖方式主要有两种:一种是单养[2],另一种是与对虾、贝类等综合养殖[3].笔者对三疣梭子蟹综合养殖技术进行总结,以期为三疣梭子蟹人工养殖提供技术支持.     

三疣梭子蟹养殖技术之一三疣梭子蟹健康高效养殖技术

三疣梭子蟹是我国重要的海产名贵经济蟹类,近年来河北省沧州市人工养殖三疣梭子蟹快速崛起,在农业产业结构调整中的地位越来越突出。笔者通过在黄骅港开发区文发养殖场几年的养殖生产实践,总结出了一套适合本地区生产并较为可行的三疣梭子蟹养殖技术方案,通过在三疣梭子蟹养殖池内混养少量日本队虾,在不增加投入的情况下增加产出,提高了     

关于三疣梭子蟹的养殖技术之一三疣梭子蟹人工育苗技术

1998年,笔者在东港市椅圈镇海水育苗厂成功地进行了三疣梭子蟹人工育苗,现就有关技术介绍如下:     

三疣梭子蟹遗传连锁图谱的初步构建

利用AFLP和SSR标记技术结合"拟测交"策略,以三疣梭子蟹莱州湾、舟山野生群体杂交(1♂×3♀)产生的F2代家系为作图群体,初步构建了三疣梭子蟹雌、雄性遗传连锁图谱。用经过筛选的60对AFLP引物和3对SSR引物对亲本及108个F2代个体进行遗传分析,共得到母本分离标记214个,其中155个标记(AFLP标记153个,SSR标记2个)符合1∶1孟德尔分离规律;父本分离标记195个,139个标记(AFLP标记138个,SSR标记1个)符合1∶1孟德尔分离规律。雌性图谱包括100个遗传标记,分布在9个连锁群,6个三联体,15个连锁对,图谱总长度为1544cM,标记平均间隔22.0cM,总覆盖率为52.9%。雄性图谱包括71个遗传标记,分布在6个连锁群,6个三联体,11个连锁对,图谱总长度1174.2cM,标记平均间隔24.0cM,总覆盖率为49.5%,图谱中遗传标记分布比较均匀。     

莱州湾三疣梭子蟹的生化遗传分析

采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直板电泳技术对三疣梭子蟹的同工酶进行检测。分析了13种同工酶在莱州湾三疣梭子蟹肌肉中的表达情况,并对同工酶的表型进行了生化遗传分析。结果表明,13种同工酶有22个基因位点编码,其中Ldh-1,Me-3,Gdh-1,Sdh-1,G6pd-1和Sod-3共6个位点是多态的,多态位点百分数是27.3%。三疣梭子蟹的平均每个位点的等位基因的有效数目Ae为1.2270,平均每个位点的预期杂合度He为0.1170,实际杂合度Ho为0.2159。同时还分析了三疣梭子蟹的各个多态位点的Hardy-Weinberg偏离指数:Ldh-1、Me-3和Sod-3的d值都为1.0000,Gdh-1、Sdh-1和G6pd-1的d值分别为0.5047、0.8726和0.0597。这些数据表明,莱州湾三疣梭子蟹的种质资源还处于较好的状态。     

Vibriosis of Swimming Crab Portunus trituberculatus in Larviculture

Since 1985, frequent mass mortalities due to a bacterial infection have occurred in zoeal larvae of swimming crab Portunus trituberculatus reared at the Tamano Station of the Japan Sea-Farming Association. A bacterium was predominantly isolated from diseased larvae and was demonstrated by experimental infection to be the causative agent of the disease. Based on morphological, physiological, biochemical, serological and genetic characteristics of the pathogen, it was thought to be a new species and tentatively named Vibrio sp. Zoea. Challenge experiments with the bacterium in several aquatic animals indicate that Vibrio sp. Zoea appears to be a pathogen specific for crustaceans.     

The toxicokinetics of benzo[a]pyrene in juvenile coho salmon, Oncorhynchus kisutch, during smoltification

The activities of Phase I and Phase II biotransformation enzymes in the livers of yearling coho salmon (Oncorhynchus kisutch), were measured biweekly from February until the release date from the hatchery in mid-June, in order to observe any alterations in baseline levels during smoltification. Peak enzyme activities occurred in February and March and then declined through to June. Total cytochrome P450 levels ranged from 0.024±0.009 to 0.095±0.010 nmol mg^-1 microsomal protein, ethoxyresorufin O-deethylase activity ranged from 2.74±0.75 to 9.94±0.85 pmol min^-1 mg^-1 microsomal protein, and glutathione S-transferase activity ranged from 0.07±0.01 to 0.33±0.01 μmol min^-1 mg^-1 cytosolic protein during this period. Following an intraperitoneal injection of [3H]benzo[a]pyrene (B[a]P), elimination occurred rapidly (>71% excreted into the bile within 24h) from February to June. Although the distribution of B[a]P in tissues changed through the sampling period, the highest leels of B[a]P-derived radioactivity were found in the liver, bile and fat. Analysis of the bile revealed that 55 to 63% of the radioactivity was Phase I metabolites, 16 to 24% glucuronide conjugates, 8% sulfate conjugates, 7% other conjugates and 6% aqueous-soluble metabolites. These findings suggest that the transformation from freshwater adapted coho ‘parr’ to ‘smolts’, can significantly alter biotransformation enzyme activities and the distribution and elimination of xenobiotics such as benzo[a]pyrene in these fish. This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date.     

关于三疣梭子蟹的养成之二:三疣梭子蟹虾池吊漂养殖高产高效技术

三疣梭子蟹是目前虾池养殖的主要对象.但是传统的养殖方式不能克服梭子蟹同类相残的生产难题,也不能防止梭子蟹残杀同池对虾、蛤类等混养品种,因而造成池养产量、效益较低.1999年我们进行了三疣梭子蟹吊漂养殖300亩,总产量达48吨,亩产160公斤,亩产值11200元,亩净收益7200元,养殖成活率80%,总结养殖经验,主要应做到以下几方面的技术措施.     

三疣梭子蟹蜕皮周期的分期

采用形态学特征观察法对三疣梭子蟹蜕皮周期的划分进行了研究,并将三疣梭子蟹蜕皮周期划分为蜕皮后期、蜕皮间期、蜕皮前期和蜕皮期。结果显示,根据甲壳硬度变化蜕皮后期被分成A期(身体各部位很软),B期(背甲边缘变硬,腮区、心区尚软);根据游泳足趾节末端新旧表皮基线间距/旧表皮厚度的比值(R值)结合解剖后新壳的生长状况,蜕皮前期被细分为D₀亚期(0<R≤0.4)、D₁亚期(0.4<R≤0.65)、D₂亚期(0.65<R≤0.9)、D3亚期(R≈1)和D₄亚期(R≈1,新旧壳可完全分离)5个亚期;头胸甲腹面和螯足长节背面蜕皮缝的裂开是进入蜕皮期的先兆。