基于聚氨酯海绵载体的棘孢木霉固体发酵培养基筛选

以棘孢木霉Trichoderma asperellum THGY-01(CGMCC No:22422)为试验菌株,对其在聚氨酯海绵载体上固体发酵产孢的培养基种类、浓度及促进产孢元素进行了筛选与优化.以聚氨酯海绵载体的单位质量产孢量为指标,通过单因素试验法对11种碳源、6种氮源和14种无机盐(8种含大量元素,6种含微量元...     

深绿木霉TA-9分生孢子固体发酵的响应曲面法优化

前期研究中分离获得深绿木霉Trichoderma atroviride菌株TA-9,其在田间试验中具有较好生物防治效果.本研究通过Plackett-Burman试验设计及Box-Behnken设计-响应曲面法(response surface methodology,RSM)对影响深绿木霉TA-9菌株发酵的培养基和培养...     

棘孢木霉对向日葵幼苗抗氧化酶活性及菌核病防效的影响

试验于2021年5—8月,采用筛选出的对向日葵菌核病菌有较好拮抗作用的棘孢木霉Trichoderma asperellum 581,通过盆栽试验,测定不同施用浓度对向日葵幼苗生长、抗氧化酶活性以及对向日葵菌核病防效的影响。结果显示：T.asperellum 581不同施用浓度均能提高对向日葵菌核病的防效,以T3(即木霉菌处理浓度为1×10⁵个·mL^-1)应用效果最好,对向日葵菌核病的防效达到98.77%。与CK1(即只利用向日葵菌核病菌灌根且不施用木霉悬浮液)相比,T.asperellum 581不同施用浓度均能提高向日葵幼苗株高、茎粗、全株鲜质量和根冠比,以T3处理对向日葵幼苗形态建成和物质积累的促进效果最好,株高、茎粗、全株鲜质量、全株干质量、根冠比和壮苗指数分别比CK1提高64.71%、193.55%、99.15%、188.24%、50.00%、416.67%;T.asperellum 581不同施用浓度均能提高向日葵幼苗叶片中过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、抗坏血酸过氧化...     

海洋生境棘孢木霉TCS007菌株的鉴定及抑菌活性

为研究一株分离自南极海洋沉积物的菌株TCS007的分类地位、菌株抗逆性能及抑菌活性,采用形态及ITS序列分析对菌株进行了鉴定;比较了低温、高温及高盐3种胁迫条件下与正常条件下TCS007的菌丝生长差异,以评价菌株的抗逆性能;通过平板对峙试培养法测定了TCS007对16种植物病原真菌的抑菌谱;用乙酸乙酯提取TCS007发酵滤液中的代谢产物,并通过菌丝生长速率法测定了其对油菜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum的抑制活性。结果显示:TCS007菌株被鉴定为棘孢木霉Trichoderma asperellum,并展现出在高盐胁迫下具有良好的抗逆性能;其对16种供试植物病原真菌的抑制率在56.65%~87.62%之间,其中对小麦全蚀病菌Gaeumannomyces graminsis的抑制活性最高。TCS007发酵滤液乙酸乙酯提取物对油菜菌核病菌具有明显的抑制作用,其EC₅₀值为38.80 μg/mL。研究结果表明,TCS007及其代谢产物具有拮抗植物病原真菌的生防功能,具有开发成生物农药的潜在价值。     

生防棘孢木霉T31菌株的分离筛选及其生物学特性

为评价具有生防潜力的棘孢木霉,采用平板对峙法、对扣培养法、圆盘滤膜法从长白山土样中分离筛选出木霉菌株T31,结合形态学及分子生物学分析对其进行种类鉴定,并采用菌丝生长法研究了该菌株的生物学特性。所分离的菌株T31被鉴定为棘孢木霉Trichoderma asperellum,该菌株对8种靶标菌的抑菌率在44.49%~77.91%之间,其中,对玉米大斑病菌Exserohilum turcicum、核盘菌Sclerotinia sclerotiorum、腐霉菌Pythiumuhtimum sp.及镰刀菌Fusarium sp.均有较强生长竞争优势,对玉米灰斑病菌Magnaporthe oryzae具明显重寄生作用。菌株T31的最适培养基为PDA培养基,最适生长温度为30 ℃、最适产孢温度为25 ℃,最适pH值为6。持续光照可以促进木霉菌孢子产生,Zn²⁺、Mn²⁺、Ca²⁺和Mg²⁺利于菌丝生长,但是高浓度的Fe²⁺和Cu²⁺抑制菌丝生长,Mn²⁺和Mg²⁺可促进产孢。此外,与普通木霉菌相比,该菌株具有耐寒性及耐盐性。     

不同发酵条件对木霉产孢类型的影响

木霉T2 3固体发酵以产生分生孢子为主。液体发酵可以通过控制培养条件来生产不同类型的孢子。马铃薯葡萄糖培养液、马铃薯蔗糖培养液等可作为生产厚垣孢子的培养基 ;木霉T2 3的孢子类型和产孢速度受温度影响。在适于木霉生长的温度范围内 ,2 4℃以下产生厚垣孢子 ,最大产孢量为 1 0 6× 1 0 8个 /ml。 2 8℃以上形成分生孢子 ;30℃时产孢量最大 ,为 1 99×1 0 8个 /ml,温度越高产孢速度越快。初始pH值低易产生厚垣孢子 ,pH值高易产生分生孢子。适当降低液体发酵的供氧量 ,有利于厚垣孢子的形成     

海洋生境棘孢木霉菌TCS007对植物的促生长及诱导抗逆作用

为研究海洋生境棘孢木霉菌Trichoderma asperellum TCS007对植物的促生长及诱导抗逆作用,以黄瓜和水稻为试材,评价菌株TCS007对植物种子萌发、幼苗和根系生长等生长量及其对叶绿素、可溶性糖和蛋白含量的影响,并在低温和高盐胁迫条件下,研究其对植株生长相关生理指标影响。结果表明:1 × 106 CFU/mL的TCS007孢子悬浮液可以显著促进黄瓜种子萌发,且处理后黄瓜幼苗的株鲜重、叶面积、根鲜重及根系活力分别提升13.53%、17.97%、66.67%和27.30%,总叶绿素、可溶性糖和可溶性蛋白含量分别增加22.75%、18.24%和8.60%;在5 ℃、10 ℃和15 ℃低温胁迫下,1 × 106 CFU/mL的TCS007孢子悬浮液显著提高了黄瓜叶片中过氧化物酶 (POD) 和超氧化物歧化酶 (SOD) 的活性,降低了丙二醛 (MDA) 含量和相对电导率 (REC);在0.1 mol/L的氯化钠 (高盐) 胁迫下,不同含量的TCS007孢子悬浮液均可显著缓解氯化钠对水稻幼苗的盐害作用,且随着孢子含量的增高,缓解效果越为明显,其中添加5% 1 × 106 CFU/mL TCS007孢子悬浮液的水稻幼苗POD、SOD和过氧化氢酶(CAT)活性均显著增加并能降低其REC。综上,棘孢木霉菌TCS007对植物具有良好的促生长效果和诱导抗逆作用,研究结果可为其开发成为新型生物农药提供理论依据。     

棘孢木霉GYSW-6m1对草莓炭疽病的生防机制及其防病促生作用研究

探究棘孢木霉GYSW-6m1对草莓炭疽病的生防机制、盆栽防治效果及其促生作用,为筛选用于草莓炭疽病绿色防控的高效生防菌提供资源及应用技术。采用平皿培养法、显微镜观察法和盆栽灌根法测定了棘孢木霉GYSW-6m1对草莓炭疽病的生防机制、盆栽防效及其对草莓幼苗的促生效果。结果显示,棘孢木霉GYSW-6m1对草莓炭疽菌LC0220具有较强的竞争、抗生和重寄生作用,菌株GYSW-6m1能迅速占领营养空间,对峙培养3、5和7 d对病菌LC0220抑制率分别为68.06%、71.03%和79.03%,病菌LC0220在含有菌株GYSW-6m1发酵代谢产物平板上培养3、5和7 d抑菌率分别为79.18%、75.81%和76.13%,菌株GYSW-6m1挥发代谢物对病菌LC0220菌丝生长几乎没有抑制作用,菌株GYSW-6m1菌丝可通过接触、缠绕和穿透病菌LC0220的菌丝并引起菌丝消解断裂。菌株GYSW-6m1对草莓炭疽病具有较好的盆栽防治效果,处理LC0220+GYSW-6m1防效最显著,防效高达87.23%,处理GYSW-6m1（3 d）+LC0220和LC0220（3 d）+GYSW-6m1防效分别为52.72%和44.76%。棘孢木霉GYSW-6m1对草莓幼苗具有明显的促生效果,株高、根长、植株总鲜重和植株总干重均显著增加,促生率分别为7.96%、10.42%、22.54%和34.21%。棘孢木霉GYSW-6m1可以作为一种重要的生防资源用于草莓炭疽病的防治,具有一定的实用开发潜力。     

海洋生境棘孢木霉TCS007缓解蚕豆干旱胁迫的研究

木霉属真菌(Trichoderma spp.)是一类有益微生物,不仅能促进植物生长,还能诱导植物对生物和非生物胁迫产生耐受性。实验室前期分离获得一株来自南极海洋沉积物的菌株TCS007,并鉴定其为棘孢木霉Trichoderma asperellum,研究表明,TCS007可显著提高植物抗盐、抗寒能力。本文以蚕豆为试材,从生理生化水平上研究了TCS007在诱导植株抗旱性方面的作用。采用温室盆栽法对不同处理条件下蚕豆的各项生理生化指标进行了测定。结果表明：在干旱胁迫下,经TCS007孢子悬浮液处理的蚕豆幼苗的株高、株重、根鲜重和总叶绿素含量相较于空白对照(CK)分别增加了28.7%、42.9%、34.2%和26.2%;叶片中的总糖、总蛋白含量和相对含水量在不同的时间点分别增加了11.1%～106.0%、38.0%～68.8%和7.0%～19.0%;蚕豆根、茎和叶中超氧化物歧化酶(SOD)活性分别增加了28.8%、13.3%和8.0%,过氧化物酶(POD)活性分别增加了10.8%、22.4%和14.8%,丙二醛(MDA)含量分别降低了37.2%、14.7%和12.1%;此外,蚕豆根、茎和叶中...     

棘孢木霉SFC-3菌剂对小麦生理生化特性及小麦孢囊线虫的影响

采用盆栽试验探讨了不同剂量棘孢木霉SFC-3菌剂对小麦生理生化指标及生防效果的影响。结果表明：施用SFC-3菌剂对小麦的株高和主根长度没有明显影响（P>0.05）,但可提高小麦的出芽率,当施菌剂量为1.0~2.0 g/kg时小麦的出芽率显著高于对照（P<0.05）;施用SFC-3菌剂小麦叶片中叶绿素含量和可溶性蛋白含量与对照相比均显著增加(P<0.05),其中施菌剂量为1.0 g/kg时最高。而小麦叶片中的MDA含量在施菌剂量为1.0 g/kg时显著低于对照和其他施菌处理（P＜0.05）;当施菌剂量为0.5~1.0 g/kg时,小麦叶片中SOD和POD活性显著高于对照,进一步增加施菌剂量,小麦叶片中SOD和POD活性均随之显著降低（P＜0.05）。当施菌剂量为1.5 g/kg和2.0 g/kg时每克根中小麦孢囊线虫2龄幼虫数量最少,发病级别最低,其相对防效分别为88.68%和87.04%,其次为施菌剂量1.0 g/kg的处理,其相对防效为80.50%。施用不同剂量的棘孢木霉SFC-3菌剂对小麦生理生化指标均有不同程度的影响,并且当施菌剂量为1.0 g/kg时对小麦生长和孢囊线虫的防治效果最好。     

甲基营养型芽胞杆菌BMF 04固态发酵条件优化及其对黄瓜幼苗生长的影响

甲基营养型芽胞杆菌Bacillus methylotrophicus BMF 04是本实验室从连云港海域分离纯化得到的对多种植物病原真菌有较强抗菌作用的优良生防菌株.为进一步开发应用该菌株,以细菌总数和芽胞率为指标,通过单因素和响应面试验设计,优化固态发酵培养基配方和发酵条件,采用室内盆栽试验,测定发酵物对黄瓜幼苗生长...     

棘孢木霉菌鉴定及其对花生白绢病生防机制的研究

为了利用生防菌有效防控花生白绢病Sclerotium rolfsii,本研究采用稀释培养法从花生根际土中分离木霉菌,采用平板对峙法和盆栽试验筛选对花生白绢病具有高效生防效果的菌株并测定其生防机制,通过形态学、分子生物学技术和环境因子对发育的影响确定生防菌株的分类地位及生物学特性。结果表明,从分离的132株木霉菌中筛选出1株对齐整小核菌S.rolfsii具有高效抑菌效果的菌株GH-20,抑菌率达89.93%,将其鉴定为棘孢木霉菌Trichodermaasperellum。对峙培养时,菌株GH-20对齐整小核菌的拮抗指数达Ⅰ级,当其菌落覆盖病原菌菌落后,其菌丝缠绕和侵入病原菌菌丝,并使病原菌菌丝体逐渐消解、减少,导致病原菌不能产生菌核;菌株GH-20产生的挥发性代谢产物（volatile gas,VOG）和非挥发性代谢产物（non-VOG）对病原菌的抑菌率分别为59.95%和79.49%。盆栽试验结果表明,同时接种菌株GH-20和齐整小核菌对花生白绢病生防效果最好,为79.64%。另外,该菌株具有在以果糖为碳源,以酵母膏为氮源和pH7的条件下生长发育较好,光照有利于生长而光暗交替有利于孢子...     

Systemic resistance induced in Arabidopsis thaliana by Trichoderma asperellum SKT-1, a microbial pesticide of seedborne diseases of rice

BACKGROUND: Trichoderma asperellum SKT-1 is a microbial pesticide of seedborne diseases of rice. To investigate the mechanisms of disease suppression in SKT-1, the ability to induce systemic resistance by SKT-1, or its cell-free culture filtrate (CF), was tested using Arabidopsis thaliana Col-0 plants. RESULTS: Both SKT-1 and its CF elicit an induced systemic resistance against the bacterial leaf speck pathogen Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000 in Col-0 plants. Involvement of plant hormones in the induced resistance by SKT-1 and CF was assessed using Arabidopsis genotypes such as the jasmonic acid (JA)-resistant mutant jar1, the ethylene (ET)-resistant mutant etr1, the plant impaired in salicylic acid (SA) signalling transgenic NahG and the mutant npr1 impaired in NPR1 activity. In soil experiments using SKT-1, no significant disease suppression effect was observed in NahG transgenic plants or npr1 mutant plants. Expression levels of SA-inducible genes such as PR-1, PR-2 and PR-5 increased substantially in the leaves of Col-0 plants. Expression levels of JA/ET-induced genes such as PDF1.2a, PR-3, PR-4 and AtVsp1 were also induced, but the levels were not as high as for SA-inducible genes. In a hydroponic experiment using CF from SKT-1, all Arabidopsis genotypes showed an induced systemic resistance by CF and increased expression levels of JA/ET- and SA-inducible genes in leaves of CF-treated plants. CONCLUSION: The SA signalling pathway is important in inducing systemic resistance to colonisation by SKT-1, and both SA and JA/ET signalling pathways combine in the signalling of induced resistance by CF. These results indicate that the response of A. thaliana is different from that found in root treatments with barley grain inoculum and CF from SKT-1. Copyright © 2011 Society of Chemical Industry     

烟草尖孢镰刀菌拮抗真菌的筛选鉴定及促生作用研究

为获得烟草镰刀菌根腐病拮抗真菌菌株,试验以河南省豫中烟区烟草根际土壤为试材,以主要致病菌尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum为主要靶标,采用稀释涂布平板法分离获得土壤真菌371株,平板对峙培养法测定获得1株具有明显抑制效果的拮抗菌株,利用形态学和分子生物学的方法将其鉴定为棘孢木霉Trichoderma asperellum Tr-0111。抑制效果测定表明,该菌株对尖孢镰刀菌的抑制率最高可达93.13%,对根串珠霉菌、拟茎点霉、链格孢菌等其他8种烟草病原菌均具有较强的抑制效果。促生作用测定结果表明,菌株发酵液使烟草种子萌发率提高5.34%,烟苗根长增长率为62.39%,对盆栽烟草的最大叶面积和地上部鲜重也具有显著的促生效果。为进一步相关机理的研究和生防菌剂的研制奠定了基础。     

木霉菌对黄瓜幼苗生长和膜脂过氧化指标的影响及对枯萎病的防治效果

本文开展了3种生防木霉菌,包括棘孢木霉Trichoderma asperellum 525、哈茨木霉T.harzianum 610和拟康氏木霉T.pseudokoningii 886防治黄瓜枯萎病的盆栽试验,研究这3种木霉菌对黄瓜幼苗生长、膜脂过氧化指标的影响及对黄瓜枯萎病的防治效果。结果表明,木霉菌对黄瓜枯萎病的田间防治效果均达到78%以上,且以棘孢木霉525的田间防治效果最高,达到81.53%。与只接种枯萎病病原菌的对照相比,3株木霉菌单独接种或与黄瓜枯萎病病原菌同时接种均可以显著提高黄瓜幼苗株高、茎粗、叶面积、根体积、地上部鲜重、地下部鲜重,显著提高黄瓜叶片超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、多酚氧化酶（PPO）活性,显著降低质膜透性和丙二醛（MDA）含量,其中以拟康氏木霉886单独接种促进效果最强。研究表明,3种木霉菌通过促进黄瓜幼苗生长,增强植物抗氧化酶活性,降低质膜透性和丙二醛含量,从而提高对黄瓜枯萎病的抗性。     

Effects of elevated CO2 on the development and physiological metabolic activities of Nilaparvata lugens in response to the infection of Trichoderma asperellum

Trichoderma spp. are widely used in agriculture as biofungicides. In this study, effects of elevated CO₂ on the growth and enzyme activities of Nilaparvata lugens infected by T. asperellum were studied. The results showed that fecundity of N. lugens adversely decreased under elevated CO₂ relative to ambient CO₂ irrespective of infection with T. asperellum. The contents of protein and alkaline phosphatase significantly decreased in N. lugens nymphs with T. asperellum infection under elevated CO₂ relative to ambient CO_2. Significantly higher activities of carboxylesterase and acetylcholinesterase were observed in N. lugens infested with T. asperellum under elevated CO₂ compared with ambient CO₂. While significantly lower catalase and glutathione S-transferase were observed in N. lugens nymphs infested by T. asperellum under elevated CO₂ relative to ambient CO₂. Measuring the antioxidases and detoxification enzymes in N. lugens infected with T. asperellum can partly explain the response of fitness parameters of N. lugens under elevated CO₂.     

紫杉木霉突变株UL60-11产木霉菌素的发酵条件优化

为了提高紫杉木霉Trichoderma taxi ZJUF0986突变株UL60-11木霉菌素的产量,采用单因素试验筛选出菌株UL60-11生长及产素的最佳碳氮源为葡萄糖、淀粉、蛋白胨、酵母粉、酒石酸铵;通过均匀设计与正交试验相结合优化出最佳培养基配方：葡萄糖23g、淀粉15g、蛋白胨5g、酵母粉3g、酒石酸铵2g、硫酸镁0.25g、磷酸二氢钾1.0g、氯化钠0.2g、硝酸钙0.4g。在最适工艺条件：初始pH4.0、温度25℃、种龄48h、10%接种量1、00ml/500ml的装液量和150r/min下摇瓶发酵试验,木霉菌素产量达到632.16μg/ml,比优化前提高32%。     

Trichoderma harzianum TUV-13对鱼腥草白绢病的防治及其促生长作用

应用抗腈菌唑标记的Trichoderma harzianum TUV-13的分生孢子制剂对鱼腥草Houttuynia cordata进行种茎浸泡和土壤处理。结果表明,两种处理均可促进鱼腥草种茎提早发芽、发根,并提高植株生物量。种茎浸泡处理对芽根萌发、地上部分生长的促进效果较好,而土壤处理则对提高地下茎产量效果更明显;两种方法当年对由Sclemtium rolfsii引起的白绢病的田间防效均可达70%以上,两年后在田间自然状态下,对该病仍有较好的防治作用。其中土壤处理两年后,对白绢病的防效为68.2%。木霉回收试验结果表明,TUV-13菌株可在土壤中较好地定殖,2年后其种群数量为2.31×105cfu.g-1,是土著木霉菌数量的289倍。