红花三叶草中产苦马豆素豆类丝核菌的分离与鉴定

为了确认中国红花三叶草中是否存在产苦马豆素（SW）的豆类丝核菌,用改良的真菌分离方法从植物样品中分离豆类丝核菌。根据豆类丝核菌的形态特征对分离的真菌进行初步筛选,然后对初步筛选所得真菌的5.8S rDNA ITS序列进行扩增、测序并构建系统发育树以确定初步筛选真菌的种属,经薄层色谱和气相色谱对豆类丝核菌菌丝体提取物进行SW检测。最终,筛选出一株符合豆类丝核菌形态特征的丝核菌属真菌RL2012,薄层色谱和气相色谱检测到其菌丝体提取物中含有SW。综上分析最终确认红花三叶草中存在产苦马豆素的豆类丝核菌。     

豆类丝核菌次级代谢产物对动植物细胞损害作用的对比

【目的】探索豆类丝核菌或其次级代谢产物的动植物损害在细胞生物学上的作用，为苦马豆素（swainsonine, SW）的毒理学研究提供新的思路。【方法】通过制作豆类丝核菌次级代谢产物污染的饲料和人工污染豆类丝核菌饲料，饲喂家兔17d ,剖检家兔并取其脑、肝脏、肾脏等组织分别进行病理组织学和电镜观察；并将不同浓度的次级代谢产物和不同株的豆类丝核菌分别污染回接的绿豆，待84h培养后，进行组织学和电镜观察。【结果】在对动植物细胞损害作用中，豆类丝核菌次级代谢产物使家兔脑组织和淋巴细胞呈现空泡变性，神经细胞核糖体脱颗粒，粗面内质网扩张等变化；同时还能使植物根部组织结构受损，细胞呈现空泡变性，内膜破裂等变化。【结论】豆类丝核菌引起的动物中毒作用主要是其次级代谢产物中SW发挥毒性，且同疯草中毒引起的病理变化基本一致；菌株对植物根部的致病性与其次级代谢产物中SW含量呈正相关。即推测，SW很有可能不仅是动物豆类丝核菌中毒的主要毒素，而且是豆科植物丝核菌病中细胞损害的主要化学物质。     

豆类丝核菌培养液中苦马豆素分离提取

[目的]探索豆类丝核菌培养液中苦马豆素的提取工艺,[方法]从豆类丝核菌培养液中分离苦马豆素,采用薄层层析、气相色谱对分离产物进行鉴定分析。[结果]产物经薄层层析、气相色谱法及熔点测定鉴定分析,确定分离到的粉末为苦马豆素,检测结果较好。[结论]该研究对于苦马豆素的批量化生产有着重大意义。     

豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素的体外联合抑瘤作用研究

［目的］研究豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素的降毒增效作用。方法］分别采用6种不同浓度的豆类丝核菌次级代谢产物（苦马豆素含量分别为10.00、5.00、2.50、1.25、0.62、0.31 μg/ml）处理人肝癌细胞HepG2,测量其IC50;然后用此代谢产物与2种不同浓度（60、6 μg/ml）阿霉素（ADR）联合处理HepG2,分析两者的增效作用。结果］豆类丝核菌次级代谢产物可抑制肝癌细胞HepG2生长,其对HepG2细胞作用72 h的IC50为1.25 μg/ml;ADR可显著抑制肝癌细胞HepG2生长,加入豆类丝核菌次级代谢产物后HepG2细胞的形态和存活率变化不大。结论］豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素体外联合不具有增效作用。     

金龟子绿僵菌发酵代谢产物中苦马豆素的初步研究

金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)经过发酵培养,采用气相色谱法对发酵代谢产物中的苦马豆素(Swainsonine SW)进行了定性和定量分析;同时用正丁醇萃取法对发酵液进行了初步的分离提取及薄层层析法检测。结果表明,金龟子绿僵菌发酵代谢产物中含有苦马豆素,且含量为10.2 131 mg/L;正丁醇萃取法是从发酵液中提取苦马豆素的有效方法。     

豆类丝核菌中苦马豆素的提取

采用Ｈ２Ｏ∶ＣＨ２Ｃｌ２萃取、７３２型阳离子树脂交换等方法,从豆类丝核菌中分离到纯结晶,经薄板层析法发现,豆类丝核菌提取物浓缩的粗品液和苦马豆素标准品经Ｅｈｒｌｉｃｈ＇ｓ试剂显色后,二者均出现一椭圆形紫色斑点,且Ｒｆ值均为０．８１;气相色谱法研究发现,提取物纯品标样（１５．９４２０ｍｇ／Ｌ）与苦马豆素标准品在同一色谱条件下显示出完全一致的峰形,证明从豆类丝核菌中分离到的纯结晶是苦马豆素纯品。研究还表明豆类丝核菌干燥菌丝体中苦马豆素含量达１．２３％～２．９９％．     

豆类丝核菌中苦马豆素的提取

采用Ｈ２Ｏ：ＣＨ２Ｃｌ２萃取、７３２型阳离子树脂交换等方法,从豆类丝核菌中分离到纯结晶,经薄板层析法发现,豆类丝核菌提取物浓缩的粗品液和苦马豆素标准品经Ｅｈｒｌｉｃｈ’ｓ试剂显色后,二者均出现一椭圆形紫色斑点,且Ｒｆ值均为０．８１;气相色谱法研究发现,提取物纯品标样（１５．９４２０ｍｇ／Ｌ）与苦马豆素标准品在同一色谱条件下显示出完全一致的峰形,证明从豆类丝核菌中分离到的纯结晶是苦马豆素纯品。研究还     

豆类丝核菌次级代谢产物对肿瘤细胞超微结构的影响

通过建立种植性肝癌(H22)实体瘤动物模型,并给荷瘤小鼠灌胃含有苦马豆素(swainsonine,SW)且剂量分别为2.7mg/(kg·d)和16.2mg/(kg·d)的豆类丝核菌次级代谢产物稀释液,于灌药后16d剖检荷瘤动物并取肿瘤组织与肝组织制作超薄切片,透射电镜观察。结果表明,该次级代谢产物能抑制种植性实体瘤(H22)的生长和转移。因此,该次级代谢产物具有抗肿瘤药用价值。     

豆类丝核菌培养液中苦马豆素的分离纯化

探索从豆类丝核菌培养液中分离纯化苦马豆素的有效方法。密封保存的豆类丝核菌培养液经过过滤、索氏抽提(8~12 h),正丁醇萃取以及乙醇洗脱等一系列方法处理后,得到粗品,在90℃下减压升华后得到白色粉末物质。层析法(TLC)和气相色谱法初步鉴定其中含有微量苦马豆素。     

豆类丝核菌次级代谢产物抗肿瘤作用的病理学观察

通过建立种植性肝癌(H22)实体瘤动物模型,并给荷瘤小鼠灌胃含有苦马豆素(swainsonine,SW)且剂量分别为2.7mg·kg-1·d-1和16.2mg·kg-1·d-1的豆类丝核菌次级代谢产物稀释液,分别于灌药后8d、16d剖检荷瘤动物并取肿瘤组织与肝组织制做石蜡切片,HE染色,普通光镜观察。结果表明,该次级代谢产物能抑制种植性实体瘤(H22)的生长和转移。因此,该次级代谢产物具有抗肿瘤药用价值。     

豆类丝核菌次级代谢产物对阿霉素所致小鼠骨髓和心肌毒性的保护作用研究

探讨了豆类丝核菌次级代谢产物对阿霉素(ADR)所致小鼠骨髓抑制及心肌损伤的保护作用。建立小白鼠骨髓抑制和心肌损伤模型。检测血常规,描记心电图,测定血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。心肌组织石蜡切片,HE染色,光镜观察。结果表明阿霉素4 mg.kg-1可致小白鼠骨髓抑制和心肌损伤。豆类丝核菌次级代谢产物可抑制阿霉素引起的白细胞数、红细胞数、血红蛋白量的减少;使心率加快,心电图Q波振幅减小,QRS波时间缩短和S-T段回升;降低血清CK、LDH活力,增强心肌SOD活力,降低MDA含量,减轻心肌组织损伤。豆类丝核菌次级代谢产物对ADR所致小白鼠骨髓和心肌毒性有一定的保护作用。     

东莞市耕地环境质量的压力-状态-响应分析与评价

基于"压力-状态-响应"模型建立了耕地环境质量评价框架及其指标体系。以东莞市为研究样区,采集182个耕地土壤样品,测定其重金属含量,结合东莞统计年鉴中的社会经济数据,对东莞市耕地环境质量进行评价,并通过协调度模型对其稳定性进行分析。结果表明:东莞市28.2%的耕地处于良好和较好水平,主要分布在北部河网平原区,该区作为供水工程水源地,环境受到严格保护;56.1%的耕地处于警戒水平,处于较差水平的耕地占总面积的15.7%,没有耕地处于极差水平。主要影响因素为经济发展和工业"三废"排放压力、耕地自然性状及其耕作管理状态、农药化肥过量施用等不合理的农户响应措施。压力、状态、响应指数协调度较低的乡镇有南城、望牛墩、沙田、长安,其耕地环境质量不稳定,是耕地环境质量管控的重点区域。     

细菌强化修复电子废弃物污染农田土壤研究

通过富集、驯化、分离,从清远市电子废弃物拆解区污染土壤中得到四种耐性菌株,经菌落形态、扫描电镜分析以及16S r DNA技术鉴定得出菌株HS-01、JH-02、YB-03、JY-04分别为海水芽孢八叠球菌(Sporosarcina aquimarina)、佐吕间湖生芽孢八叠球菌(Sporosarcina saromensis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。选取非矿山型东南景天(Sedum alfredii)为实验植物,在温室盆栽实验条件下,强化修复模拟的Cd、Cu、Pb污染土壤。结果显示添加细菌JH-02的东南景天地上部重金属提取量相对最高,JY-04次之,均显著高于其他各组(P<0.05);重金属形态分析显示细菌JH-02与JY-04对土壤重金属的活化作用相对最好,可交换态含量明显高于其他两种细菌组与未加菌组(P<0.05)。实验结果表明,JH-02与JY-04这两种细菌可能通过代谢活动产生的分泌物溶解了土壤中重金属,最终促进了东南景天的提取以及根部重金属向茎叶中转移,可达到强化修复的效果,具有一定的应用前景。     

立枯丝核菌拮抗青霉菌筛选及抑菌机制初步研究

为筛选具有生防作用的青霉菌菌株并探索其作用机制,采用平板稀释法和对峙培养法,从宁夏回族自治区境内不同作物土壤中分离到18株青霉菌菌株,筛选到1株具有高效拮抗立枯丝核菌的生防菌P19,对立枯丝核菌丝生长抑制率达58.5%。利用光学显微镜观察P19对立枯丝核菌菌丝形态的影响,发现菌丝壁出现弯曲和畸形,原生质体凝结和溶解,菌丝被溶解等现象。结果表明,P19对立枯丝核菌具有明显的抑制作用,其生长对立枯丝核菌造成空间和营养方面的竞争,也可能是P19所含有的抗菌物质破坏立枯丝核菌的细胞壁,进而溶解菌丝内的原生质体,使立枯丝核菌的生长受到限制。     

iTRAQ-based quantitative proteomics analysis of defense responses triggered by the pathogen Rhizoctonia solani infection in rice

The soil-borne necrotrophic fungus Rhizoctonia solani is one of destructive fungi causing severe yield losses in various important crops. However, the host defense mechanisms against the invasion of this pathogen are poorly understood. In this study, we employed an iTRAQ-based quantitative proteomic approach to investigate host proteins responsive to R. solani using the resistant rice cultivar YSBR1. As a whole, we identified 319 differentially accumulated proteins (DAPs) after inoculation of rice plants with R. solani. Functional categorization analysis indicates that these DAPs cover a broad range of functions. Notably, a substantial portion of the DAPs are involved in cell redox homeostasis, carbohydrate metabolism, and phenylpropanoid biosynthesis, or belong to pathogenesis-related proteins, indicating that these processes/proteins play important roles in host defense against R. solani. Interestingly, all of the DAPs involved in photosynthesis and chlorophyll biosynthetic processes, and part of the DAPs involved in phenylpropanoid biosynthesis, show reduced accumulation after R. solani infection, suggesting that R. solani probably inhibits host photosynthetic system and phenylpropanoid biosynthesis to facilitate infection and colonization. In conclusion, our results provide both valuable resources and new insights into the molecular mechanisms underlying rice and R. solani interaction.     

花魔芋响应软腐病菌侵染初期的转录组分析

为探讨花魔芋抵御软腐病害的分子机制,分别以染病初期和健康的花魔芋球茎为材料进行转录组测序。结果表明,健康和染病初期花魔芋两组出现3222个差异表达基因,其中2660个基因上调表达,562个基因下调表达,差异表达基因主要涉及细胞组分、生物学过程及分子功能等生理生化过程。表达量上调和下调最大的前10个基因包含编码MiAMP1抗菌蛋白、热激蛋白、胰蛋白酶与蛋白酶抑制剂、胰凝乳蛋白酶抑制剂等与抗病相关的基因。GO功能分类和KEGG通路分析表明,类黄酮和苯丙烷类物质在花魔芋抵御软腐病菌侵染初期发挥重要作用。值得关注的是,硒化合物代谢、维生素B6代谢、类黄酮生物合成、N-聚糖生物合成及链霉素生物合成通路等抗病相关的差异表达基因在花魔芋染病初期全部或大部分受诱导表达。利用高通量测序获得大量花魔芋转录组信息,有助于挖掘与花魔芋抗软腐病相关的关键基因,也为魔芋抗病分子育种提供理论参考。