猪瘟活疫苗耐热保护剂冷冻干燥技术研究

摘　要：随着猪瘟活疫苗耐热保护剂的不断应用,冻干技术的要求也越来越高。通过对冻干工艺的不断研究,采取预冻阶段快速和慢速降温,一期升华阶段选取不同温度等方法,筛选一条合适的冻干曲线,不仅缩短冻干时间,降低生产能耗,而且有利产品质量稳定,为今后耐热保护剂的冷冻干燥提供了研究方向。     

病毒性活疫苗的运输、储存与耐热冻干保护剂

活疫苗从出厂到使用，一般要经历如下过程：     

仔猪副伤寒活疫苗生产工艺的改进

在仔猪副伤寒活疫苗生产中,通过改进大种的生产工艺,使菌液冻干前菌数和冻干后活菌数明显提高,几批产品都达到30头份/瓶以上,为及时生产出质量可靠的疫苗提供了保障。     

羊传染性脓疱病毒耐热冻干保护剂筛选及冻干曲线优化

采用冻干试验筛选出保护剂基础配方,再通过Plackett-Burman设计法筛选主要保护剂基质,然后通过Box-Behnken响应面分析法对羊传染性脓疱病毒(ORFV)耐热保护剂配方进一步优化,用冻干试验进一步验证筛选出1种针对ORFV保护效果最好的耐热冻干保护剂作为疫苗用候选配方。同时,依据前期试验获得的活疫苗冻干曲线,通过进一步优化,获得疫苗最佳冻干曲线。利用该冻干工艺冻干的疫苗,保护剂的保护率可达95.3%,且疫苗各项指标均达到《中华人民共和国兽用生物制品规程》要求。经37℃保存7,15,30d病毒滴度分别下降0.46,0.70,1.00;2~8℃保存3,6,12,24个月病毒滴度分别下降0.10,0.10,0.40,0.60,证明此配方制备的疫苗具有良好的热稳定性。本试验解决了ORFV细胞弱毒疫苗仅能在低温条件下保存和运输的瓶颈技术问题,使疫苗的储存、运输更为方便。     

瑞普生物获得重仔猪副伤寒耐热保护剂活疫苗注册证书

瑞普生物2月13日公告,全资子公司瑞普(保定)生物药业有限公司获得由农业部核发的一项新兽药注册证书,新兽药名称为重仔猪副伤寒耐热保护剂活疫苗(CVCC79500株),注册分类为三类。仔猪副伤寒是由沙门氏菌引起的一种传染病,以急性败血症、慢性坏死性肠炎为特征,常发于6月龄以下仔猪,如伴发或继发感染其他疾病或治     

江苏省农科院兽医研究所研制成功禽类耐热冻干保护剂活疫苗

目前，在我国禽类疫苗中，冻干活疫苗仍占比较大的比例，而国内以往普遍采用5％煎糖牛奶或煎糖明胶等组方简单、保护功能差的传统保护剂作为活疫苗的冻干保护剂，疫苗在2℃～8℃条件下保存时间普遍较短(4～6个月)，一般要求在-15℃以下保存，使成品疫苗的长期保存和运输受限，经常出现疫苗由于保存和／或运输原因引起效价降低甚至失效，导致免疫失败。     

耐药保护剂活疫苗冻干技术

以鸡传染性支气管炎耐热保护剂活疫苗为例,概述了耐热保护剂活疫苗冻干技术及其要点。     

耐热冻干保护剂与病毒性活疫苗的运输与储存

活疫苗从出厂到使用，一般要经历如下过程：     

猪支原体肺炎活疫苗(168株)生产工艺关键技术研究

肺炎支原体的培养和保存条件非常苛刻,是疫苗规模化生产的工艺难题。本文针对猪支原体肺炎活疫苗(168株)生产工艺关键技术进行研究。通过培养试验筛选四种培养基配方表明该疫苗株在低血清改良培养基中生长良好;优化发酵培养工艺,使其在发酵罐培养60～70 h的峰值可达到1010CCU/mL;设计筛选该疫苗耐热保护剂和冻干工艺,37℃下保存10 d的耐老化试验结果显示,下降滴度小于100.5CCU/mL。本研究为提供高效、安全和稳定的猪肺炎支原体疫苗产品奠定基础。     

牛病毒性腹泻病毒弱毒活疫苗免疫持续期的研究

为检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)弱毒活疫苗在免疫牛体内抗体产生及其消长规律,评价弱毒疫苗的保护效力,并确定免疫持续期,本试验对免疫试验牛每头颈部肌肉接种BVDV SM株弱毒疫苗104.5TCID50,监测血清抗体效价,进行免疫持续期的确定。在疫苗免疫后的6个月、9个月和12个月,分别抽取5头免疫组和5头对照组牛,采用BVDV-JL强毒株进行攻毒试验,每头牛攻毒剂量为6×107.0TCID50/mL。结果显示疫苗免疫后12个月时血清中和抗体效价仍维持在1∶1048以上。攻毒结果显示,在3个不同时间点进行强毒攻击后,免疫组所有动物白细胞数量都没有下降也没有分离到病毒,而对照组动物白细胞数下降均超过30%,6个月和9个月时动物血清中均能分离到病毒,而12个月对照组动物由于年龄大,没有分离到病毒,因此暂定此疫苗的免疫持续期为9个月。     

鸡马立克氏病1型（CVI988／Rispens）活疫苗的研制

鸡马立克氏病1型（CVI988／Rispens）活疫苗毒力稳定，免疫原性好。免疫期可持续1年半，在液氮中保存，有效期1年以上，免疫鸡临床保护率近100％，对预防各品种雏鸡马立克氏病有明显效果。     

猪支原体肺炎活疫苗(168株)的安全性研究

用健康易感仔猪进行同群感染试验和连续五代返强试验对猪肺炎支原体活疫苗(168株)进行安全性试验,同时也进行了该活疫苗单剂量、单剂量重复和大剂量试验及5批次疫苗免疫商品猪的临床试验。结果发现,猪支原体肺炎活疫苗(168株)免疫猪后,免疫猪和同群感染猪均未观察到典型的临床症状和病理变化;连续五代返强试验,试验猪均未观察到典型的临床症状和病理变化,说明该疫苗株未出现返强。单剂量、单剂量重复和大剂量试验及5批次疫苗的临床试验也未观察到不良反应。这说明受试批次猪支原体肺炎活疫苗(168株)具有良好的安全性。     

牛病毒性腹泻弱毒活疫苗免疫持续期的研究

为检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)弱毒活疫苗在免疫牛体内抗体产生及其消长规律,评价弱毒疫苗的保护效力,并确定免疫持续期,本试验对免疫试验牛每头颈部肌肉接种BVDV SM株弱毒疫苗10^4.5TCID₅₀/头,监测血清抗体效价,进行免疫持续期的确定。在疫苗免疫后的6、9和12个月分别抽取5头免疫组和5头对照组牛采用BVDV-JL强毒株进行攻毒试验,每头牛攻毒剂量为6×10^7.0 TCID₅₀/mL。结果显示疫苗免疫后12个月时血清中和抗体效价仍维持在1∶1048以上,攻毒结果显示3个时间点强毒攻击后,免疫组所有动物白细胞数量都没有下降也没有分离到病毒,而对照组动物白细胞数下降均超过30%,6和9个月动物均分离到病毒,而12个月对照组动物由于年龄大,没有分离到病毒,因此暂定此疫苗的免疫持续期为9个月。     

猪支原体肺炎活疫苗(168株)生产关键(环节)质量控制

文章针对猪支原体肺炎活疫苗(168株)生产用菌种的扩繁与鉴定、原辅材料、生产流程的优化、成品检验4个环节进行阐述,并根据实际情况提出内控标准,关键指标高于国家标准10倍,实现对猪支原体肺炎活疫苗(168株)的批量生产,使产品的稳定性及可靠性得到大幅度提升。     

鸡病毒性关节炎活疫苗对 SPF 鸡攻毒保护实验研究

本研究分别测定了两种病毒性关节炎活疫苗ZJS株和S1133株的TCID50。其中ZJS疫苗株的TCID50为104.5TCID50/羽份,S1133疫苗株的TCID50为103.5TCID50/羽份。通过进一步的攻毒保护实验,证实ZJS疫苗株对SPF鸡的临床保护力明显优于S1133疫苗株。     

两种冻干保护剂在禽病疫苗生产中的效果比较

试验证明，含１％的明胶和５％蔗糖液与含５％蔗糖牛奶作鸡新城疫弱毒冻干疫苗和鸡传染性支气管炎弱毒冻干疫苗的冻干保护剂，其免疫效果是相同的，即明胶蔗糖保护剂可以代替蔗糖牛奶保护剂，从而可降低生产成本     

用间接免疫荧光检测方法评价猪瘟兔化弱毒活疫苗效力的研究

为用体外试验方法评价猪瘟兔化弱毒活疫苗效力,以猪瘟病毒抗体（兔源）为一抗、荧光素标记羊抗兔IgG 为二抗,建立了CSFV兔化弱毒株的间接免疫荧光检测方法（ IFA）。特异性试验表明,用该IFA方法检测CSFV兔化弱毒株接种的RK细胞为阳性,而检测伪狂犬病毒、猪细小病毒病、牛病毒性腹泻/粘膜病毒接种的RK细胞均为阴性。 CSFV兔化弱毒株和活疫苗的兔体感染量（ RID）用兔体测定,半数组织感染量（ TCID50）用IFA测定,拟合RID与TCID50的线性回归方程,确定1RID/mL＝（ TCID50/0．1mL＋200）/12。