子宫内膜炎奶牛血浆TNF-α和IL-6的检测分析

奶牛子宫内膜炎发病率高、病程长,是引起奶牛不孕症的重要病因。检测产后子宫内膜炎患牛的细胞因子变化情况,对产后保健效果评价有重要的参考价值。本研究采用放射免疫法检测了根据临床诊断分组的4头子宫内膜炎患牛和11头健康奶牛血浆中TNF-α和IL-6的变化情况。结果显示,子宫内膜炎患牛的TNF-α和IL-6分别在产后14d和21d时显著低于健康奶牛。     

复宫散对子宫内膜炎模型家兔血液细胞因子TNF-α、IL-1α的影响

对家兔子宫内膜炎造模后,通过连续的复宫散、桃红四物汤给药,测定造模前后各组家兔血液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1α(IL-1α)的差异。结果表明:复宫散能显著降低子宫内膜炎模型家兔血液中TNF-α和IL-1α的含量(P0.01),而且降低程度与药物剂量呈正相关,相较常用的中药抗炎剂桃红四物汤,复宫散与之差异不显著,表明复宫散能减轻各种炎症因子对子宫及全身的影响,发挥抗炎作用,起到治疗子宫内膜炎的作用。     

姜黄素对致病性金黄色葡萄球菌的抑菌作用及子宫内膜炎大鼠血清中抗炎活性的影响

通过酶标比浊法、试剂盒法和邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷(ONPG)法测定姜黄素对致病性金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)生长曲线、细胞壁及细胞膜渗透性的影响。同时,构建大鼠子宫内膜炎模型,用ELISA试剂盒检测各试验组中白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化情况来监测治疗效果。结果显示:(1)姜黄素对致病性S.aureus的生长曲线、细胞壁和细胞膜渗透性均有影响,因而起到抑菌的效果。当姜黄素作用于菌体细胞后,使细菌细胞壁被损伤,从而使细胞膜的通透性增加,细胞结构被破坏,从而起到抑菌的效果。(2)姜黄素中、高剂量组和环丙沙星组能显著降低患子宫内膜炎大鼠血清中的IL-6、IL-8和TNF-α的浓度,而模型组这些炎性介质的浓度不断的升高。结果表明:姜黄素的抑菌效果最佳,优于环丙沙星;姜黄素能显著抑制子宫内膜炎大鼠血清中IL-6、IL-8和TNF-α的表达来发挥调控子宫内环境动态平衡。     

益母草碱对LPS诱导小鼠子宫内膜炎的抗炎作用研究

【目的】探究益母草碱对脂多糖(LPS)诱导小鼠子宫内膜炎的抗炎作用。【方法】将60只6～8周龄雌性C57小鼠随机分为6组：空白对照组,模型组,益母草碱低、中、高剂量组及地塞米松阳性对照组,每组10只。空白对照组经阴道灌注50μL PBS缓冲液,其余组经阴道灌注50μL LPS(1 mg/mL)建立小鼠子宫内膜炎疾病模型。造模后,益母草碱低、中、高剂量组分别腹腔注射7.5、15.0、30.0 mg/kg益母草碱,阳性对照组腹腔注射5.0 mg/kg地塞米松,每6 h 1次,连续3次。造模24 h后处死小鼠,测定各组小鼠子宫指数;通过HE染色观察子宫组织病理变化;采用ELISA法检测子宫组织白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等相关炎症因子含量及髓过氧化物酶(MPO)活性。【结果】与空白对照组相比,模型组小鼠子宫指数、子宫组织中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量与MPO活性均极显著升高(P<0.01);与模型组相比,不同剂量益母草碱能不同程度降低LPS诱导子宫内膜炎小鼠的子宫指数、子宫组织中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6...     

子宫内膜炎急性相蛋白与IL-6变化的研究

探讨急性相蛋白(C-反应蛋白、结合珠蛋白、血清淀粉样蛋白A)和细胞因子(IL-6)在不同程度的子宫内膜炎中的变化及其对子宫内膜炎的诊断意义.选用产后健康荷斯坦奶牛10头(N)为对照组;亚临床型子宫内膜炎组(SE),共28头;临床型子宫内膜炎组(CE),共30头,经颈静脉、子宫腔内分别获取血液样本及子宫分泌物,对其进行急性相蛋白和细胞因子的检测.结果表明,CE组和SE组血清和子宫分泌物中C-反应蛋白(CRP)、结合珠蛋白(Hp)、血清淀粉样蛋白A(SAA)和IL-6水平明显高于对照组(P<0.01),且CE组比SE组变化明显;在对照组子宫分泌物中未检测到Hp和SAA.随着子宫内细菌污染程度的加重,CRP、Hp、SAA、IL-6的水平也随着升高,血清和子宫分泌物中CRP、Hp、SAA、IL-6水平均可作为诊断子宫内膜炎的敏感指标.     

大肠杆菌对奶牛子宫内膜组织合成分泌IL-1β、IL-6和PGE_2的影响

基于奶牛子宫内膜组织体外培养方法,分别采用浓度为1×10~5,1×10~6 CFU/mL的致病性大肠杆菌处理体外培养的子宫内膜组织12,24 h后用HE染色方法评价组织损伤情况,ELISA法检测组织培养液上清中IL-1β,IL-6和PGE_2的分泌变化,RT-qPCR法检测IL-1β和IL-6基因表达变化。结果显示:与对照组相比,大肠杆菌分别处理12,24 h后奶牛子宫内膜组织中子宫内膜上皮细胞和腺上皮细胞脱落、坏死、崩解,并且显著提高奶牛子宫内膜组织IL-1β,IL-6和PGE_2的分泌及IL-1β和IL-6的mRNA的表达量。结果表明:成功建立了体外大肠杆菌型奶牛子宫内膜炎模型,且IL-1β,IL-6和PGE_2在大肠杆菌引起的奶牛子宫内膜组织炎症反应中发挥着重要的调控作用。     

脂多糖对体外培养奶牛子宫内膜上皮细胞子宫容受性因子表达的影响

试验旨在通过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导奶牛子宫内膜上皮细胞构建子宫内膜炎体外感染模型,研究子宫内膜炎对奶牛子宫容受性因子大分子转膜黏蛋白-糖蛋白1(MUC-1)、高度保守的分泌型WNT家族亚型糖蛋白(Wnt-7a)、β受体1(IFNAR1)、IFNAR2、Integrinαvβ3 mRNA及蛋白相对表达量的影响,进而阐明子宫内膜炎引起奶牛屡配不孕和繁殖率低下的机制。采用组织块法分离培养奶牛子宫内膜上皮细胞,免疫荧光方法鉴定细胞纯度,不同浓度LPS刺激子宫内膜上皮细胞,在不同时间点用CCK8测定细胞存活率,ELISA检测炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-8的分泌变化,实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测子宫内膜感染模型中子宫容受性因子MUC-1、Wnt-7a、IFNAR1、IFNAR2、Integrinαvβ3 mRNA及蛋白的表达变化。结果显示,通过组织块法纯化获得的奶牛子宫上皮细胞数量较多,经免疫荧光角蛋白染色证实纯度较高。采用CCK8测定细胞存活率发现,与对照组相比,浓度为0、5、10、50μg/mL的LPS作用6、12、24、48 h后,细胞活力无显著变化(P0.05);浓度为100μg/mL的LPS作用24 h时,细胞存活率显著低于对照组(P0.05),细胞培养上清中的IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量均显著高于对照组及低浓度组(P0.05),引起细胞的炎症反应。与对照组相比,模型组MUC-1 mRNA及蛋白的相对表达量均极显著增加(P0.01);Wnt-7a mRNA及蛋白的相对表达量均极显著下降(P0.01);Integrinαvβ3、IFNAR1和IFNAR2 mRNA相对表达量均极显著下降(P0.01),蛋白相对表达量均显著下降(P0.05)。结果表明,浓度为100μg/mL的LPS作用24 h可成功构建子宫内膜炎体外感染模型,子宫内膜炎对奶牛子宫容受性因子MUC-1、Wnt-7a、IFNAR1、IFNAR2、Integrinαvβ3 mRNA及蛋白表达的影响可能是引起奶牛屡配不孕和繁殖率低下的重要原因。     

致病性大肠杆菌诱导的小鼠子宫内膜炎模型建立

为探究致病性大肠杆菌(EPEC)诱导的子宫内膜炎的损伤机制,将24只8~10周龄、体重30~35 g的雌性小鼠随机分为4组,每组6只,3个炎症模型组分别使用留置针向小鼠子宫内灌注1×10⁶、1×10⁸、1×10¹⁰CFU/mL的大肠杆菌25μL,对照组向小鼠子宫内灌注等体积的生理盐水。24 h后进行剖检,通过观察组织病理学变化、ELISA检测细胞炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及炎症通路核因子κB(NF-κB)的水平。结果表明:1×10¹⁰CFU/mL大肠杆菌可使子宫内膜层与肌层无明显界限,中性粒细胞浸润情况增加(P<0.05),促进IL-6、IL-1β和TNF-α的表达(P<0.001),促进炎症通路NF-κB的激活(P<0.05)。综上,使用1×10¹⁰CFU/mL大肠杆菌灌注小鼠子宫24 h可成功建立子宫内膜炎模型,为进一步探究由大肠杆菌诱导的子宫内膜炎的损伤机制提供理论依据。     

脂多糖对体外培养奶牛子宫内膜上皮细胞子宫容受性因子表达的影响

试验旨在通过脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导奶牛子宫内膜上皮细胞构建子宫内膜炎体外感染模型,研究子宫内膜炎对奶牛子宫容受性因子大分子转膜黏蛋白-糖蛋白1（MUC-1）、高度保守的分泌型WNT家族亚型糖蛋白（Wnt-7a）、β受体1（IFNAR1）、IFNAR2、Integrin αvβ3 mRNA及蛋白相对表达量的影响,进而阐明子宫内膜炎引起奶牛屡配不孕和繁殖率低下的机制。采用组织块法分离培养奶牛子宫内膜上皮细胞,免疫荧光方法鉴定细胞纯度,不同浓度LPS刺激子宫内膜上皮细胞,在不同时间点用CCK8测定细胞存活率,ELISA检测炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-6、IL-8的分泌变化,实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测子宫内膜感染模型中子宫容受性因子MUC-1、Wnt-7a、IFNAR1、IFNAR2、Integrin αvβ3 mRNA及蛋白的表达变化。结果显示,通过组织块法纯化获得的奶牛子宫上皮细胞数量较多,经免疫荧光角蛋白染色证实纯度较高。采用CCK8测定细胞存活率发现,与对照组相比,浓度为0、5、10、50μg/mL的LPS作用6、12、24、48 h后,细胞活力无显著变化（P>0.05）;浓度为100μg/mL的LPS作用24 h时,细胞存活率显著低于对照组（P<0.05）,细胞培养上清中的IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量均显著高于对照组及低浓度组（P<0.05）,引起细胞的炎症反应。与对照组相比,模型组MUC-1 mRNA及蛋白的相对表达量均极显著增加（P<0.01）;Wnt-7a mRNA及蛋白的相对表达量均极显著下降（P<0.01）;Integrin αvβ3、IFNAR1和IFNAR2 mRNA相对表达量均极显著下降（P<0.01）,蛋白相对表达量均显著下降（P<0.05）。结果表明,浓度为100μg/mL的LPS作用24 h可成功构建子宫内膜炎体外感染模型,子宫内膜炎对奶牛子宫容受性因子MUC-1、Wnt-7a、IFNAR1、IFNAR2、Integrin αvβ3 mRNA及蛋白表达的影响可能是引起奶牛屡配不孕和繁殖率低下的重要原因。     

产后奶牛子宫内膜炎神经肽（SP、VIP）对子宫免疫调节的研究

本试验研究了急性产后子宫内膜炎神经肽（SP、VIP）变化,以探讨子宫内膜炎神经肽对子宫局部免疫的影响。对10头产后急性化脓性子宫内膜炎患牛进行子宫内膜及血清SP、VIP含量的检测,并选择10头产）06-8d健康的奶牛为对照组。结果表明,产后急性子宫内膜炎患牛子宫内膜及血清中SP含量显著升高,试验组与对照组差异极显著（P〈0．01）,而VIP含量显著降低,试验组与对照组差异极显著（P〈0．01）。急性产后子宫内膜炎属于局部炎症,其发生与神经肽（SP、VIP）浓度密切相关,sP含量的升高和VIP含量的降低对机体的免疫起调节作用。     

约氏乳杆菌对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症反应的影响

子宫内膜炎是影响奶牛生产的重要疾病之一,该病的有效防控至关重要。本试验探讨了约氏乳杆菌对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症反应的预防作用。约氏乳杆菌悬浮至10~4,10~5,10~6 CFU/mL后,与奶牛子宫内膜上皮细胞共同培养3 h,添加1 mg/L LPS处理3 h,检测趋化因子IL-8和促炎因子TNF-αmRNA、蛋白分泌量和NF-κB信号通路关键蛋白表达量。结果表明,LPS处理奶牛子宫内膜上皮细胞3 h后,IL-8和TNF-αmRNA和蛋白分泌量均显著上升(P0.05), 10~4 CFU/mL约氏乳杆菌预处理后IL-8、TNF-α表达和NF-κB信号通路关键蛋白均显著降低(P0.05),而10~5或10~6 CFU/mL约氏乳杆菌预处理并未影响IL-8和TNF-α表达。结果提示,约氏乳杆菌具有预防奶牛子宫内膜炎的作用,且10~4 CFU/mL表现出良好的抗炎效用。     

益母草对母猪子宫内膜炎、乳房炎和阴道炎防治效果研究

为了研究益母草对母猪子宫内膜炎、乳房炎和阴道炎的防治效果,选择胎次相近的待产母猪30头,随机分为3组,分别为益母草低剂量组、益母草高剂量组和对照组,对照组仅饲喂基础日粮,每组2个重复,每个重复5头猪。于产后统计母猪子宫内膜炎、乳房炎和阴道炎的患病头数,并检测产后血液中炎性因子水平。结果显示：益母草组子宫内膜炎、乳房炎、阴道炎的患病头数均低于对照组;益母草组炎症因子IL-6、TNF-α的分泌水平显著(P<0.05)低于对照组,但益母草低剂量组和高剂量组差异不显著(P>0.05)。本研究结果表明,在母猪日粮中添加益母草可以减少母猪产后子宫内膜炎、乳房炎和阴道炎的发生率,具有一定的抗炎效果,适宜的添加剂量需要进一步研究。     

中药宫炎散治疗奶牛子宫内膜炎的免疫机制研究

为了研究中药对奶牛子宫内膜炎的免疫机制,试验采用给患有明显子宫内膜炎症状的奶牛早、晚各灌服宫炎散1次,连用7 d,采集血清,检测血清中IgA、IgG和细胞因子IL-1β、TNF-α含量的方法。结果表明:在用药后第5天和第7天,治疗组血清IgA、IgG含量极显著高于疾病组(P0.01);用药后第1天,治疗组血清IL-1β含量显著降低(P0.05),在用药后第3天、第5天和第7天极显著低于疾病组(P0.01);血清TNF-α含量在用药后第1天、第3天、第5天和第7天均极显著低于疾病组(P0.01)。说明中药复方制剂宫炎散能够增强子宫内膜炎患牛的免疫防御机能,调节血清促炎细胞因子水平,对奶牛子宫内膜炎有一定的防治作用。     

子宫内膜炎奶牛子宫组织β-防御素及相关因子的表达

为了探讨奶牛子宫内膜组织中β-防御素、TNF-α和TLR4mRNA表达与炎症发生的关系。取奶牛子宫内膜组织,根据病理切片结果分成子宫内膜炎组和对照组,用RT-PCR分别测定各组的β-防御素、TNF-α和TLR4的mRNA。结果发现,子宫内膜炎组的LAP、BNBD5的mRNA表达极显著高于对照组(P<0.01),BNBD4的mRNA表达显著高于对照组(P<0.05),奶牛子宫内膜组织不表达TAP;且子宫内膜炎组的TNF-α和TLR4的mRNA表达显著高于对照组(P<0.05)。结果表明,奶牛子宫内膜炎的发生与β-防御素、TNF-α和TLR4都具有密切相关性,其中LAP、BNBD4和BNBD5这3种β-防御素参与奶牛子宫内膜炎的发生;TNF-α和TLR4可以作为炎症发生的信号分子。     

子宫内膜炎奶牛血液生化分析

奶牛子宫内膜炎是发生在牛子宫内膜上的炎症,为了探索奶牛子宫内膜炎发生时血液生化指标的变化特点,本实验以患子宫内膜炎奶牛为研究对象,与正常奶牛做对比实验。结果显示:患牛Ca、P显著下降,其他指标没有显著变化;2例炎症严重的病牛,谷草转氨酶AST和磷酸激酶CK远远高于平均值,呈离群状态。这些指标变化为子宫内膜炎的诊断治疗提供参考。     

乳杆菌联合壳聚糖季铵盐对奶牛子宫内膜上皮细胞炎症的影响

本试验旨在探究魏斯氏乳杆菌(L. weissella)、唾液乳杆菌(L. salivarius)和约氏乳杆菌(L.johnsonii)联合壳聚糖季铵盐(CQN)对奶牛子宫内膜炎的影响。通过乳酸脱氢酶(LDH)释放检测法筛选致病性大肠杆菌(EPEC)最佳处理浓度和时间,建立奶牛子宫内膜上皮细胞炎症模型。诱导细胞炎症后,单独添加0.01 mg/mL CQN、108CFU/mL乳杆菌处理以及乳杆菌联合CQN处理,ELISA法和RT-qPCR法检测细胞因子IL-6、IL-8和IL-10的变化。结果表明:单独添加3株乳杆菌处理与单独添加CQN处理均降低了IL-6的蛋白和mRNA表达(P0.05),但对IL-8的表达无显著影响;相比单独添加处理,约氏乳杆菌与CQN混合处理降低了IL-6和IL-8的表达(P0.05),并恢复了IL-6/IL-10和IL8/IL-10的平衡;与CQN混合处理后,约氏乳杆菌对奶牛子宫内膜上皮细胞的黏附率提升(P0.001)。结果提示,约氏乳杆菌联合CQN具有良好的抗炎潜力,可用于奶牛子宫内膜炎的治疗。     

子宫内膜基质金属蛋白酶-2、-9 mRNA表达与奶牛子宫内膜炎关系的研究

为探讨基质金属蛋白酶(MMPs)-2、MMP-9在奶牛子宫内膜炎中的作用机制,选用产后6～10d健康及患急性化脓性子宫内膜炎的中国荷斯坦奶牛各10头,分别为对照组和试验组,通过ELISA检测PGF2a、孕酮浓度;免疫组化检测子宫内膜Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原的表达;SYBR Green I荧光定量PCR检测子宫内膜MMP-2和MMP-9mRNA表达。结果表明:试验组PGF2a浓度极显著低于对照组(P<0.01),孕酮含量显著高于对照组(P<0.05),PGF2a与孕酮浓度呈显著负相关(r=0.893);试验组子宫内膜中Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原的表达量均高于对照组,差异极显著(P<0.01);MMP-2和MMP-9mRNA水平则显著低于对照组(P<0.01)。结果提示:产后子宫内膜炎病牛子宫内膜MMP-2、MMP-9低表达,导致Ⅰ型和Ⅳ型胶原降解受阻,使细胞外基质为子宫内膜细胞提供的刺激信号不足,子宫分泌PGF2a量少,黄体消退障碍,血清孕酮含量高;说明子宫内膜MMP-2、MMP-9mRNA表达对产后子宫内膜炎的发生和发展起促进作用。     

EP4受体参与调控大肠杆菌感染后奶牛子宫内膜组织中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达、分泌及组织损伤

为了研究EP4受体是否参与调控大肠杆菌感染后的奶牛子宫内膜组织中促炎性细胞因子的表达及组织损伤,试验以体外培养的奶牛子宫内膜组织为研究对象,利用实时荧光定量PCR、ELISA和石蜡切片H.E.染色法检测EP4受体途径对大肠杆菌感染后的奶牛子宫内膜组织中白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达和分泌情况,并观察EP4受体激动剂(CAY10598)对子宫内膜组织损伤情况的影响。结果表明:与空白对照组比,大肠杆菌感染组感染12 h后IL-1β、IL-6、TNF-α的表达和分泌量均极显著升高(P0.01);与大肠杆菌感染组比,大肠杆菌+CAY10598共同作用组共同培养12 h后,IL-1β、IL-6、TNF-α的表达和分泌量均极显著升高(P0.01),奶牛子宫内膜上皮细胞和腺细胞崩解、脱落。说明EP4受体参与大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达和分泌及组织损伤。     

EP2受体对大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织中IL-1β和IL-6 mRNA表达的影响

为了研究前列腺素E2(PGE_2)受体-EP2受体对大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织中炎性因子的影响,本试验分别用1×10~(-8)～1×10~(-5 )mol/L的EP2受体激动剂(Butaprost)处理大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织,培养12 h,并选取Butaprost的有效作用浓度处理大肠杆菌感染的子宫内膜组织8,12和24 h,用RT-qPCR法检测IL-1β和IL-6 mRNA的表达,同时用HE染色技术观察组织形态结构。最后,在大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织中加入1×10~(-5 )mol/L的EP2受体阻断剂(AH6809),以验证EP2受体对IL-1β和IL-6 mRNA表达的特异性作用。结果显示:当10~(-7)mol/L的Butaprost处理大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织12 h时,对IL-1β和IL-6基因表达的促进作用最为明显,并且能够加剧大肠杆菌引起的奶牛子宫内膜组织的病理性损伤;AH6809能够有效阻断Butaprost对IL-1β和IL-6基因表达的促进作用。结果表明,EP2在调控大肠杆菌引起的奶牛子宫内膜组织的炎性损伤中发挥重要的作用,为更加高效地治疗细菌性奶牛子宫内膜炎提供理论依据。     

复宫散对子宫内膜炎模型家兔血液白细胞及6-K-PGF_(1α)和TXB_2表达的影响

为探讨复宫散对子宫内膜炎模型家兔部分血液学指标的影响,制备家兔子宫内膜炎模型,连续给药4d后采血,对血液中6-酮-前列腺素F1α(6-K-PGF_(1α))、血栓素B_2(TXB_2)浓度变化以及白细胞分类计数变化进行测定。结果表明,与模型组相比,中、高剂量复宫散组能显著降低白细胞总数、中性粒细胞数量、中性粒细胞百分比以及6-K-PGF1α浓度(P0.05),并能显著提高血液中淋巴细胞数量、淋巴细胞百分比以及TXB_2浓度(P0.05)。说明复宫散对子宫内膜炎家兔模型通过调整血液中白细胞种类和数目变化以及6-K-PGF_(1α)和TXB_2的含量可能是其治疗子宫内膜炎的机制之一。