南极钩虾Gammarus sp.肠道共附生菌的分离及Streptomyces xiamenensis YF008的化学成分研究

南极极端生境中蕴含着发掘特殊生物活性天然产物的巨大潜力。对采自南极海域水深6 000 m海区钩虾(Gammarus sp.)的肠道共附生微生物进行分离,并对一株有价值菌株的代谢产物进行研究。采用稀释涂布法进行菌株分离,利用形态学观察及16S rRNA测序进行菌株种属鉴定;综合运用薄层色谱、正相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、反相ODS柱色谱和半制备高效液相(HPLC)等色谱手段分离纯化得到单体化合物,采用波谱学和质谱技术鉴定其化学结构。从钩虾中分离得到17株菌,并将其从分类学角度归属于9个属,其中细菌11株,放线菌6株。从放线菌Streptomyces xiamenensis YF008的发酵产物中分离得到8个单体化合物,分别鉴定为：1(10)E,5E-germacradiene-2,11-diol (1),N-[2-(4-hydroxyphenyl)] ethylacetamide (2),环(L-苯丙氨酸-甘氨酸)(3),环(L-苯丙氨酸-L-丙氨酸)(4),环(D-苯丙氨酸-L-异亮氨酸)(5),环(L-羟脯氨酸-L-苯丙氨酸)(6),环(D-亮氨酸-L-脯氨酸)(7),环(L-苯丙氨酸...     

南极大磷虾肠道曲霉菌Aspergillus sydowii NJF7的分离与代谢产物的研究

通过对2017年第34次"雪龙号"南极考察采集的南极大磷虾(Euphausia superba)共复生微生物进行分离,并对有价值菌株的次级代谢产物进行了研究。采用在3种选择性培养基中添加不同抗生素的稀释平板涂布法,从南极大磷虾中分离出一株有价值的真菌进行扩大培养,运用TLC、柱色谱(正相硅胶、C18硅胶、MCI、Sephadex LH-20凝胶)和半制备型HPLC等色谱方法对其代谢产物进行高效快速地分离纯化,结合现代波谱学手段(ESI HR MS、1H-NMR),鉴定次级代谢产物结构。首先经过形态学、18S rDNA-ITS序列分析,鉴定分离到一株真菌为曲霉Aspergillus sp.NJF7;从曲霉NJF7中分离到13个代谢产物,分别鉴定为环(脯氨酸-酪氨酸)(1)、环(色氨酸-酪氨酸)(2)、环(脯氨酸-苯丙氨酸)(3)、环(缬氨酸-脯氨酸)(4)、环(缬氨酸-色氨酸)(5)、环(异亮氨酸-色氨酸)(6)、环(谷氨酰胺-色氨酸)(7)、对羟基肉桂酸甲酯(8)、尿嘧啶(9)、对羟基苯乙胺(10)、苯乙胺(11)、N-甲基酪胺(12)、大麦芽碱(13),其中化合物7为新的天然产物。     

南极海洋假单胞菌Pseudomonas sp. NJ 013的化学成分

本研究进行了一株南极假单胞菌Pseudomonas sp.NJ-013代谢产物多样性分析、化学成分的分离和结构鉴定,以探讨其产物结构类型。菌株NJ-013甲醇提取物经LC-TOF MS测试分析其代谢产物多样性;还经柱层析和半制备高效液相色谱制备得到4个化学成分;化合物结构经TOF MS、1H-和13C-NMR等波谱学方法和文献数据对照鉴定。假单胞菌Pseudomonas sp.NJ-013的代谢产物主要类型为含氮的生物碱或寡肽类,分离得到的化合物1-4分别鉴定为环(4'-羟基苯丙氨酸-脯氨酸)(1)、环(4-羟基脯氨酸-亮氨酸)(2)、环(4-羟基脯氨酸-苯丙氨酸)(3)、环(异亮氨酸-脯氨酸)(4)。结构较为复杂的微量成分尚待进一步富集、研究。     

海绵共附生放线菌Streptomyces parvulus MA1076的次级代谢产物研究

海绵共附生放线菌是活性次级代谢产物的重要来源,对海绵共附生放线菌Streptomyces parvulus MA1076进行菌株鉴定和化学成分分析.通过16S rDNA序列分析、构建系统发育树进行菌株鉴定;利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及半制备高效液相色谱等技术对其发酵产物进行分离和纯化,通过...     

真海鞘壳化学成分分离及其浸膏抑制人肝癌细胞HepG2活性的研究

采用硅胶柱色谱及薄层制备色谱等手段从真海鞘(Halocynthia roretzi Drasche)壳中分离纯化出了3种化合物。对所获得的化合物经过理化性质、波谱分析和文献对照的方法进行了结构鉴定。同时,采用CCK-8方法对75%EtOH浸提所获得的真海鞘壳浸膏进行了抑制人肝癌细胞HepG2生长测试。结果表明,从真海鞘壳中分离得到3种化合物分别为:Diethyl 24-[(Z)-3-methy-1-hexenyl]-heptatetracontanedioate(化合物1)、胆甾醇(化合物2)和6-(2,,3,-Dihydroxy-4,-hydroxymethyl-tetrahydro-furan-1,-yl)cyclopentadiene[c]pyrrole-1,3-diol(化合物3)。体外测试表明,75%EtOH浸提所获得的真海鞘壳浸膏具有显著抑制人肝癌细胞HepG2生长的活性,可作为潜在的抗肿瘤药物进行进一步研究。     

双齿围沙蚕化学成分及其浸膏抗肿瘤活性的研究

采用硅胶柱色谱及薄层制备色谱等手段从双齿围沙蚕(Perinereis aibuhitensis)中分离纯化出2种化合物。对所获得的化合物通过理化常数测定、波谱数据分析同文献对照的方法进行了结构鉴定。同时,采用CCK-8方法对双齿围沙蚕浸膏及乙酸乙酯萃取部分分别进行抑制肿瘤细胞活性测试。结果表明,从双齿围沙蚕中分离得到2种化合物分别为:胆甾-4烯3α,6β醇(1)和(E)-17-(4,7-dimethyloct-5-en-2-yl)-10,13-dimethyl-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol(2),且化合物1是首次从沙蚕中分离得到。抑制肿瘤细胞活性测试表明,70%乙醇浸提获得的双齿围沙蚕浸膏及乙酸乙酯萃取部分对人胃癌细胞AGS、人肝癌细胞HepG2以及人卵巢癌细胞SKOV3均具有抑制细胞增殖作用,且具有剂量和时间依赖性,可作为潜在的抗肿瘤药物进行进一步研究。     

2株海鞘共附生真菌的次生代谢产物研究

分别对采集自防城港白龙的皱瘤海鞘(Styela plicata)和北海南汅的冠瘤海鞘(Styela canopus)样品的共附生真菌Purpureocillium sp. FBZ-1和Penicillium sp. BNG-1进行研究。通过显微镜观察鉴定其形态,并通过分析生物学特征鉴定其种属。通过对两种真菌的次级代谢产物进行分离和结构鉴定,共分离鉴定28个小分子化合物,从中未发现新的化合物,主要的化合物类型是芳香胺类、生物碱类和二酮哌嗪类,分别为:lumichrome、 1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、β-咔啉、环(异亮氨酸-脯氨酸)、环(亮氨酸-羟基脯氨酸)、环(色氨酸-缬氨酸)、环(亮氨酸-脯氨酸)、环(苯丙氨酸-脯氨酸)、环(异亮氨酸-丙氨酸)、环(色氨酸-亮氨酸)、苯乙胺、N-乙酰苯乙胺、吲哚乙胺、N-甲基色胺、N-(4-羟基)丁酰苯乙胺、对羟基苯乙胺、 5,7,4-三羟基异黄酮、 7,4-二羟基异黄酮、 5,7,3,4-三羟基异黄酮、邻苯二甲酸异辛酯、 2,4-N,N-dimethyl-lumichrome、 3,4-二氢-3-甲基-β-咔啉-1-酮、色氨酸、 2-羟基-3-吲哚丙酸、环(缬氨酸-脯氨酸)、环(亮氨酸-丙氨酸)、环(苯丙氨酸-5-甲基-3,4-脱氢脯氨酸)、环(色氨酸-天冬酰胺)。研究结果对利用我国丰富的海鞘及其共附生微生物资源并研究其次级代谢产物结构多样性,发现其中可能含有的结构新颖的化学物质以开发抗菌、抗病毒及抗肿瘤新药,具有十分重要的理论意义和潜在的应用价值。     

海胆壳中具有抑菌活性物质的分离鉴定

观察海胆壳中化学成分对金黄色葡萄球菌的抑制活性,对其进行分离纯化,并根据理化性质、波谱分析和文献对照的方法对所分离的化合物进行结构鉴定。用75%EtOH对粉碎的海胆壳进行热浸提,减压浓缩后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取,得到各层提取物,对其进行抑制金黄色葡萄球菌生物活性测定。进而,粗提物利用薄层层析、反复硅胶柱层析、半制备薄层色谱层析以及重结晶等手段进行分离纯化得到化合物。通过抑制金黄色葡萄球菌生物活性测定可知石油醚提取物、正丁醇提取物均有较显著的抑制金黄色葡萄球菌的活性。石油醚提取物经过反复硅胶柱层析和重结晶手段得到化合物HDB,结构鉴定为棕榈酸。正丁醇提取物经过反复硅胶柱层析、半制备薄层色谱以及重结晶等手段分离得到化合物HDA,结构鉴定其为(3β)-胆甾-5-烯-3-醇。     

具抑菌活性海洋微生物的筛选

从采集于上海郊区海域的海水和海泥样品中分离出 193株海洋细菌，从中筛选抑菌活性菌株。 分别利用琼脂块法和管碟法对分离出的菌株进行初筛和复筛，结果显示，有 29株海洋细菌具有抑菌活性， 占总分离菌株的 15%，其中抑菌能力较强的 G4，抑菌谱较广，能同时抑制革兰氏阳性和阴性指示菌。     

南极曲霉Aspergillus niger NJ49次级代谢产物的分离与鉴定

为挖掘南极真菌的资源应用潜力，对一株南极真菌进行了分子鉴定、次级代谢产物分离及结构鉴定。经ITS rDNA序列分析并构建系统发育进化树，鉴定该菌株为曲霉属真菌，命名为Aspergillus niger NJ49。综合运用Sephadex LH-20和G25凝胶柱层析、半制备高效液相色谱等方法对南极磷虾共附生微生物曲霉属真菌A.niger NJ49的发酵物进行分离和纯化，并利用核磁、质谱等现代波谱学方法进行结构鉴定。从南极曲霉A.niger NJ49中分离鉴定出12个化合物，分别鉴定为Trp-Val-Val(1)、Phe-Val-Val(2)、cyclo-(His, Leu)(3)、cyclo-(Pro, Arg)(4)、(3S,12aS)-3-(Isopropyl)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-pyrazino[1′,2′:1,6]-pyrido[3,4-b]-indole-1,4-dione(5)、cyclo-(Pro, Phe)(6)、cyclo-(Val, Phe)(7)、cyclo-(Pro, Tyr)(8)、cyclo-(Pro, Val)(9)、Phe...