油菜抗菌核病突变体筛选方法研究

为获得油菜抗菌核病的抗源材料，进行了油菜抗菌核病突变体筛选方法的研究，用油菜种子未成熟胚或成熟胚在ＭＳ－１培养基上诱导油菜愈伤组织，继代４－５次后用含草酸６００ｍｇ／Ｌ的Ｃａ＾２＋ＭＳ－１培养基２－４ｍｍ大小的愈伤组织９６ｈ，筛选获得的耐毒素愈伤组织移至ＭＳ－２培养基上获得再生小植株。     

甘蓝型油菜（Brassica napus L）抗菌核病性（Sclerotinia sclerotiorum）鉴定

在田间和实验室采用捣碎菌丝体接种，黑麦粒接种和草酸浸根３种方法分别对１５个甘蓝（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ）春油菜品种（系）进行了抗（耐）菌核病性（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）的鉴定。结果没有发现高抗基因型，但是甘蓝型品种（系）之间存在着感染菌核病轻重程度的显著差异。１５个甘蓝型品种（系）在田间和实验室３种方法鉴定试验中感染菌核病的轻重程度排列顺序基本相似。田间鉴定方法     

油菜抗菌核病突变体筛选及抗性鉴定

用草酸毒素作筛选剂处理油菜愈伤组织，获得耐毒素的突变体，分化培养后得到小量再生植株。经用毒素处理离体时，油菜菌本报讯病 菌菌丝体接咱离体叶和田疃植株及田间病圃测定几种方法鉴定显示，所获得于生植的品系（２２４－２）相比较，均不同程度提高了对菌核病的抗性，其Ｆ１代材料保持了抗性Ｆ２代材料抗生有一定的分化，但大 的仍保持了抗性，其中有Ｓ１１、Ｓ２１、Ｓ２３、Ｓ２４、Ｓ２５、Ｓ２６几个材料具有较明显的抗性     

甘蓝型油菜品种（系）对菌核病抗（耐）病性的测定

用草酸浸根和黑麦粒接种两种方法分别对来自中国和加拿大等国的１５个春性和１６个冬性、半冬性甘蓝型油菜品种（系）进行了抗（耐）菌核病的鉴定。结果没有发现高抗类型，但是甘蓝型油菜品种（系）之间存在着感染菌核病轻重程度的显著差异。     

草酸降解菌的筛选及其对油菜菌核病的生物防治作用

采用以草酸作为惟一碳源的培养基筛选草酸降解菌，获得对培养基pH具有明显调节作用的3株代表菌：AODU－1，AODd-2和AODd-3。用高效液相色谱系统（HPLC）测定其草酸降解率，其中AODU-1的草酸降解率最高。用草酸降解菌AODU－1，W－1和WB（W－1与油菜菌核病菌拮抗菌B2的混合物）对菌核病进行油菜离体叶片的室内防病试验以及油菜的田间防治试验。在室内试验中，经AODU-1处理后，油菜叶片菌核病的发病率与病斑面积分别比对照减少44．75％和55．29％；而经W－1处理后则分别比对照减少50．28％和67．06％。在田间试验中，经AODU－1、W－1和WB处理后，油菜病株率与病情指数均比对照显著降低（P＜0．05）。     

甘蓝型油菜高芥酸材料的筛选与评价

为了给高芥酸品种选育提供优异种质,选育出丰产性好、芥酸含量高的甘蓝型油菜品种,以200份甘蓝型油菜资源为材料,采用田间鉴定和室内品质分析相结合的方法进行高芥酸材料的筛选。结果显示:芥酸含量在50%以上的材料有16份,其中,T6431-1芥酸含量最高(54.0%),其次是T6429-1(53.9%)和T6429-3(53.5%)。平均产量较相邻对照(中油119)增产达20%以上的材料有3个:T6434-5、T6446-1和T6455-4。综合评价:T6434-5和T6446-1的芥酸含量较高,抗倒伏,综合农艺性状和丰产性较好,可作为高芥酸品种直接应用或作为高芥酸品种选育的优良资源材料;T6431-1的芥酸含量较高、千粒重大、含油量高,但由于其角粒数少,丰产性略差,可对其丰产性进行改良后应用。T6429-1和T6429-3的芥酸和含油量均较高,但一次有效分枝数和角粒数较少、主花序短、丰产性稍差,对其农艺性状进行改良后可用于高芥酸品种选育的资源材料。     

甘蓝型油菜化学杀雄药剂的筛选

以蓝型油菜1109及0607为材料,对6种药剂进行化学杀雄效果的筛选,结果表明,每株用药量10ml,喷药2次,1109用Trim的0.25-0.5ug/ml与药剂Pyrm的0.25-3ug/ml浓度处理,1607用Trim的0.25-1.5ug/ml与Pyrm的1.5-3ug/ml的浓度处理,对其有较好的杀雄效果。     

甘蓝型油菜品种（系）对菌核病抗（耐）病性的测定

用草酸浸根和黑麦粒接种两种方法分别对来自中国和加拿大等国的１５个春性和１６个冬性，半冬性甘蓝型油菜品种（系）进行了抗菌核病的鉴定。结果没有发现高抗类型，但是城蓝型油菜品种（系）之间存在着感染菌核病轻重程度的显著差异。     

甘蓝型无花瓣油菜对菌核病抗（耐）性研究

油菜开花期间,病菌子囊孢子能传播到花器官的各个部分,在脱落飘散的花器官中,花萼带菌的几率最高,有花瓣油菜花萼带菌平均为99.3％,雄蕊和花瓣次之,分别为92.0％和92.3％。无花瓣油菜花萼带菌也高于雄蕊。在花朵数相等的条件下,无花瓣品系花器官带菌几率的总和比四瓣油菜相对减少33.0～36.4％,平均为34.1％。与对照种相比,盛花后无花瓣品系的叶片间接受侵率明显低于对照种,成熟前植株间接受侵率相对减轻32.0～47.1％。植株间接受侵率(x)与病指(y)(y含直接和间接受侵)之间存在显著的正相关关系(r=0.6287),表明病情严重度随着植株间接受侵率提高而加重。     

芸芥(Eruca sativa Mill.)对菌核病的抗性研究

 经对芸芥和甘蓝型油菜进行苗期菌丝块接种鉴定和花期带菌牙签鉴定表明,芸芥品种总体抗性水平高于甘蓝型油菜。所鉴定的32个芸芥品种中,抗病品种22个,占供试品种68.8％,感病品种10个,占供试品种31.2％,没有中感和高感品种。所鉴定的32个甘蓝型油菜品种中,抗病品种10个,占供试品种的31.3％,感病品种22个,占供试品种的68.8％。在芸芥中有毛类型与无毛类型有一定差异,有毛类型抗性较强。当接种菌核菌后,芸芥体内酚类物质含量迅速增加,36h后达较高水平,以后略有升高。     

真菌激发子诱导油菜抗菌核病研究

为了提高油菜对菌核病的抗性,利用病原菌激发子喷施油菜植株,分析其防御体系中酚类物质的变化及对病原菌入侵的抗性.结果表明,多糖激发子和细胞壁激发子均能迅速激活油菜的免疫机制,促进酚类物质的合成,多糖激发子诱导后96 h多酚含量达到最大值(0.229 mg/g),细胞壁激发子诱导120 h后多酚含量达到最大值(0.267 mg/g),且提取的植物多酚在体外培养条件下对油菜菌核病菌的菌丝生长有显著的抑制作用,特别是细胞壁激发子诱导组的提取物抑菌率可达60.70％.这说明病原菌激发子可以用于油菜菌核病的防治.     

甘蓝型油菜BnEIN3基因克隆及菌核病诱导表达

[目的]探讨甘蓝型油菜EIN3（BnEIN3）基因与菌核病抗性的关系。[方法]根据GenBank中已公布的拟南芥EIN-3基因的保守区及甘蓝型油菜EST序列,设计特异性引物,分别进行基因组PCR和RT-PCR扩增,克隆BnEIN3基因。对菌核病不同抗性的3个油菜品种中BnEIN3的表达进行荧光定量PCR检测分析。[结果]克隆得到1947bp的基因片段,与拟南芥EIN3一致性高达82%,有完整的开放阅码框,编码614个氨基酸,其中包含1个EIN3结构域,初步认定该片段为油菜BnEIN3基因。在高抗品种（D083）中,菌核病在侵染后期快速诱导BnEIN3上调表达,且显著高于中抗（中双9号）及高感品种（84039）中该基因的表达水平。在中抗及高感品种中,菌核病均抑制BnEIN3的表达,且中抗品种BnEIN3表达量一直大于高感品种。[结论]BnEIN3可能与油菜对菌核病抗性相关。     

甘蓝型油菜BnEIN3基因的克隆及菌核病诱导表达研究

乙烯不敏感转录调节基因（EIN3）是定位于细胞核上的乙烯信号转导下游元件,其作为转录因子启动一系列转录级联反应,从而激活乙烯诱导的防御相关基因的表达。拟南芥EIN3功能缺失突变体表现出对死体营养型病原菌高度敏感,表明该基因在抗死体营养型病原菌中发挥一定作用。为克隆甘蓝型油菜EIN3（BnEIN3）基因,该研究采用荧光定量PCR研究菌核病不同抗性的油菜品种接种核盘菌后,BnEIN3的表达变化及差异,初步探讨了BnEIN3在油菜菌核病防卫反应中的作用。     

甘蓝型油菜防御酶活性变化与抗病性的关系

对不同抗性油菜品种7～8叶期及盛花期感染油菜菌核病后及对照叶片中几种重要防御酶类活性变化的研究结果表明：7～8叶期叶片SOD活性极显著高于盛花期，而盛花期POD、PPO、PAL活性显著或极显著高于7～8叶期。与对照相比，感病品种处理叶片中SOD、POD活性显著增加，而抗病品种变化较小且因品种而异；7～8叶期及盛花期处理叶片中，各品种(系)PPO活性有不同程度的下降，其中抗(耐)菌核病品种(系)下降达显著水平，并且中R888达极显著水平；7～8叶期各品种(系)处理叶片中PAL活性没有明显变化，盛花期各品种(系)处理叶片中PAL活性均显著地下降，并以抗(耐)菌核病品种(系)下降较多，其中，中R888的PAL活性的下降达极显著水平。酶活与病斑直径的相关性分析也表明，品种抗性主要与7～8叶期对照叶片中SOD、POD活性及盛花期对照SOD、PPO、PAL活性水平较高有关，感病品种处理叶片中防御酶活性与对照相比增加比例较高，说明酶活增加比例与感病性有关。不同时期不同品种(系)防御酶活性的变化不同说明不同抗(耐)菌核病品种(系)在不同的发育时期存在不同的抗病机制。     

~(32)P的吸收、转运与甘蓝型油菜抗菌核病性的关系

用32P示踪法研究了不同抗性油菜品种3叶期及盛花期感染菌核病后磷素吸收与转运的变化。研究结果表明:磷素向着生长旺盛部位转运;接种后植株磷素吸收增强而且磷素向着接种叶富集,感病品种甚于抗病品种;经相关性分析,第2位叶(接种叶)、第3位叶磷素放射性活度提高幅度显著且与抗性成显著或极显著负相关。这说明磷素的吸收、转运与抗性有密切的关系。在盛花期,花果中磷素放射性活度呈上升趋势,宁RS-1和宁油7号叶中的磷素放射性活度都先上升后下降,但前者上升的幅度较大,而且后期下降缓慢;宁油7号茎中的磷素放射性活度呈稳定下降趋势,而宁RS-1表现为先上升后又下降。这说明抗病材料有较强的生理活性来抵抗病害。     

油菜蕾薹期和花期菌核病接种方法比较

核盘菌引起的菌核病是油菜重要病害。为建立快速有效的油菜菌核病抗性鉴定方法,在油菜花期采用4种人工接种方法测定了5种油菜资源对菌核病的抗病性,并分析采用不用接种方法测定的病斑大小之间的相关性。这4种方法分别为:离体叶片接种、离体茎段接种(牙签法)、活体茎秆接种(牙签法)、活体叶柄接种(吸头法)。这4种接种方法中,离体叶片接种法与其余3种方法的鉴定结果均没有显著相关性;采用叶柄接种法,接种后11 d和19 d的病斑长度与离体茎段接种3 d和7 d的病斑长度之间的相关性显著(P0.05),相关系数分别为0.866和0.821,与活体茎秆接种7 d和15 d的病斑长度极显著相关(P0.01),相关系数分别为0.952和0.987。结果表明移液管介导的叶柄接种是一种便捷、可靠的油菜菌核病抗性鉴定方法。     

Reaction of Oilseed Rape Cultivars to Sclerotinia Stem Rot in Field Environments

Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary, as an ubiquitous phytopathogenic Ascomycete fungus capable of infecting a wide range of plants, has increased in importance for oilseed rape production worldwide in recent years. The objective of this research was to determine the effectiveness of two measurements of disease rating in predicting the field reaction of cultivars to sclerotinia stem rot. One hundred and ten cultivars or lines of oilseed rape were repeatedly evaluated the disease severity index (DSI) and lesion length for their resistance to nine isolates of S. sclerotiorum in two field stations.There were greatly significant differences between two stations, among isolates, among population of cultivars for the disease severity index and lesion length, and also significant station×isolate interaction for lesion length and population×isolate interactions for DSI and lesion length, but interactions of station×isolate for DSI were not significant.Cultivars such as Pomorzanin and Lisek consistently had the lowest disease severity ratings in the field tests. However,most of cultivars were susceptible to sclerotinia stem rot in the field test. A positive correlation between the mean DSI and lesion length was found for both isolates (Sc23 and B1). The correlations ranged from 0.23 to 0.83 at various plots, with nine of the twelve correlations significant. The correlations for disease caused by different fungal isolates were statistically significant difference. These correlations ranged from -0.44 to 0.90, with nine of the thirty-two correlations significant. It indicated that resistance to some isolates was significantly correlated and selection of some varieties for resistance to one isolate appeared to improve resistance to other isolates.     

人工合成高抗菌核病甘蓝型油菜几种关键酶编码基因的表达与其抗性的关系

【目的】研究人工合成高抗菌核病甘蓝型油菜RB165的几种关键酶编码基因与菌核病抗性的关系。【方法】以RB165及其野生甘蓝抗病亲本BP（Brassica incana）和耐、感病甘蓝型油菜为试材,离体鉴定叶、茎菌核病抗性,并用qRT-PCR对4个病程相关基因（OXO、Cu/Zn SOD、PR2和PR3）在叶片接种0、6、12、24、36 h的表达进行检测。【结果】参试材料叶片和茎杆的抗病性达到极显著正相关（r = 0.93）; RB165的抗病性低于RP,但极显著高于耐、感病品（种）系;接种核盘菌后,OXO的表达被抑制,Cu/Zn SOD的表达则先下降后上升,PR2的表达出现2次峰值,PR3的表达被剧烈诱导,4个基因在不同材料间的相对表达量差异极显著,但变化规律相似。【结论】RB165的抗病性强于耐病甘蓝型油菜,但几种酶编码基因受核盘菌的诱导表达与菌核病抗性没有直接关系。     

共培养基对甘蓝型油菜下胚轴GUS瞬间表达及转化效率的影响

为提高根癌农杆菌介导的甘蓝型油菜遗传转化效率,以甘蓝型油菜"湘油15"下胚轴为外植体,以MS为基本培养基,研究了共培养基中α-NAA和6-BA浓度对根癌农杆菌介导法转化甘蓝型油菜过程中下胚轴GUS基因瞬间表达及转化效率的影响。结果表明,共培养基对GUS基因的瞬间表达和稳定表达具有重要影响,但共GUS基因的瞬间表达率和转化效率之间没有明显的线性关系。