猪淋巴结内嗜伊红性颗粒细胞的几种酶电镜细胞化学研究

报道了猪淋巴结内一种特殊的嗜伊红性颗粒细胞（暂定名）的超微结构和几种酶的电镜细胞化学特征．该细胞主要分布于猪淋巴结的髓质和皮质一髓质交界区，呈圆形或椭圆形，核也呈圆形或椭圆形，细胞质中含有较多的特殊颗粒，其它类型的细胞器较少．特殊颗粒有单层膜包裹．内容物电子致密度高，Ｍｇ２＋－腺苷三磷酸酶（Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ）、酸性磷酸酶（ＡＣＰａｓｅ）、非特异性脂酶（ＮＳＥ）、５＇－核苷酸酶（５＇－ＡＭＰａｓｅ）细胞化学反应均呈阳性．Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｃ主要定位于细胞膜，ＡＣＰａｓｅ均匀分布于特殊颗粒内，ＮＳＥ分布在特殊颗粒膜和颗粒内，５＇－ＡＭＰａｓｅ主要定位于颗粒膜。     

猪口蹄疫病毒对三种动物细胞嗜性的研究

将猪FMDV毒株(O/GD/MSH/86)分别适应牛肾细胞(Bovinekidney,MD-BK)、幼仓鼠肾细胞(Babyhamsterkidney,BHK-21)和猪肾细胞(Porcinekidney,PK-15),研究了FMDV在宿主细胞上的嗜性。结果发现,该毒株在MD-BK细胞上不产生细胞病变(CPE),从细胞液中也未检测到病毒,而在BHK-21和PK-15细胞上能够稳定产生CPE。可见,猪FMDVO/GD/MSH/86毒株不能在MD-BK细胞上增殖,而在BHK-21和PK-15细胞上则增殖较好。     

猪卵巢颗粒细胞分离培养及细胞生物学特性研究

颗粒细胞是研究雌性动物生殖生理、病理、药理和毒理机制的重要细胞模型。采用常规细胞培养的方法,建立猪卵巢颗粒细胞培养系统并研究其生物学特性。结果显示,抽吸法和剖切法分离猪卵巢颗粒细胞各有利弊,但都对细胞的活率影响不显著;有血清的培养效果好于无血清,而且以胎牛血清的效果较好,基础培养基DMEM和TCM199的培养效果相似,以DMEM+10%FBS培养效果最好;形态学观察发现了颗粒细胞贴壁生长和缺乏接触抑制的现象,体外生长曲线符合贴壁细胞的生长特征,DAPI荧光染色法没有检测到支原体污染,细胞生长状态良好。     

猪嗜中性粒细胞cAMP磷酸二酯酶的提取与活性检测

目的:提取动物体的cAMP磷酸二酯酶(PDE),并检测其活性,为兽医临床研究PDE活性的生理病理变化和中西药物对PDE活性调节作用建立实验方法。方法:猪血经过葡聚糖沉降,淋巴细胞分离液分离,特殊分离液洗涤和红细胞溶胀后,获得嗜中性白细胞。嗜中性白细胞破碎后释放PDE,通过反相高效液相色谱(RP HPLC)法测定反应体系中cAMP的含量,根据底物(cAMP)的减少量,确定嗜中性白细胞中PDE活性。结果:经显微镜计数嗜中性粒细胞纯度达95%;酶量在10～40μl间对cAMP的分解率为9 90%～31 39%,与PDE活性之间存在直线相关关系(r=0 99)。结论:猪嗜中性粒细胞中含有高纯度、高活性的cAMP PDE;高效液相色谱法可以准确测定PDE反应前后cAMP含量的变化;两种方法结合可以作为兽医临床研究机体PDE活性变化和中西药物对PDE活性调节作用的新方法。     

嗜热梭菌内切纤维素酶的表达及其酶特性研究

通过PCR克隆了嗜热梭菌内切纤维素酶基因,该基因ORF为1 947 bp,经Blast分析,该序列与嗜热梭菌同源性最高(93%),构建了内切纤维素酶大肠杆菌基因工程菌. SDS-PAGE电泳结果表明,在分子量77 000左右有表达蛋白条带,该工程菌最适酶活性为90 U/ml,是出发菌的2.8倍,最适温度在60 ℃左右,最适pH为8.     

猪流产嗜性衣原体MOMP基因的克隆及原核表达

【目的】克隆猪流产嗜性衣原体青海株主要外膜蛋白(Major outer membrane protein,MOMP)基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的猪流产嗜性衣原体MOMP基因的核苷酸序列,设计并合成4条特异性引物,用套式PCR方法扩增猪流产嗜性衣原体青海株MOMP基因,将其克隆入pMD18-T载体中,进行测序及序列分析。然后将MOMP基因亚克隆入原核表达载体pGEX4T-1中,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检测。【结果】扩增到猪流产嗜性衣原体青海株1170bp的MOMP全长基因。序列分析结果表明,该基因与已发表的猪流产嗜性衣原体B11001株和CP/12株核苷酸同源性均为99.7%。SDS-PAGE电泳可检测到分子质量约为66ku的融合蛋白,主要以包涵体形式存在。Western-blot分析表明,重组蛋白可被猪流产嗜性衣原体抗体识别。【结论】成功克隆了猪流产嗜性衣原体青海株MOMP基因,并进行了原核表达,表达的蛋白具有抗原活性。     

发情间期注射PMSG对猪卵泡发育及颗粒细胞凋亡影响的研究

为探讨孕马血清促性腺激素 (PMSG)对猪卵泡发育和闭锁及颗粒细胞凋亡的影响 ,实验采用性成熟肥育母猪为实验材料 ,对在情期第 11d(发情当日为 0 d)注射 PMSG后 2 4 ,4 8,72和 96 h的猪卵巢表面各类卵泡数量、颗粒细胞凋亡比例以及外周血浆中类固醇激素浓度等进行了研究。结果表明 ,注射 PMSG后 2 4 h卵巢表面卵泡总数、小卵泡 (直径 <3mm)数和中等卵泡 (直径 3～ 5 m m)数分别为 :5 9,32和 2 5 .5个 /卵巢 ,明显多于同期对照组 (情期第 12 d)猪的数量 ;注射 PMSG72和 96 h卵巢表面大卵泡 (直径≥ 5 m m)数量分别为 7和 6个 /卵巢 ,明显多于对照组 (情期第 14和第 15 d) ,而此时卵汇总数却明显低于对照组。大卵泡颗粒细胞的凋亡比例在注射 PMSG后与对照组相比无显著差异 ,而小卵泡和中等卵泡的颗粒细胞的凋亡比例在注射 PMSG后 2 4 h(6 .4 %和 7.8% )显著 (P<0 .0 5 )降低 ;中等卵泡颗粒细胞凋亡比例到 PMSG后 72 h回升至与对照组无显著差异 ,小卵泡颗粒细胞凋亡比例于 PMSG后 96 h回升至与对照组无显著差异。血清中雌二醇浓度在 PMSG注射后明显升高 ,在 PMSG注射后72 h时达最高值 (72 .3pg· m L- 1 ) ,显著高于对照组 (10 .8pg· m L- 1 )。孕酮的浓度在 PMSG注射后无明显变化。以上结果表明 ,在体内条     

日本脑炎病毒感染仔猪扁桃体的细胞嗜性研究

[目的]本试验旨在探究日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染猪扁桃体的组织和细胞嗜性.[方法]筛选JEV抗原、抗体均为阴性的健康商品仔猪3头,通过颈部皮下及静脉注射接种JEV NJ2008株,每头共2×107 TCID50·mL-1,对照仔猪1头注射生理盐水2 mL.饲养观察...     

猪流产嗜性衣原体POMP90蛋白的原核表达及反应原性分析

设计特异性引物进行PCR扩增,获得猪流产嗜性衣原体CP/12株的pomp90基因,将其定向克隆到原核表达载体pGEX-KG中.阳性重组质粒转化原核表达宿主菌E. coli BL21,用IPTG进行诱导表达,获得高效表达的融合蛋白.采用WeSTrn-blot和间接ELISA检测表明纯化的重组蛋白具有良好的反应原性,初步选择其最佳包被浓度为1μg/mL.     

去乙酰化酶SIRT1过表达对猪卵巢颗粒细胞中AMPK活性的影响

构建猪SIRT1基因全长编码区(coding region sequence,CDS)的真核表达载体,转染猪原代卵巢颗粒细胞,探讨SIRT1基因过表达对猪卵巢颗粒细胞中AMPK基因的转录及其蛋白活性的影响。测序结果表明,猪SIRT1基因的CDS区全长大小为2 229 bp,与NCBI发布的猪SIRT1基因m RNA序列(EU030283.2)一致;转染p EGFP–C1–SIRT1载体的颗粒细胞中SIRT1的m RNA表达水平和蛋白表达水平极显著高于空载体对照组(P0.01);p EGFP–C1–SIRT1转染组细胞中,AMPK–α1和AMPK–α2基因的m RNA表达量显著高于空载体对照组,且细胞中AMPKαThr172位点的磷酸化水平显著升高(P0.05)。结果表明,体外培养的原代猪卵巢颗粒细胞中的SIRT1基因过表达使AMPK的表达显著增加,影响AMPK的活性,推测SIRT1可能通过AMPK在猪卵巢颗粒细胞凋亡过程中发挥重要的调控作用。     

嗜碱菌AL-103果胶酶酶学性质的研究

研究了嗜碱菌AL-103果胶酶酶学性质。经硫酸铵盐析和缓冲液透析,获得粗酶,该酶最适反应温度60℃,最适作用pH6,40℃保温10min酶活基本不损失,在pH7．0～10．5范围内酶蛋白稳定：Li^＋、Ca^2＋和Mg^2＋对酶有激活作用,AL^3＋有抑制作用,Co^2＋、Pb^2＋、Fe^3＋、Mn^2＋和Hg^2＋有强烈抑制作用。     

猪源嗜性衣原体HB1043株主要外膜蛋白(MOMP)基因的分析及重组表达

根据GenBank中衣原体主要外膜蛋白(MOMP)全基因序列设计特异性引物,以临床分离的衣原体病原中提取的衣原体全基因组为模板,利用特异性引物PCR扩增得到MOMP全基因序列.通过BLAST比对,结果显示其与已提交的猪流产衣原体CG1株的MOMP序列(EU531729)有1个碱基不同.根据对测序结果进行信号肽序列预测及内切酶位点分析,选用BamH Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切将目的蛋白序列克隆到表达载体pET-28a上,得到重组质粒pET-28a-MOMP.将重组质粒转化入E coli BL21进行表达,表达产物使用镍离子亲和层析柱进行纯化得到目的蛋白rMOMP.目的蛋白经Western-blot检测,证明其具有免疫学活性.     

温州蜜柑叶片内三磷酸腺甙酶活性的电镜细胞化学研究

应用电镜细胞化学方法,对温州蜜柑叶片的ATP酶活性以及在抗寒锻炼中的变化进行了亚细胞定位。结果表明ATP酶活性主要分布在细胞质膜及细胞间隙内,抗寒锻炼后的叶片,ATP酶活性也分布于细胞核内及细胞壁中,认为ATP酶活性的分布与细胞抗寒性有关。     

猪增生性肠炎黏膜免疫相关细胞数量研究

为了揭示猪增生性肠炎黏膜免疫相关细胞数量的变化情况.采用组织学方法,比较PCR检验阳性猪(获得胞内劳森氏菌特异性扩增产物)与阴性猪(无胞内劳森氏菌特异性扩增产物)的十二指肠、空肠、回肠黏膜淋巴细胞、杯状细胞、肥大细胞的数量和分布变化.结果表明,阳性猪十二指肠、空肠黏膜上皮内每100个柱状细胞间淋巴细胞的数量同比阴性猪稍...     

六种限制性内切酶产生的二花脸大约克夏猪的DNA指纹图谱

用噬菌体Ｍ１３ｍｐ１８单链ＤＮＡ作探针，对二花脸和大约克夏猪进行了ＤＮＡ指纹的研究。采用六种限制性内切酶获得了高分辨率的、具有个体特异性的ＤＮＡ指纹图谱。这六种限制性内切酶是：ＨｉｎｆⅠ，ＨａｅⅢ，ＥｃｏＲⅠ，ＢａｎⅠ，ＴａｑⅠ和ＰｓｔⅠ。不同酶消化产生的图谱带数有差异，并有品种特征带趋向。     

猪流产嗜性衣原体omp-1基因的重组质粒与重组蛋白免疫组合效果

为增强猪流产嗜性衣原体omp-1基因的免疫措施进而筛选出高效新型分子疫苗,本实验将猪流产嗜性衣原体omp-1基因克隆入pcDNA3.1( )载体构建DNA疫苗,初次和二次免疫分别以核酸/重组蛋白(DNA/r-MOMP)、重组蛋白/核酸(r-MOMP/DNA)、重组蛋白 核酸/重组蛋白 核酸(r-MOMP DNA/r-MOMP DNA)、核酸 核酸(DNA/DNA)和重组蛋白 重组蛋白(r-MOMP/r-MOMP)5种组合接种BALB/c小鼠,同时以载体和弱毒为对照。二次免疫后14 d以ELISA和T淋巴细胞增殖实验检测特异性体液免疫和细胞免疫应答水平。结果显示核酸与重组蛋白同时免疫可以诱导产生较高的体液免疫和细胞免疫水平,而DNA/r-MOMP组合的细胞免疫和体液免疫水平高于r-MOMP/DNA组合,单独免疫DNA组或r-MOMP都不能获得好的细胞和体液免疫。     

猪胰脏中胰酶的制备新工艺技术研究

以猪胰脏为原料,采用单因素试验研究胰酶制备的不同工艺路线、不同提取溶剂、提取激活温度、时间、pH和沉淀剂种类对三酶活力和收率及其他品质的影响,并通过正交试验优化得胰酶制备的工艺条件为:提取溶剂为25%乙醇(原料量的2倍,V·m-2),保护剂为1.0%氯化钠和1.0%甘油,激活剂为0.2%CaCl2和1.0%胰酶原粉;提...     

丙硫咪唑对猪囊尾蚴酶组织化学影响的研究

本实实验采用酶组织化学方法测定猪囊定蚴发育过程中三磷酸腺苷酶（ATPase)、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）三种酶的活性，并研究了丙硫米唑类药物对不同时期囊尾蚴的三种酶活性的影响。实验结果表明，丙硫咪唑类抗囊药物通过抑制囊虫体内ATPase、ACP、AKP的活性而抑制虫体对糖的吸收和物质转运，阻碍了能量代谢和ATP的产生，从而影响虫体发育和生长，最终导致囊尾蚴死亡。     

嗜热毛壳菌纤维酶对肉鸡消化道酶活性影响的研究

试验旨在研究嗜热毛壳菌纤维酶对肉鸡消化道酶活性的影响。选用1日龄健康AA肉仔鸡120羽,随机分成4组,即对照组和试验1、2、3组,分别添加嗜热毛壳菌纤维酶0、0.05%、0.15%和0.25%。结果表明,试验2和3组十二指肠(P0.05)和空肠胰蛋白酶、胃蛋白酶的活性(P0.01)以及十二指肠、空肠和胰脏脂肪酶的活性(P0.05或P0.01)显著或极显著高于其他各组,对淀粉酶的活性无显著影响(P0.05)。     

应用酶联免疫吸附试验诊断猪痢疾的初步研究

以猪痢疾密螺旋体超声裂解冻融物作抗原进行酶联免疫吸附试验,测定了感染猪血清中的抗猪痢疾密螺旋体抗体。酶联免疫吸附试验最适条件为:抗原10微克蛋白/毫升,血清稀释度100倍左右,酶标结合物1000倍左右。对103份感染猪血清用酶联免疫吸附试验和平板凝集试验对比测定表明,两法呈高度正相关,而且前法多检出8.74%的阳性样品。酶联免疫吸附试验比平板凝集试验更敏感,有可能成为猪痢疾诊断的一种快速方法。